應用紫外-可見分光光度法測定金剛乙胺

陳國，許秀琴

(寧波市農業科學研究院，浙江 寧波 315101)

在畜牧養殖上，金剛乙胺等抗病毒類藥物主要用于雞禽流感的預防和早期治療，以及豬傳染性胃腸炎的防治，但其致精神異常的副反應以及日增的耐藥性對畜產品消費者產生較大的安全風險，同時長期大量使用這些抗病毒類藥物會使禽流感的病毒產生變異，給防控工作帶來巨大困難，因此，2005年12月金剛乙胺等藥物已被禁止使用。然而，仍有一些獸藥制劑中非法添加金剛乙胺類藥物，最終給人類的健康造成巨大危害。金剛乙胺的測定方法主要集中于高效液相色譜-串聯質譜法[1-5]，但檢測費用很昂貴，很多小型實驗室并不具備這種條件。筆者經過大量研究發現，用紫外-可見分光光度法，利用金剛乙胺溶于氯仿的特性測定金剛乙胺的含量，結果令人滿意。

1 材料與方法

1.1 材料

鹽酸金剛乙胺對照品(中國藥品生物制品檢定所，產品編號100969)；鹽酸金剛乙胺片(浙江普洛康裕制藥有限公司，規格為每片0.1 g)，所用輔料為藥用規格，試劑苯二甲酸氫鉀、溴甲酚綠、二氯甲烷、氫氧化鈉、鹽酸均為分析純，水為超純水。Blue-Star B型紫外分光光度計(北京萊伯泰科儀器有限公司)。

溴甲酚綠溶液配制。取溴甲酚綠50 mg，加入0.7 mL 0.1 mol·L-1氫氧化鈉溶液溶解，加入50 mL 0.1 mol·L-1鄰苯二甲酸氫鉀與3.5 mL 0.1 mol·L-1鹽酸溶液，用純水定容至100 mL。

1.2 方法

1.2.1 測定波長選擇

稱取鹽酸金剛乙胺標準品25 mg，用0.1 mol·L-1的鹽酸溶液溶解，定容至100 mL，再逐級稀釋成1.0 mg·L-1標準儲備液；另取金剛乙胺片處方所用輔料，按照上述方法配制輔料溶液。量取標準品儲備液2 mL于50 mL離心管中，加5 mL水和3 mL溴甲酚綠溶液，再加入10 mL氯仿，振搖提取5 min，待靜置分層后，取氯仿溶液于離心管中，離心10 min，取澄清氯仿液，于320～460 nm波長范圍內掃描。

1.2.2 方法學考察

標準曲線繪制。準確量取標準儲備液0、0.1、0.2、0.3、0.4、0.5、0.6 mL于50 mL離心管中，按照1.2.1的測定方法進行操作，在359 nm波長處測定樣品的吸光度(Absorbance值)，進行線性回歸，回歸方程為y=4.268x+0.108，R2=0.999。

穩定性試驗。取系列標準溶液中濃度為0.01 mg·L-1的標準品溶液，在359 nm波長處分別間隔1、2、4、8、10、12 h，測定其吸光度。

溫度影響試驗。取同樣濃度為0.01 mg·L-1的標準品溶液，將其溫度分別調至20、25、30、35、40 ℃后測定吸光度。

純度重現性試驗。對同一樣品同時做6個平行試驗，測定鹽酸金剛乙胺純度，按照1.2.1方法對樣品進行測試。

加標回收試驗。準確稱取9份鹽酸金剛乙胺各0.2 g，加入不同含量的鹽酸金剛乙胺標準品，按照1.2.1方法進行測試。

1.2.3 鹽酸乙胺片的測定

稱取1片鹽酸乙胺片(精確0.000 1 g)樣品置于10 mL容量瓶中，用0.1 mol·L-1的鹽酸溶液溶解并定容，精密吸取1.0 mL置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，再吸取1.0 mL置于100 mL容量瓶中，加水至刻度，搖勻，進行逐級稀釋得到中間液，濃度為1 mg·L-1。精密吸取0.2 mL濃度為1 mg·L-1的中間液，按照1.2.1進行同樣操作，并于359 nm處進行測定(3批樣品，每批平行測定5次，取平均值)，代入回歸方程。同時稱取輔料0.1 g按照上述樣品同樣操作，于359 nm處進行測定。

2 結果與分析

2.1 測定波長

經過波長掃描，結果在359 nm波長處有最大吸收，而輔料在該波長處幾乎無吸收，故選擇359 nm波長為測定波長。

2.2 方法學指標

2.2.1 標準曲線

線性回歸表明(圖1)，鹽酸金剛乙胺在0.01～0.06 mg·L-1濃度范圍內線性關系良好。

圖1 不同濃度鹽酸金剛乙胺與吸光度的線性關系

2.2.2 穩定性

由表1可知，12 h內采用不同時間節點，測定標準液2次，所獲7組試驗數據均值為0.151，相對標準偏差(RSD)為1.6%。測定結果表明，該標準溶液在12 h內吸光度無明顯變化，穩定性良好。

表1 不同時間點測定對吸光度的影響

2.2.3 溫度

由表2可知，不同溫度條件下，吸光度無明顯變化，RSD為0.5%，可見在20～40 ℃內對測定值無影響。

表2 溫度對吸光度的影響

2.2.4 純度重現性

同一樣品6個平行試驗，純度測定結果分別為98.4%、98.8%、100.1%、99.7%、101.1%、100.8%，平均純度為99.8%，RSD為1.1%，表明方法重現性良好。

2.2.5 加標回收率

測試結果見表3。在不同添加水平條件下，平均回收率分別為98.5%、98.6%、98.8%，RSD值在0.4%～0.8%。試驗表明，在不同添加水平條件下，回收率試驗結果良好。

表3 鹽酸金剛乙胺添加回收試驗結果

2.3 鹽酸乙胺片的測定

測試結果見表4，3批鹽酸金剛乙胺樣品，每片平均含量分別為0.099 6、0.101 1、0.099 8 g，對應標示量分別為100.0%、100.1%、99.8%。在輔料對比試驗中，輔料在359 nm處無吸收峰，排除了輔料對鹽酸金剛乙胺測定的干擾。

表4 鹽酸金剛乙胺片測定結果

3 小結

本文建立了紫外-可見分光光度法測定鹽酸乙胺的含量，方法簡便、快捷、準確，在對鹽酸乙胺片進行測定時，同時應用該方法對輔料進行了測試，結果發現，輔料對測定結果并不產生影響，應用該方法可實現小型實驗室對于鹽酸乙胺測定的需求。