宮頸SIgA聯合血清LncRNA-ROR與miR-29檢測對女性慢性盆腔炎的診斷價值

(鄂州市中心醫院婦產科，湖北 鄂州 436000)

慢性盆腔炎(pelvic inflammatory disease，PID)指女性內生殖器及其周圍結締組織、盆腔腹膜的慢性炎癥[1]。PID起病多隱匿，且易反復發作導致疾病遷延不愈，甚至誘發不孕[2-3]。研究等指出，肝炎、肺炎等多種炎癥組織中長鏈非編碼RNA (long non-coding RNA，lncRNA)-ROR呈顯著上升趨勢，此外還有研究指出微小RNA-29(microRNA-29，miR-29)參與白介素2和白介素6等多種細胞因子的分泌，被認為是調節炎癥反應的重要基因[4]。機體炎癥免疫失調、巨噬細胞和上皮細胞等細胞分泌免疫效應因子功能紊亂被認為是PID疾病發展的重要因素[5-6]。宮頸分泌型IgA(secretory IgA，SIgA)、lncRNA-ROR和miR-29在機體處于炎癥狀態時可有異常表達[7-9]。本文收集了150例PID患者與150例健康女性，旨在探究宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR與miR-29對PID的診斷價值。

1 資料與方法

1.1 研究對象

選取鄂州市中心醫院婦產科2015年6月至2018年6月確診的PID患者150例為病例組。包括輸卵管炎(腹腔鏡下表現為一側或雙側輸卵管增粗)合并卵巢炎(腹腔鏡下表現為一側或雙側卵巢組織腫大)65例、輸卵管炎合并卵巢炎與慢性盆腔結締組織炎(腹腔鏡下表現為盆腔腹膜后方，子宮兩側及膀胱前間隙處結締組織積膿)共51例、單純輸卵管炎11例、慢性盆腔結締組織炎11例、子宮體炎12例(腹腔鏡下表現為子宮體水腫、充血)。各種PID的診斷依據均來自腹腔鏡檢查結果[10]。患者平均年齡(32.5±3.4)歲。病例組納入標準為：(1)經腹腔鏡檢查確診為PID；(2)入院前未經治療；(3)語言表達能力正常，能與調查人員進行正常的溝通；(4)研究對象自愿參與本研究。對照組納入標準為：(1)既往無盆腔慢性疼痛病史；(2)月經規律；(3)婦科B超未見異常；(4)婦檢無宮頸舉痛、下腹部未捫及包塊。所有研究對象均排除：(1)其他腫瘤史；(2)未簽署知情同意書者。對照組為同期在本院行健康體檢的健康女性150例，平均年齡(33.9±3.8)歲。本項目由本院倫理委員會批準。

1.2 宮頸SIgA檢測

由專業醫師經陰道窺器用一次性無菌注射器抽取宮頸黏液0.5 mL，放入密封標本瓶中，于1 h內在4 ℃條件下以3 500 g離心力(離心半徑為10 cm)離心10 min(離心機購自中國湘儀集團H-1850R型)，吸取上清進行SIgA檢測。宮頸黏液的抽取時間均在研究對象黃體期。宮頸SIgA采用放射免疫分析法檢測，檢測儀器為美國貝克曼庫爾特公司AU5800生化儀，檢測試劑盒來源于上海華大科技有限公司。

1.3 血清LncRNA ROR與miR-29水平檢測

使用含促凝劑采血管抽取PID患者治療前和健康體檢者的空腹外周靜脈血5 mL。血液標本在1 h內于4 ℃條件下以12 000 g離心力離心15 min，收集上層血清進行LncRNA ROR與miR-29水平檢測。

應用RNA提取試劑盒(中國Bioteke公司)提取總RNA，使用逆轉錄試劑盒(中國Takara公司)將總RNA逆轉錄為cDNA，進行實時熒光定量PCR(Quantitative Real-time PCR，RT-PCR)。循環條件：95 ℃變性5 min；95 ℃ 30 s，60 ℃ 30 s，72 ℃ 30 s，45個循環。LncRNA-ROR、miR-29與GAPDH引物序列見表1。采用2-ΔCt法計算各基因的相對表達量。

表1 LncRNA-ROR、miR-29與GAPDH的引物序列

1.4 統計學分析

應用SPSS 20.0進行統計分析。對于正態分布資料，以均數±標準差表示。正態分布數據兩組間比較采用獨立樣本t檢驗，多組間比較采用單因素方差分析。率的比較采用卡方檢驗。二元Logistic回歸分析計算血清LncRNA-ROR、miR-29與宮頸SIgA預測PID的比值比(odds ratio，OR)，受試者工作特征曲線(receiver operating characteristic curve，ROC)分析計算三者鑒別PID患者的曲線下面積(area under ROC curve，AUC)。P<0.05為差異具有統計學意義。

2 結 果

2.1 基本資料與宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平比較

兩組研究對象在年齡、吸煙、飲酒等方面的差異均無統計學意義(P>0.05)，具有可比性。相比于對照組，病例組宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平均增高，且差異具有統計學意義(P<0.05)，見表2。此外，病例組宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平在不同部位PID患者中的差異無統計學意義(P>0.05)，見表3。

表2 基本資料與宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平比較

(n=150)

表3 各類型PID患者宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平比較

2.2 宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29對PID的鑒別診斷

ROC曲線分析顯示，宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29在區分PID與健康女性的AUC分別為：0.664(95%CI：0.573～0.762，P=0.003)、0.814(95%CI：0.783～0.902，P<0.001)和0.846(95%CI：0.797～0.925，P<0.001)；靈敏度/特異度分別為74.9%/48.7%、76.5%/83.3%和78.1%/92.3%；診斷界值分別為74.6 μg/mL、34.6(-log)和16.2(-log)。聯合宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29區分PID與健康女性的AUC為0.924(95%CI：0.882～0.989，P<0.001)，靈敏度為88.8%，特異度為91.6%，見圖1。

圖1 宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29對PID的鑒別診斷

2.3 宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29對PID的發病風險評估

單因素分析結果顯示，高宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平是PID發病的危險因素。多因素分析結果表明，在校正年齡、BMI、吸煙、飲酒等因素影響后，高宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29水平仍是PID發病的獨立危險因素，見表4。

3 討 論

LncRNA和miR是近年研究的熱點，這兩類屬于非編碼RNA且均廣泛表達于單核細胞、中性粒細胞、T細胞和B細胞中，并可誘導這些免疫細胞向病灶遷移，吞噬或殺滅病原體，參與機體炎癥反應過程[11-12]。Yang等[8]指出，肝炎、肺炎等多種炎癥組織中LncRNA-ROR呈顯著上升趨勢，提示LncRNA-ROR水平與炎癥疾病相關。多個研究指出miR-29參與白介素2和白介素6等多種細胞因子的分泌，被認為是調節炎癥反應的重要基因[4]。機體炎癥免疫失調、巨噬細胞和上皮細胞等細胞分泌免疫效應因子功能紊亂被認為是PID疾病發展的重要因素[5-6]。在本次研究中，相比于健康女性，PID患者的血清LncRNA-ROR及miR-29水平均顯著增高，該結果與前期多個基礎研究結果相符[4,8]，二者對PID的診斷具有較高的敏感性。

表4 宮頸SIgA、血清LncRNA-ROR及miR-29對PID的發病風險評估

SIgA是存在于人體黏膜的一種重要免疫球蛋白，當黏膜受到炎癥刺激時，其水平會迅速增高[13]。在本次研究中，發現宮頸SIgA水平在PID患者中顯著增高，推測這是由于PID時，所產生的SIgA更容易被檢測到。宮頸SIgA診斷PID的敏感性較高，當聯合血清LncRNA-ROR、miR-29與宮頸SIgA，診斷PID的靈敏度為88.8%，特異度為91.6%，顯著優于單項指標的診斷價值。此外，本研究還對血清LncRNA-ROR、miR-29與宮頸SIgA對PID的發病風險進行評估，結果表明三者均是PID發病的獨立危險因素，提示該三項指標的聯合檢測對PID發病風險的預測也具有一定價值。

然而，本次研究仍有如下不足：(1)由于PID的確診依賴于腹腔鏡檢查，因而對照中無法完全排除PID，但本研究的對照排除了慢性盆腔痛，宮頸舉痛、腹部包塊的女性，此種情況下，對照中PID所占比例極低，不足以對研究結果造成影響；(3)本次研究中采用的血清LncRNA-ROR、miR-29與宮頸SIgA多個指標的聯合模型雖然較各單獨指標有較高的臨床價值，但該模型的應用仍有待進一步的驗證；(4)本次納入的150例PID患者均來自于本院，這可能會造成一定的選擇偏倚，后期需要更多的多中心隊列研究來進一步證實；(5)本研究中宮頸黏液的抽取時間均在研究對象的黃體期，但是PID患者的發病時間可能不一定處在黃體期，未來需要進一步分析不同月經周期時宮頸SIgA水平是否對結果產生影響。

綜上所述，本研究首次探究了聯合檢測血清LncRNA-ROR、miR-29與宮頸SIgA三項指標對PID的診斷與發病風險預測價值，并發現聯合該三項指標診斷PID具有較高的靈敏度，且三者均是PID發病的獨立危險因素，有望為PID的臨床診療提供新思路。

致謝：向給予我教誨和幫助的人們致以崇高的敬意和真誠的感謝!承蒙領導和同事的幫助，尤其是文章的第二作者，對我的大力支持，謝謝！