血清YKL-40蛋白水平與肝硬化患者肝功能、肝纖維化的相關性及作用機制

侯永強 王新征

河南科技大學第一附屬醫院普外三科 (河南 洛陽， 471003)

以往認為，血清YKL-40蛋白水平與腦梗死、糖尿病、冠心病、哮喘、癌癥等疾病的發生發展密切相關，因此通過檢測YKL-40蛋白水平，能夠對相關疾病的診斷起到指導作用[1，2]。近年來有研究表明，肝硬化患者的血清YKL-40蛋白水平要明顯高于正常人群，因此也可將血清YKL-40蛋白水平作為診斷肝硬化的檢測指標之一[3]。目前關于YKL-40蛋白水平診斷肝硬化的臨床研究較少。因此，本文以肝硬化患者為研究對象，分析其血清YKL-40蛋白水平對肝硬化的診斷意義，并探討其與患者肝功能、肝纖維化的相關性及作用機制，現報道如下。

1 對象與方法

1.1 研究對象 選擇2016年6月至2017年5月本院收治并確診為肝硬化的患者62例為實驗組，男37例，女25例；年齡30～72歲，平均(52.7±7.4)歲；體重41～75 kg，平均(62.5±6.5)kg；病程2～13年，平均(61.0±1.7)年。其中酒精性肝硬化23例，乙型肝炎肝硬化18例，自身免疫性肝硬化21例。同期遵循1∶1匹配原則，以性別、年齡、體重等指標作為匹配條件，篩選62例來院健康體檢的正常人作為對照組，男35例，女27例；年齡31～70歲，平均(53.5±8.2)歲；體重43～76 kg，平均(61.8±8.4)kg。研究經過醫院倫理委員會審核批準，且均簽訂知情同意。

1.2 納入與排除標準 納入標準：①符合肝硬化診斷標準；②年齡16～63歲；③HBV感染6個月以上，HBV DNA>1.0×105拷貝/ml；④簽訂知情同意書并完成治療者。排除標準：①合并重要臟器嚴重疾病者；②合并肝性臟病、上消化道大出血、肝腎綜合征者；③妊娠、哺乳期婦女及過敏體質者；④惡性腫瘤患者。

1.3 檢測指標 采用ELISA檢測兩組人員血清YKL-40蛋白水平，操作嚴格按試劑盒說明書進行。同時測定兩組人員凝血酶原時間(PT)、血清膽固醇(Cho)、總膽汁酸(TBA)、白蛋白(Alb)、膽堿酯酶(Che)、總膽紅素(TBil)、天冬氨酸氨基轉移酶(AST)、丙氨酸氨基轉移酶(ALT)。儀器：微孔板洗板機(BioteKELx50，美國寶特公司)，全自動酶標儀(上海市歐儀器公司)，全自動生化分析儀(7600-20c，日本日立公司)。

1.4 檢測方法

1.4.1 血清YKL-40蛋白檢測 于早晨、空腹情況下，采集兩組人員下腔靜脈血，3 000 rpm離心10 min，分離血清樣本待檢。①將20 μl稀釋后的待檢樣本與標準品、質控品依次加入人CHI3L1抗體包被微孔板中，37 ℃下孵育1 h以形成抗原抗體復合物。②將抗原抗體復合物重復洗板4次后加入生物素標記的抗人CHI3L1抗體，37 ℃下繼續孵育1 h。③繼續進行5次洗板，然后加入HRP標記的親和素，避光條件下孵育1h。④再次進行5次洗板，加入四甲基聯苯胺底物系統后反應15 min，然后以終止液終止反應。⑤觀察顯色從藍色漸漸轉至黃色后，30 min內在全自動酶標儀下讀取并計算YKL-40的濃度[4，5]。

1.4.2 肝功能檢測 采用全自動生化分析儀測定兩組人員血清PT、Cho、TBA、Alb、Che、TBil、AST、ALT水平。計算FIB-4指數，FIB-4指數=(年齡×AST)÷(PLT×ALT)。

1.4.3 肝纖維化檢測 采用肝穿刺技術對肝硬化患者進行檢測，穿刺前需要完善患者的肝功能、凝血功能等檢查。穿刺時常規消毒穿刺點皮膚，以2%利多卡因局部浸潤麻醉，用穿刺針取出患者的肝臟組織1～2條。于福爾馬林液體中固定，4 h后依次進行脫水、石蠟包埋、切片，進行病理檢查。輕度(S0-S1)為無瘢痕或輕度瘢痕；中度(S2-S3)瘢痕超出血管區或橋接纖維化；重度(S4)肝硬化或晚期肝纖維化。

2 結果

2.1 肝功能不同分級患者血清YKL-40蛋白的檢測情況 見表1。

表1 肝功能不同分級患者血清YKL-40蛋白的檢測結果比較

2.2 不同程度肝纖維化患者血清YKL-40蛋白檢測結果 見表2。

表2 不同程度肝纖維患者血清YKL-40蛋白結果比較

2.3 不同類型肝硬化患者血清YKL-40蛋白檢測結果 見表3。

表3 3種類型肝硬化患者血清YKL-40蛋白檢測結果比較

2.4 兩組人員血清YKL-40蛋白、肝功能各項指標檢測結果 見表4。

表4 兩組人員YKL-40蛋白、肝功能各項指標結果比較

2.5 YKL-40蛋白水平與患者肝功能，肝纖維化的相關性Pearson相關性分析實驗組患者YKL-40蛋白水平與FIB-4指數、肝功能Child-Pugh分級、肝纖維化嚴重程度均呈明顯正相關性(r=0.248、0.271、0.362，P均<0.05)。

3 討論

YKL-40是1992年由Johansen等在人軟骨瘤細胞株MG63中發現的一種糖蛋白[6]。之后，YKL-40的研究不斷深入，目前已發現其在多種腫瘤(如淋巴瘤、中樞神經系統腫瘤、惡性膠質瘤等)以及心血管炎性疾病、神經性炎性疾病等患者的血清中表達量增高[7～9]。近年來有研究發現，肝癌患者血清YKL-40蛋白水平會呈現明顯的增高趨勢，可作為診斷肝癌與判斷不良預后的指標之一[10]。但是，血清YKL-40蛋白水平是否會對其他炎癥基礎上發展起來的肝疾病有診斷意義，目前臨床鮮有報道。

本文以肝硬化患者為研究對象，分析YKL-40蛋白水平在其血清中的表達情況，并與62例體檢健康受試者進行比較，結果發現肝硬化患者血清YKL-40蛋白水平顯著高于健康人群，提示其對診斷肝硬化具有一定的指導意義。觀察不同Child-Pugh分級、不同肝纖維化程度患者的YKL-40蛋白水平，結果顯示，肝功能分級越高以及肝纖維化程度越嚴重，患者血清YKL-40蛋白水平越高。這提示血清YKL-40蛋白水平對評估患者病情嚴重程度及預后也具有較高的應用價值，這一研究結論與Kumagai 等[11]、Tao等[12]的研究結果相符。

本研究根據患者的肝硬化類型進行分析，結果不同類型肝硬化(酒精性肝硬化、肝炎肝硬化、自身免疫性肝硬化)患者血清YKL-40蛋白水平無明顯差異，提示不同類型肝硬化也均是由炎癥發展而來，而血清YKL-40蛋白參與、介導了多種炎癥疾病的發生與發展，因此不同類型的肝硬化均會存在YKL-40蛋白水平上升現象。

綜上所述，血清YKL-40蛋白水平可作為肝硬化疾病的診斷指標之一，其對判斷肝功能與肝纖維化嚴重程度也有一定意義，能夠為肝硬化患者的治療與預后提供指導作用。