Visfatin在結直腸癌中的表達及其意義

榮瑋 徐晨 李雪松

【摘要】目的：本研究目的是探討visfatin結直腸癌組織中的表達及其與臨床各個病理因素之間的關系。方法：以184例結直腸癌標本作為觀察組，對應遠切端正常腸粘膜組織作為對照組進行visfatin免疫組化檢測。結果：visfatin結直腸癌對照組和觀察組陽性率分別為315%（58/184）、684%（126/184），兩者比較具有統計學意義（P<005），visfatin的表達與患者年齡、性別和腫瘤的部位、大小無相關性，與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、及TNM分期有關（P<005）。visfatin陽性表達組和陰性表達組5年生存率分別為302%和776%。Kaplan-Meier生存分析及log-rank顯著性檢驗（χ2=33757，P<0001）結論：Visfatin在結直腸癌高表達及與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、及TNM分期的相關性，表明Visfatin影響結直腸癌的進展； visfatin陽性表達與結直腸癌患者5年生存期密切相關，是影響結直腸癌預后的因素，visfatin可能成為結直腸癌的獨立預后指標。

【關鍵詞】結直腸癌；Visfatin；免疫組化；

【中圖分類號】R821.4+1

【文獻標志碼】A

【文章編號】

1005-0019（2019）16-038-01

結直腸癌（colorectalcancer，CRC）為現今高發的腫瘤之一，而在CRC的發病危險因素中，肥胖具有明顯的獨立性[1]。

Visfatin是 Samal 等在 1994 年篩選淋巴細胞cDNA文庫時克隆成功的，人類該相關基因位于第7號染色體，長約3741 kb，含 11個外顯子和 10 個內含子，可編碼 473 個氨基酸，是一類具有類胰島素作用、促炎、促進脂肪組織分化和合成等多種生物學活性的脂肪細胞因子，廣泛表達于體內多種組織器官。Visfatin血漿水平升高是中國患者早期和晚期結直腸癌的一個重要危險因素[2]。但在能否成為結直腸癌的預后判斷指標國內報道很少。

11標本來源

隨機選取2012年1月～2013年12月期間在齊齊哈爾醫學院臨床病理檢驗中心根治性切除術的結直腸癌原發病例184例作為觀察組，術前均未經任何系統的放療和化療。對照組為大腸癌遠切端正常組織184例。所有病例均有五年以上隨訪資料，且用于分析的各項指標記錄完整。其中男性94例，女性90例；發病年齡發病年齡42～78歲，中位年齡575歲；發生部位結腸89例，直腸95例；高中分化119例，低分化65例；浸潤小于肌層90例，浸及或超過肌層94例；有淋巴結轉移者103例，無淋巴結轉移者81例；TNM分期中Ⅰ期-Ⅱ期85例，Ⅲ-Ⅳ期99例，生存期大于等于5年者83例，小于5年者101例。

12主要試劑

鼠抗人CD151、MT1-MMP多克隆抗體購自北京博奧森生物技術有限公司，工作液濃度為1∶600，免疫組織化試劑盒及DAB顯色液為福州邁新生物技術公司產品。

13實驗方法

切片常規脫蠟，水化后，3%H2O2-甲醇封閉內源性過氧化物酶20min，枸櫞酸高壓修復10min，PBS洗3×3分鐘，一抗4℃冰箱過夜，第二天切片恢復室溫后，依次滴加試劑A：反應增強液，試劑B：酶標抗小鼠/兔IgG聚合物，室溫各孵育15min， 中間PBS洗3×3分鐘，DAB顯色，蘇木精復染。以PBS代替一抗作陰性對照。

14結果評定

采用半定量積分法判定結果，顯色度按細胞著色深淺計分：0分基本無著色；1分淺黃；2分淺棕，3分深棕。根據陽性細胞所占百分比計分，無陽性細胞為0分；陽性細胞<10%為1分；陽性細胞≥10%～50%為2分；陽性細胞>50%～75%為3分；陽性細胞>75%以上為4分。

15統計學方法

使用 IBM SPSS Statistics 250 軟件對數據進行統計分析。visfatin的表達與臨床病理參數間的比較采用χ2檢驗或Fisher確切概率計算，visfatin的表達與生存時間的關系采用Kaplan-Meier生存率曲線及log-rank檢驗，顯著性檢驗水準α值等于005。

2結果

21visfatin在結直腸癌組織中的表達

visfatin免疫組化陽性產物呈棕褐色顆粒狀位于細胞核和細胞質（圖1-2）。visfatin visfatin結直腸癌對照組和陽性率分別為315%（58/184）、684%（126/184），兩者比較具有統計學意義（P<0005）。

22visfatin表達與結直腸癌的臨床病理因素的關系

visfatin的表達與患者年齡、性別和腫瘤的部位、大小無相關性，與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、及Dukes分期有關（P<005） 見表1。

23visfatin表達與患者生存期的關系

184例結直腸癌患者根據visfatin陽性表達的情況分為陽性組和陰性組進行Kaplan-Meier生存分析。visfatin陽性表達組和陰性表達組5年生存率分別為302%和776%，生存分析函數曲線和風險函數曲線（圖3-4）及log-rank顯著性檢驗（χ2=33757，P<0001）可知， visfatin與結直腸癌患者5年生存期密切相關，是影響結直腸癌預后的因素。

3討論

Visfatin在CRC患者血清中的水平明顯增高，對CRC的診斷靈敏度和特異度均在70%左右；Visfatin水平上升與CRC發病風險相關，與疾病惡化程度和 腫 瘤 分 期 也 有 關[3]。本研究通過免疫組化半定量積分法證實了visfatin在結直腸癌過表達，與腫瘤的分化程度、浸潤深度、淋巴結轉移、及TNM分期有關（P<005）。新近研究表明visfatin在胃癌本研究顯示，抵抗素和Visfatin協同促進胃癌細胞增殖，增強端粒酶基因表達。這些數據表明，胃癌組織中這兩種激素可以通過增強端粒酶作為癌基因的表達，協同促進癌細胞的生長[4]。乳腺癌組織內脂素、淋巴結轉移、腫瘤分期、年齡和腫瘤大小，被確定為高度相互作用并與乳腺癌進展相關[5]。子宮內膜癌高visfatin血清水平預測子宮內膜癌患者預后差[6]。本研究通過對visfatin表達與患者生存期的關系的研究表明visfatin與結直腸癌患者5年生存期密切相關，是影響結直腸癌預后的因素（χ2=33757，P<0001）。visfatin可能成為結直腸癌的獨立預后指標。

參考文獻

[1]JayasekaraH， EnglishDR ，HaydonA，etal. Associations of alcoholintake ，smoking，Physical activity and obesity with survival following colorectal cancer diagnosis by-stage， anatomic site and tumor molecular subtype[J].IntJ Cancer，2018，142（2）：238-250

[2]Chen M1， Wang Y1， Li Y2，etal. Association of plasma visfatin with risk of colorectal cancer： An observational study of Chinese patients. Asia Pac J Clin Oncol. 2016 Mar；12（1）：e65-74 doi： 101111/ajco.12090

[3]孫一帆. Visfatin與消化系統腫瘤的關系研究進展[J]. 檢驗醫學與臨床，2016，13（16）：2388-2390 Doi：103969/j.issn.1672-9455201616063

[4]Mohammadi M1， Zarghami N2， Hedayati M1， et al. Synergistic Effects of Resistin and Visfatin as Adipocyte Derived Hormones on Telomerase Gene Expression in AGS Gastric Cancer Cell Line.Acta Med Iran. 2017 Oct；55（10）：621-627

[5]Moi SH#1， Lee YC#2，3， Chuang LY4， et al. Cumulative receiver operating characteristics for analyzing interaction between tissue visfatin and clinicopathologic factors in breast cancer progression.Cancer Cell Int. 2018 Feb 9；18：19 doi： 101186/s12935-018-0517-z.

[6]Cymbaluk-Poska A1， Chudecka-Gaz A1， Pius-Sadowska E2， et al. Circulating Serum Level of Visfatin in Patients with Endometrial Cancer. Biomed Res Int. 2018 Jan 4；2018：8576179 doi： 101155/2018/8576179