醛糖還原酶和晚期糖基化終末產(chǎn)物受體對糖尿病視網(wǎng)膜病變神經(jīng)元凋亡的影響

董一 萬光明 閆磐石 錢誠 梁申芝 王炯

糖尿病視網(wǎng)膜病變(diabetic retinopathy，DR)是糖尿病最嚴(yán)重也是最常見的眼部并發(fā)癥，致盲率極高，被普遍認(rèn)為是四大致盲因素之一[1]。其發(fā)病原因復(fù)雜，是多因素影響的、多階段共同作用的病理過程[2-4]。有研究發(fā)現(xiàn)，神經(jīng)元凋亡與DR有密切聯(lián)系[5]。目前，糖尿病的高血糖通過何種途徑導(dǎo)致機(jī)體發(fā)生DR的機(jī)制尚不明確，DR的防治仍是相關(guān)研究領(lǐng)域的重要課題。本研究擬通過探討DR神經(jīng)元凋亡及醛糖還原酶和晚期糖基化終末產(chǎn)物受體對其的影響，解析DR的具體發(fā)病機(jī)制，為該病的防治提供理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 動物分組及模型建立

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動物及分組選擇健康清潔級Wistar大鼠36只，雄性，10周齡，體質(zhì)量170～230(200±30)g，購自上海中科院實(shí)驗(yàn)動物中心。適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后，將大鼠隨機(jī)分為對照組、模型組、轉(zhuǎn)染組，每組各12只。實(shí)驗(yàn)動物的使用遵循ARVO聲明。

1.1.2 模型建立方法轉(zhuǎn)染組和模型組大鼠采用一次性左下腹腔內(nèi)注射5 mL鏈脲佐菌素建立糖尿病大鼠模型[6]，對照組注射PBS緩沖液。構(gòu)建含有晚期糖基化終末產(chǎn)物受體siRNA的質(zhì)粒(siRNA的設(shè)計和質(zhì)粒的構(gòu)建均由上海藍(lán)基生物科技有限公司完成)，于造模后第2天利用慢病毒轉(zhuǎn)染入轉(zhuǎn)染組大鼠體內(nèi)。轉(zhuǎn)染操作：按Invitrogen公司Lipofectamine2000使用說明，將DNA與Lipofectamine2000混勻后室溫下靜置20 min，將1 mL混合液以鼠尾靜脈注射方式共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞。

1.2 方法

1.2.1 空腹血糖和大鼠體質(zhì)量測定造模后4周、8周、12周，稱大鼠體質(zhì)量后禁食6 h，剪尾取血后采用血糖儀(美國強(qiáng)生公司)測定各組大鼠的空腹血糖。……