不同劑量N-乙酰-5-羥色胺(NAS)對視網膜缺血-再灌注損傷大鼠視網膜細胞凋亡的影響△

劉建曉 殷慧文 陳偉 徐寧 楊明 王曉莉 趙巖松

視網膜缺血-再灌注損傷(retinal ischemia-reperfusion injury，RIRI)常見于青光眼、視網膜血管閉塞和糖尿病視網膜病變等眼部疾病[1]，是目前造成視力障礙和失明的主要原因。因此，尋找RIRI行之有效的治療方案成為眼科研究的焦點。N-乙酰-5-羥色胺(N-acetylserotonin，NAS)是褪黑素的前體物質[2-3]，具有抗氧化、抗凋亡等生物學功能。我們課題組前期研究發現，NAS可減輕RIRI大鼠視網膜細胞凋亡，具有神經保護作用[4-5]，但不同劑量的NAS治療對RIRI大鼠視網膜細胞損傷的影響尚未見報道，選擇適宜劑量的NAS對于治療RIRI具有重要意義。本研究采用HE染色、免疫組織化學和TUNEL法來觀察腹腔注射不同劑量的NAS對RIRI大鼠視網膜組織病理學、活性Caspase-3蛋白表達以及細胞凋亡的影響，以期為NAS較優劑量的選擇及其臨床應用提供一定的理論依據。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實驗動物及分組健康成年雄性SD大鼠42只，體質量220～250 g(濟南朋悅實驗動物繁育有限公司)。采用隨機數字表法將大鼠分為正常對照組(6只)、RIRI 組(18只)和NAS組(18只)；NAS組按照給藥劑量的不同分為NAS低劑量組(5 mg·kg-1)、NAS中劑量組(10 mg·kg-1)和NAS高劑量組(20 mg·kg-1)。NAS組于造模前后 30 min腹腔給藥，RIRI 組腹腔注射相應等體積的生理鹽水。

1.1.2 主要試劑與儀器NAS(美國，Sigma公司)；兔抗活性 Caspase-3(美國，Cell Signaling Technology公司)；兔抗二步法試劑盒(PV-9001)、二氨基聯苯胺(DAB)顯色試劑盒(ZLI-9018)(北京中杉金橋生物技術有限公司)；HE 染色試劑盒(碧云天生物技術有限公司)；TUNEL試劑盒(德國，Roche公司)。石蠟切片機(Shandon Finesse325，美國Thermo公司)、研究級正置光學顯微鏡(BX-51，日本Olympus公司)，電子分析天平(AL-204，美國Mettler Toledo公司)。

1.2 方法

1.2.1 RIRI動物模型制作采用前房高眼壓法建立大鼠RIRI模型[6]。……