香砂養胃丸中枳實質量標準的改進

程雅婷，王曉云，王艷博，王健，劉凱娜，王學濤，楊新宇，鄭斕

1.秦皇島市食品藥品檢驗中心，河北 秦皇島 066004；2.正大青春寶藥業有限公司，浙江 杭州 310000

香砂養胃丸為納入我國基本醫療保險目錄的甲類非處方藥，處方由木香、砂仁、白術、陳皮、茯苓、半夏(制)、醋香附、枳實(炒)、豆蔻(去殼)、姜厚樸、廣藿香、甘草、生姜、大棗十四味藥組成，具有溫中和胃的功效[1]。方中陳皮、枳實均源自蕓香科植物，含大量橙皮苷，其中甜橙的橙皮苷含量又遠高于酸橙[2-10]。《中華人民共和國藥典》2015年版一部中對橙皮苷進行了含量測定并規定了限度，用以同時控制陳皮、枳實的質量，方法不僅專屬性差，難以對二者質量進行區別考察，且橙皮苷含量受枳實品種影響大，難以客觀反應陳皮、枳實的內在質量。筆者以枳實的專屬性成分——辛弗林為指標，采用HPLC[11-15]測定香砂養胃丸中辛弗林的含量[16-17]，為控制枳實的含量提供依據，對藥品標準進行了完善，可用于香砂養胃丸的質量控制。

1 抽驗情況及發現問題

2017年河北省評價性抽驗中，共抽取香砂養胃丸(水丸)34批次，抽樣單位涉及全省11個地市，涵蓋全國5個省市的13家生產單位。其中經營單位抽樣27批次，醫療單位抽樣2批次，生產單位抽樣5批次，分別占抽樣總數的79.4%、5.9%、14.7%。

按《中華人民共和國藥典》2015年版一部檢驗橙皮苷的含量，全部符合規定，但不同批次樣品間結果差異巨大。橙皮苷為蕓香科柑橘屬植物共有的抗氧化及抗炎活性成分[1-10]，在香砂養胃丸處方中，為陳皮、枳實共有。陳皮來源單一，原植物為蕓香科植物橘及其栽培變種，枳實有兩種基原，原植物分別為蕓香科植物酸橙及甜橙。筆者通過比較液相色譜圖并與生產廠家溝通，分別確認了每一批樣品中枳實的基原，并根據制劑中選用枳實的不同基原對橙皮苷含量進行箱式圖分析，結果顯示，以甜橙生產的香砂養胃丸橙皮苷含量高，以酸橙生產的成藥橙皮苷含量低。見圖1。橙皮苷的含量受枳實基原影響，難以客觀反應處方中陳皮、枳實的含量，現行標準收載的香砂養胃丸方法中選擇橙皮苷作為指標成分同時控制陳皮、枳實的質量存在不妥。

圖1 不同基原枳實生產的香砂養胃丸橙皮苷含量對比箱式圖

2 枳實指標成分的選定

2.1 儀器

島津LC-20AT高效液相色譜儀；METTLER TOLEDO AG-135電子天平。

2.2 試藥

辛弗林對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110727-201608，純度99.9%)；橙皮苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號：110721-201617，純度96.1%)；甲醇、磷酸二氫鉀、十二烷基磺酸鈉(美國MREDA公司，色譜純)；水為純凈水；冰醋酸為分析純(天津市風船化學試劑科技有限公司)。

枳實飲片共15批，其中酸橙9批(Y1～Y9)，甜橙6批(Y10～Y15)，分別產自江西(Y1、Y2)、湖南(Y3、Y4、Y12)、浙江(Y5、Y6)、四川(Y10、Y13、Y14)等地，另有部分為安國藥材市場自購(Y7、Y11、Y15)及藥品生產廠家提供(Y8、Y9)。

2.3 方法與結果

15批枳實樣品分別按照《中華人民共和國藥典》2015年版一部枳實項下方法測定辛弗林的含量，又按照香砂養胃丸項下方法測定橙皮苷的含量，并根據枳實的不同基原分別對辛弗林和橙皮苷的含量進行箱式圖分析，結果顯示，甜橙中橙皮苷含量高，酸橙中橙皮苷含量低。不同基原枳實中橙皮苷含量差異大，與成藥香砂養胃丸的測定結果一致，辛弗林差異較小，更適合作為枳實質量控制的指標成分。見圖2～3。

圖2 不同品種枳實辛弗林含量對比箱式圖

圖3 不同品種枳實橙皮苷含量對比箱式圖

3 含量測定方法的建立

3.1 儀器

同2.1項下儀器。

3.2 試藥

對照品及試劑同2.2項下。

香砂養胃丸樣品18批，保定中藥制藥有限公司生產，批號分別為160302(S1)、161005(S2)；北京御生堂集團石家莊制藥有限公司生產，批號分別為16034008(S3)、16114008(S4)；河北萬歲藥業有限公司生產，批號為161002(S5)；河南金鴻堂制藥有限公司生產，批號為20160401(S6)；河南明善堂藥業有限公司生產，批號為161209(S7)；河南省康華藥業股份有限公司生產，批號為16101601(S8)、16122901(S9)；江蘇平光信誼(焦作)中藥有限公司生產，批號為161101(S10)；民生藥業集團有限公司生產，批號為161101(S11)；山西旺龍藥業集團有限公司生產，批號為20161101(S12)；陜西香菊藥業集團有限公司生產，批號為170301(S13)；石藥集團河北永豐藥業有限公司生產，批號為10516080514(S14)、10516110114(S15)；藥都制藥集團股份有限公司生產，批號為161201(S16)、170401(S17)；湖北瑞華制藥有限責任公司生產，批號為170521(S18)。

3.3 色譜條件

島津LC-20AT高效液相色譜儀，色譜柱：WondaSil C18-WR(250 mm × 4.6 mm，5 μm)；流動相：甲醇-磷酸二氫鉀溶液(取磷酸二氫鉀0.6 g，十二烷基磺酸鈉1.0 g，冰醋酸1 mL，加水溶解并稀釋至1000 mL)(50∶50)；流速為1.0 mL·min-1；進樣量為10 μL；檢測波長為275 nm；柱溫為30 ℃。理論板數按辛弗林峰計算應不低于2000。

3.4 對照品溶液的制備

取辛弗林對照品適量，精密稱定，加水制成每1 mL含10 μg的溶液，即得。

3.5 供試品溶液的制備

取本品適量，研細，取約3.5 g，精密稱定，置具塞錐形瓶中，精密加入甲醇50 mL，稱定質量，加熱回流1.5 h，放冷，再稱定質量，用甲醇補足減失的質量，搖勻，濾過，精密量取續濾液10 mL，蒸干，殘渣加水10 mL使溶解，通過聚酰胺柱(60～90目，2.5 g，內徑1.5 cm，干法裝柱)，用水25 mL洗脫，收集洗脫液，轉移至25 mL量瓶中，加水至刻度，搖勻，即得。

3.6 專屬性考察

按處方及工藝要求制備枳實、陳皮的陰性樣品并按3.5項下方法制備陰性樣品溶液，依次精密吸取對照品溶液、樣品溶液及陰性樣品溶液各10 μL，按3.3項下色譜條件測定，結果表明香砂養胃丸中其他成分不影響辛弗林的檢出，本方法專屬性強，見圖4。

注：A.對照品；B.樣品；C.陰性對照品；1.辛弗林。圖4 香砂養胃丸及其對照品、樣品、陰性HPLC圖

3.7 精密度考察

取同一對照品溶液，按3.3項下色譜條件連續進樣5次，記錄辛弗林色譜峰的峰面積，結果RSD為0.35%。儀器精密度良好。

3.8 線性關系考察

配制系列濃度對照品溶液，使每1 mL分別含辛弗林0.732 5、3.662、7.325、14.65、29.30、58.60、117.2 μg，按3.3項下色譜條件測定，以峰面積積分值(Y)為縱坐標，濃度(X，μg·mL-1)為橫坐標，繪制標準曲線，計算得回歸方程Y=10 308.20X+128.66，r=0.999 9；進樣量在14.65～2344 ng與峰面積呈良好的線性關系。

3.9 穩定性考察

取同一樣品(S1)，按3.5項下方法制備供試品溶液，分別在0、2、4、8、12、24 h按3.3項下色譜條件測定，峰面積RSD為0.42%。供試品溶液在24 h內穩定。

3.10 重復性考察

取同一樣品(S1)，按3.5項下方法平行制備供試品溶液6份，按3.3項下色譜條件測定，記錄峰面積并計算含量，平均質量分數為0.304 0 mg·g-1，RSD為1.75%。該方法重復性好。

3.11 加樣回收率考察

精密稱取已知質量分數(S1，0.304 0 mg·g-1)的樣品9份，每份約1.8 g，平行分為3組，每組分別加入低、中、高3個濃度的對照品，按3.5項下方法制備供試品溶液并按3.3項下色譜條件測定，計算平均回收率為94.8%，RSD值為2.72%。結果表明，本方法加樣回收較好，見表1。

表1 香砂養胃丸中辛弗林加樣回收率結果(n=9)

3.12 耐用性考察

3.12.1 色譜柱的考察 考察了日本Inertsustain C18(250 mm × 4.6 mm，5 μm)色譜柱及Wondasil C18-WR(250 mm × 4.6 mm，5 μm)色譜柱，均能達到較好的分離效果，樣品測定結果RSD為0.53%，測定結果一致。

3.12.2 高效液相色譜儀的考察 分別考察了島津LC-20AT、Waters 2695、Agilent 1260 3種品牌的高效液相色譜儀，結果相同樣品的測定結果RSD為0.95%，測定結果一致。

3.13 樣品測定

取全部18批樣品，按3.5項下方法制備供試品溶液，并按3.3項下色譜條件測定，結果見表2。

表2 香砂養胃丸中辛弗林含量測定結果 mg·g-1

4 討論

4.1 提取方法的考察

本實驗參考《中華人民共和國藥典》2015年版一部枳實【含量測定】項下的提取方法，分別以甲醇、流動相為提取溶劑對樣品前處理后進行檢測，結果以流動相為提取溶劑的樣品色譜圖干擾峰多，影響主成分峰分離度，而以甲醇為提取溶劑的分離效果好。實驗繼續考察了溶劑加入量、上柱洗脫用水量對測定結果的影響，最終確定3.3項下方法制備供試品溶液。

4.2 現行標準薄層鑒別的改進

本實驗對收集的全部香砂養胃丸樣品(S1～S18)按照《中華人民共和國藥典》一部規定方法——以枳實(酸橙)為對照藥材進行枳實薄層色譜鑒別，結果薄層鑒別圖譜差異大，部分出現假陰性結果。為探究原因，筆者分別用不同基原枳實飲片(Y1～Y15)分別按照香砂養胃丸中枳實的薄層色譜鑒別方法進行檢驗，結果酸橙為陽性，甜橙薄層色譜斑點不易見，為假陰性，證明香砂養胃丸中枳實薄層色譜的差異是由枳實來源不同引起的。建議中國食品藥品檢定研究院調整枳實對照藥材的品種，增加或更換甜橙作為枳實對照藥材。

4.3 制訂枳實炮制工藝的建議

香砂養胃丸處方中為炒枳實，《中華人民共和國藥典》一部枳實項下記載麩炒枳實的含量測定方法及限度均與藥材相同[1]。有文獻報道，根據炮制時間、炮制溫度、麩用量的不同，辛弗林、橙皮苷等有效成分亦隨之增減[18-20]。經市場調查，炒枳實為各生產企業自行炒制，因《中華人民共和國藥典》中未明確規定炮制的工藝，各廠家在炒制時間、溫度等方面掌控不同。為從源頭穩定麩炒枳實的質量，建議國家藥典委員會制訂科學的麩炒枳實的炮制工藝。