免疫熒光法聯合免疫膠體金法在尿生殖道沙眼衣原體感染診斷中的應用及其臨床價值

陳明星

【摘要】 目的：探討免疫熒光法聯合免疫膠體金法在尿生殖道沙眼衣原體感染診斷中的應用及其臨床價值。方法：選取2017年1月-2018年8月來本院接受沙眼衣原體感染檢測的疑似尿生殖道沙眼衣原體感染患者1 100例，分別采用免疫熒光法和免疫膠體金法進行檢測，分析不同檢測方法的診斷價值。結果：最終確診有70例患者為陽性;免疫熒光法、免疫膠體金法、聯合檢測陽性檢出率分別為6.2%、5.5%、6.4%，三組比較差異無統計學意義（P>0.05）;聯合檢測的靈敏度、特異度、診斷符合度均高于單一檢測，且免疫熒光法上述指標均高于免疫膠體金法，差異均有統計學意義（P<0.05）;聯合檢測的Youden指數均高于單一檢測，且免疫熒光法高于免疫膠體金法（P<0.05）;陽性患者發病情況會受到避孕方式、宮頸情況、性伴侶個數的影響（P<0.05）。結論：在對沙眼衣原體感染的診斷過程中，免疫熒光法的診斷價值高于免疫膠體金法，且免疫熒光法與免疫膠體金法聯合檢測的診斷價值高于單一檢測，臨床上應當進一步推廣應用。

【關鍵詞】 免疫熒光法; 免疫膠體金法; 沙眼衣原體感染; 檢出率

【Abstract】 Objective：To explore the application and clinical value of immunofluorescence method combined with immunogold gold method in the diagnosis of urinary genital tract infection of chlamydia trachomatis.Method：A total of 1 100 cases of suspected urogenital Chlamydia trachomatis infection in urogenital tract who were tested for chlamydia trachomatis infection in our hospital from January 2017 to August 2018 were selected，and tested by immunofluorescence method and immunogold gold method respectively.The diagnostic value of different detection methods was analyzed.Result：70 patients were positive.The positive rates of immunofluorescence method，immunogold gold method and combined detection were 6.2%，5.5% and 6.4% respectively，there was no significant difference among the three groups（P>0.05）.The sensitivity，specificity and diagnostic coincidence of combined detection were higher than those of single detection，and the above indexes of immunofluorescence method were higher than those of immunogold gold method，the differences were statistically significant（P<0.05）.Youden index of combined detection was higher than that of single detection，and the immunofluorescence method was higher than that of immunogold gold method（P<0.05）.The incidence of positive patients was affected by contraceptive methods，cervical condition and number of sexual partners（P<0.05）.Conclusion：In the diagnosis of chlamydia trachomatis infection，the diagnostic value of immunofluorescence method is higher than that of immunogold gold method，and the diagnostic value of combined detection is higher than that of single detection，which should be further popularized and applied in clinic.

【Key words】 Immunofluorescence; Immunogold gold method; Infection of chlamydia trachomatis; Detection rateFirst-authors address：Duanzhou District Maternal and Child Health Hospital，Zhaoqing 526040，China

doi：10.3969/j.issn.1674-4985.2019.15.034

由沙眼衣原體引起的尿生殖道沙眼衣原體感染屬于性傳播疾病，主要臨床表現為泌尿生殖道部位炎癥，是比較常見的女性疾病之一[1]。隨疾病發展，嚴重時可能會導致輸卵管性不孕、輸卵管妊娠或妊娠期出現早產、流產等，目前對于該病癥并沒有明確的治療方案，但是臨床實踐證明，越早診斷，越有利于患者的恢復[2]。該病癥在感染后，有70%以上的患者并無自覺癥狀，所以對于該病癥的診斷非常困難，很容易因診斷不及時而造成不良后果[3]。目前臨床對于該病癥診斷的金標準為細胞培養法，但是該操作的要求比較高，檢測費用昂貴，且該檢測出結果比較慢，因此在實際應用中受到約束[4]。本研究選取來本院進行沙眼衣原體感染檢查的患者1 100例觀察對象，分別采用免疫熒光法和免疫膠體金法進行檢測，判斷兩種檢測方法在臨床應用中的參考價值，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2017年1月-2018年8月來本院接受沙眼衣原體感染檢測的疑似尿生殖道沙眼衣原體感染患者1 100例，年齡23～55歲，平均（35.3±3.2）歲，分別采用免疫熒光法和免疫膠體金法進行檢測。納入標準：均有性生活史;無明顯自覺癥狀;在入組前2周內未接受陰道灌洗和抗菌治療。排除標準：合并有子宮腫瘤;臨床資料不完整;存在溝通障礙。本次研究是在獲得醫院倫理委員會批準的前提下開展，患者對于本次研究內容知情，并且在同意書上簽字。

1.2 方法 借助擴陰器張開陰道口，暴露患者宮頸，將宮頸周圍的分泌物擦去，利用女性無菌拭子蘸取生理鹽水，以順時針方向刮取柱狀上皮細胞進行采樣，在取樣后30 min內將樣本在低溫環境內送去檢驗，直接進行涂片和使用無菌膠管進行標本前處理（膠管由免疫膠體金試劑盒所提供），檢測需在2 h內完成，操作需嚴格按照試劑盒說明說進行。

1.2.1 免疫膠體金法檢測 使用免疫膠體金法檢測試劑盒進行檢測，當質控線和檢測線同時出現紅色的橫條時，則證明檢測結果為陽性;若在檢測區未出現紅線，僅在質控線處出現紅線，將其判定為陰性;若僅在檢測區出現紅線或無紅線者判定為無效。試劑盒由美國進口沙眼衣原體檢測試劑盒 [5]。

1.2.2 免疫熒光法檢測 當上皮細胞或其細胞周圍出現草綠色熒光小點，且通過顯微鏡觀察全視野時間可以超過10 h，則可以將其判定為陽性，反之擇判定為陰性[6]。

1.2.3 免疫熒光法聯合免疫膠體金法診斷的標準 兩種檢測其中一種為陽性即為聯合檢測陽性;兩種檢測均為陰性時即為聯合檢測陰性。

1.2.4 補充說明 在進行樣本采集時，患者不可處于月經期;樣本中不可含有較多的血液;對于免疫膠體金法檢測，兩種試劑盒出現檢測結果不一致時，應將樣本進行核酸基因擴增檢測，以方便確診[7]。

1.3 觀察指標 本實驗中以擴大金標準為最終確診依據，即陽性：細胞培養法檢測為陽性，或細胞培養法檢測為陰性而其他兩種方法檢查為陽性;陰性：除卻上述情況則為陰性。對比免疫熒光法和免疫膠體金法檢測沙眼衣原體感染的診斷價值，包括靈敏度、特異度、診斷符合度、Youden指數，靈敏度=真陽性/（真陽性+假陰性），特異度=真陰性/（真陰性+假陽性），診斷符合度=（真陽性+真陰性）/（真陽性+假陰性+假陽性+真陰性）×100%，Youden指數=（靈敏度+特異度）-1。

1.4 統計學處理 使用SPSS 18.0軟件對所得數據進行統計分析，計量資料用（x±s）表示，組間比較采用t檢驗;計數資料以率（%）表示，比較采用字2檢驗。以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 不同方法檢出情況分析 分別采用免疫熒光法和免疫膠體金法進行檢測，最終確診有70例患者為陽性;免疫熒光法陽性檢出率為6.2%（68/1 100），免疫膠體金法陽性檢出率為5.5%（60/1 100），兩種方法聯合檢測陽性檢出率為6.4%（70/1 100），三組陽性檢出率比較，差異無統計學意義（字2=0.873，P>0.05），見表1。

2.2 不同檢測方法的診斷價值分析 聯合檢測的靈敏度、特異度、診斷符合度均高于單一檢測，且免疫熒光法上述指標均高于免疫膠體金法，差異均有統計學意義（P<0.05）;聯合檢測的Youden指數均高于單一檢測，且免疫熒光法高于免疫膠體金法。見表2。

2.3 受檢人員資料分析 陽性患者發病情況會受到避孕方式、宮頸情況、性伴侶個數的影響（P<0.05），見表3。

3 討論

在世界范圍內，目前由沙眼衣原體所引起的性傳播疾病的患病率一直保持在高水平，而且呈現逐年上升趨勢，特別是在發達國家，沙眼衣原體感染可以占到性傳播疾病的首位[8]。近幾年，臨床數據顯示，在我國該病癥的發病率也呈現上升趨勢[9]。大多患者在感染沙眼衣原體后并沒有明顯的臨床癥狀，所以大多患者在不察覺的情況下使沙眼衣原體在性伴間不斷傳播[10]。隨疾病發展，很容易引發尿道炎、宮頸炎以及輸卵管性不孕不育等，使患者生活質量造成嚴重影響[11]。對于該病癥早期診斷以及對患者衣原體感染病情進行評估，篩選造成感染發生的危險因素以及預測指標，對該疾病的發生進行預防和及時治療，保障母嬰健康[12]。為了提高檢出率，減少患者感染后并發癥的發生，許多學者曾提出多種衣原體感染檢測方法，對目前實驗室創建診斷方法進行劃分，主要有以下三類，（1）細胞生物學方法：細胞培養;（2）免疫學方法：免疫熒光檢測、酶聯免疫檢測以及免疫膠體金法檢測;（3）分子生物學檢測：核酸探針檢測、核酸擴增檢測。各種檢測方法在實際操作中難易程度不同、檢測時靈敏度和特異度也不相同，很多檢測方法受外界環境的影響比較大，所以至于哪種方法更適合于在臨床進行大規模的推廣應用還沒有確切理論證實[13]。

本研究主要采用免疫方法其中兩種進行檢測，免疫熒光檢測和免疫膠體金法檢測，這種檢測方法相對于其他方法操作比較簡單，免疫熒光檢測是屬于一種病原體定量檢測方法，研究證明，免疫熒光檢測法的靈敏度在80%～95%，特異度在98%以上[14]。本研究結果顯示，免疫熒光檢測的靈敏度為85.7%，特異度為99.2%，與以往研究結果相一致。目前在女性尿生殖道沙眼衣原體診斷中免疫熒光檢測應得到廣泛應用。本研究通過患者宮頸口分泌物取樣進行檢測，該檢測方法也可以通過尿液進行檢測，相對操作比較靈活。但是該操作的大范圍推廣也會受到一定因素的限制，比如在進行免疫熒光檢測時所需檢測成本比較高，在進行檢測操作時對于檢測人員的專業水平要求比較高，樣本在送檢過程中，如操作不慎很容易引發感染，影響檢測結果，而且通過該方法進行檢測，無法對沙眼衣原體的生存與死亡情況進行判斷，不能用于患者預后檢查。

膠體金是屬于病原體定性檢測方法的一種，采用該方法進行檢測時，只有40%～70%的敏感性，但是該檢測方法的特異度比較高，在檢測時特異度為80%以上。本研究結果顯示，采用免疫膠體金檢測特異度為98.8%，而該檢測方法的敏感性僅68.6%，與以往研究所得出結論一致[15-16]。該操作方法比較簡單，對于操作人員的素質要求不高，而且該檢測方法結果出得比較快，但是要想準確檢測結果，需要較多數量的沙眼衣原體抗原。本研究分析兩種檢測方法各自優缺點，并對比兩種方法聯合的檢測將結果，結果顯示，聯合檢測的靈敏度、特異度、診斷符合度均高于單一檢測，且免疫熒光法上述指標均高于免疫膠體金法，差異均有統計學意義（P<0.05）;聯合檢測的Youden指數均高于單一檢測，且免疫熒光法高于免疫膠體金法。證明通過聯合兩種檢測方法可以有效提高診斷符合度，做到對疾病的早發現早治療。

綜上所述，在對沙眼衣原體感染的診斷過程中，免疫熒光法的診斷價值高于免疫膠體金法，且免疫熒光法與免疫膠體金法聯合檢測的診斷價值高于單一檢測，臨床上應當進一步推廣應用。

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（收稿日期：2019-02-27） （本文編輯：董悅）