枳實(shí)芍藥散對(duì)C-IBS大鼠VIP的調(diào)節(jié)作用

辛 丹 季旭明 張亞楠 王 媛 王世軍 滕佳林

腸易激綜合征(irritable bowel syndrome, IBS)是臨床常見腸道功能紊亂性疾病，其主要特征為腹部疼痛伴隨大便性狀和排便次數(shù)改變[1,2]。其中，便秘型腸易激綜合征(C-IBC)較為常見[3]。現(xiàn)代研究表明C-IBS的病因涉及胃腸紊亂及內(nèi)臟感覺(jué)異常等。血管活性腸肽(VIP)是一種重要的肽類神經(jīng)遞質(zhì)，廣泛分布于胃腸道和神經(jīng)系統(tǒng)。杜麗娟等[4]研究發(fā)現(xiàn)VIP在結(jié)腸中含量最高，它能夠調(diào)節(jié)腸動(dòng)力，參與腸道動(dòng)力紊亂的反應(yīng)，對(duì)胃腸道平滑肌有松弛作用，從而抑制胃腸蠕動(dòng)，導(dǎo)致便秘的發(fā)生，與C-IBS的病理形成過(guò)程有關(guān)[5～7]。枳實(shí)芍藥散由枳實(shí)、白芍兩味藥物組成，始載于《金匱要略》，是治療腹痛腹?jié)M的經(jīng)方，其組方精簡(jiǎn)，主治血瘀氣滯之腹?jié)M脹痛，符合中醫(yī)對(duì)IBS的治則。因此，本研究擬觀察枳實(shí)芍藥散對(duì)C-IBS大鼠的作用及對(duì)VIP表達(dá)的影響，從而探討枳實(shí)芍藥散治療C-IBS的可能機(jī)制。

材料與方法

1.動(dòng)物:成年雄性Wistar大鼠60只，SPF級(jí)，體質(zhì)量為200±20g，購(gòu)自北京維通利華實(shí)驗(yàn)動(dòng)物技術(shù)有限公司，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證號(hào)：SCXK(京)20160006。確保實(shí)驗(yàn)室的溫度保持在22～25℃，將大鼠適應(yīng)性喂養(yǎng)1周后開始實(shí)驗(yàn)。

2.儀器和主要試劑:高速粉碎機(jī)(永康市速鋒工貿(mào)有限公司、YB-1000A型)，移液器(Finnpipette)，電熱恒溫培養(yǎng)箱(武漢一恒蘇凈科學(xué)儀器有限公司，37℃)，洗板機(jī)(Tianshi，988洗板機(jī))，酶標(biāo)儀(Rayto，RT-6100)，離心機(jī)(微量高速離心機(jī)，TG16W)，冷凍離心機(jī)(TGL16M臺(tái)式高速冷凍離心機(jī))，VIP ELISA試劑盒(上海創(chuàng)祥生物科技有限公司)，枳實(shí)、芍藥購(gòu)自濟(jì)南市中魯醫(yī)院，匹維溴銨片購(gòu)自北京萬(wàn)生藥業(yè)有限責(zé)任公司。

3.藥物制備:枳實(shí)、白芍用打成粉末，參照《金匱要略》枳實(shí)芍藥散的原方藥物比例，結(jié)合《中華人民共和國(guó)藥典》(2015年，第1部)及臨床實(shí)際用藥情況，用時(shí)按給藥劑量新鮮配制成0.164g/ml的混懸液，并將匹維溴銨配制成13.5mg/ml混懸液。

4.分組及造模:將60只SPF級(jí)的Wistar大鼠隨機(jī)分為空白組和實(shí)驗(yàn)組，空白組10只，實(shí)驗(yàn)組50只。空白組大鼠給予26～28℃生理鹽水灌胃，2毫升/只，每天1次，共14天；實(shí)驗(yàn)組大鼠給予0～4℃冰生理鹽水灌胃，2毫升/只，每天1次，共14天[8]。造模結(jié)束后，在空白組和實(shí)驗(yàn)組當(dāng)中各隨機(jī)選取6只大鼠，檢測(cè)其糞便含水量，據(jù)此評(píng)價(jià)造模是否成功。

5.給藥：實(shí)驗(yàn)組大鼠隨機(jī)分為模型對(duì)照組、匹維溴銨組、枳實(shí)芍藥散高劑量組、枳實(shí)芍藥散中劑量組和枳實(shí)芍藥散低劑量組，每組10只。空白組和模型對(duì)照組均按照10ml/(kg·d)給予26～28℃生理鹽水灌胃；匹維溴銨組大鼠按照0.0135g/(kg·d)給予匹維溴銨混懸液治療；枳實(shí)芍藥散組大鼠高劑量組用藥量為3.28g/(kg·d)、中劑量組用藥量為1.64g/(kg·d)、低劑量組用藥量為0.82g/(kg·d)。

6.小腸推進(jìn)率:大鼠取材前禁食不禁水12h，各組大鼠均給予墨汁1ml灌胃，用20%烏拉坦6ml/kg腹腔注射麻醉大鼠，30min之后，剖開下腹分離腸系膜，取出上至幽門下至回盲部的腸道，置于托盤上將小腸輕輕的拉直，測(cè)量上至幽門下至回盲部全長(zhǎng)(小腸總長(zhǎng)度)和墨汁前沿距幽門的距離(墨汁推進(jìn)長(zhǎng)度)，計(jì)算出小腸的推進(jìn)率。小腸推進(jìn)率(%)=墨汁推進(jìn)的長(zhǎng)度/小腸的總長(zhǎng)度×100%。

7.ELISA檢測(cè)VIP的表達(dá):給藥結(jié)束后，按照6ml/kg的比例腹腔注射20%烏拉坦以麻醉大鼠，打開腹腔，用一次性真空負(fù)壓管腹主動(dòng)脈采血，靜置30min后，以3000r/min離心分離血清，ELISA檢測(cè)各組大鼠血清中VIP含量的變化。

結(jié) 果

1.模型評(píng)價(jià):與空白組(49.57%±11.78%)比較，模型對(duì)照組糞便含水量(31.33%±12.13%)明顯降低，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)，說(shuō)明造模成功，結(jié)果見圖1。

圖1 糞便含水量比較

2.枳實(shí)芍藥散對(duì)小腸推進(jìn)率的影響：各組大鼠小腸推進(jìn)率結(jié)果差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與空白組(78.16%±5.81%)比較，模型對(duì)照組(58.17%±3.42%)、匹維溴銨組(69.62%±3.92%)、枳實(shí)芍藥散高劑量組(64.35%±2.10%)、枳實(shí)芍藥散中劑量組(63.61%±4.27%)和枳實(shí)芍藥散低劑量組(59.77%±4.92%)的小腸推進(jìn)率降低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型對(duì)照組比較，枳實(shí)芍藥散高劑量組和枳實(shí)芍藥散中劑量組的小腸推進(jìn)率升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與模型對(duì)照組比較，匹維溴銨組的小腸推進(jìn)率顯著升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。詳見圖2。

圖2 各組大鼠小腸推進(jìn)率比較與空白組比較，*P<0.01；與模型組比較，#P<0.01，##P<0.05

3.枳實(shí)芍藥散對(duì)C-IBS大鼠血清VIP的影響：ELISA結(jié)果顯示各組大鼠VIP相對(duì)表達(dá)量比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與空白組(54.68±4.44pg/ml)比較，模型對(duì)照組(272.08±15.83pg/ml)、枳實(shí)芍藥散高劑量組(113.39±7.60pg/ml)、枳實(shí)芍藥散中劑量組(177.44±23.33pg/ml)和枳實(shí)芍藥散低劑量組(209.67±20.02pg/ml)VIP的表達(dá)水平明顯升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)；與空白組比較，匹維溴銨組(95.33±18.85pg/ml)VIP的表達(dá)水平升高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)；與模型對(duì)照組比較，匹維溴銨組、枳實(shí)芍藥散高劑量組、枳實(shí)芍藥散中劑量組和枳實(shí)芍藥散低劑量組VIP的表達(dá)水平下降，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)，詳見圖3。

圖3 各組大鼠血清中血管活性腸肽濃度比較與空白組比較，*P<0.01，**P<0.05；與模型組比較，#P<0.01

討 論

IBS是多種因素相互交織、相互作用所導(dǎo)致的，目前尚無(wú)完善的治療方法[9]。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)對(duì)C-IBS病因的研究涉及胃腸紊亂及腸道微生物菌群改變、內(nèi)臟感覺(jué)異常和腦-腸軸活動(dòng)異常、炎癥和免疫成分的改變以及基因與遺傳及精神心理因素等，以胃腸動(dòng)力紊亂和內(nèi)臟感覺(jué)異常最為常見[10～14]。古代中醫(yī)書籍并沒(méi)有C-IBS病名的詳細(xì)記載，臨床中根據(jù)其腹痛、腹部不適、大便困難等表現(xiàn)，將其歸屬為中醫(yī)“便秘”的范疇[15]。本病主要發(fā)生在大腸，其常見的病機(jī)有胃腸氣機(jī)郁滯，津虧血少等。

《金匱要略·婦人產(chǎn)后》曰：“產(chǎn)后腹痛，煩滿不得臥，枳實(shí)芍藥散主之”。枳實(shí)辛散苦降，為破氣消積，化痰除痛之要藥。白芍有益血斂陰、柔肝止痛和平抑肝陽(yáng)的功效。枳實(shí)和白芍兩藥配伍，組成枳實(shí)芍藥散。臨床運(yùn)用時(shí)沒(méi)有局限于“產(chǎn)后腹痛”，凡氣血郁滯、氣機(jī)不暢者均能以此方為主化裁使用，符合中醫(yī)對(duì)IBS腹痛腹?jié)M的中醫(yī)治則。從發(fā)病癥狀和病因來(lái)看，本方的適應(yīng)證與腸易激綜合征很接近[16]。筆者實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)，枳實(shí)芍藥散高劑量組和枳實(shí)芍藥散中劑量組均能升高C-IBS大鼠的小腸推進(jìn)率，說(shuō)明枳實(shí)芍藥散可以改善C-IBS大鼠胃腸紊亂的癥狀。

VIP是調(diào)節(jié)胃腸蠕動(dòng)的重要腸神經(jīng)遞質(zhì)。VIP對(duì)胃腸道的作用具體表現(xiàn)在以下幾個(gè)方面：①抑制胃腸運(yùn)動(dòng)，延長(zhǎng)胃排空時(shí)間；②抑制腸道環(huán)形機(jī)收縮，使結(jié)腸處于較長(zhǎng)時(shí)間的舒張狀態(tài)；③對(duì)腸壁內(nèi)神經(jīng)叢的抗應(yīng)激及穩(wěn)定作用。在結(jié)腸動(dòng)力障礙的患者中，VIP的舒張反應(yīng)明顯減弱，說(shuō)明VIP可能通過(guò)神經(jīng)機(jī)制直接對(duì)腸道肌條收縮產(chǎn)生影響。研究發(fā)現(xiàn)，C-IBS患者結(jié)腸粘膜VIP含量升高，使蠕動(dòng)性收縮不易發(fā)生，從而導(dǎo)致便秘[17]。筆者的實(shí)驗(yàn)結(jié)果發(fā)現(xiàn)模型對(duì)照組中VIP表達(dá)量增高，給予枳實(shí)芍藥散治療后，其表達(dá)量下降，以枳實(shí)芍藥散高劑量組下降最為明顯，結(jié)果表明枳實(shí)芍藥散可以下調(diào)C-IBS大鼠VIP表達(dá)水平。

綜上所述，枳實(shí)芍藥散對(duì)C-IBS具有較好的治療效果，其機(jī)制可能與降低VIP的水平有關(guān)。因此采用枳實(shí)芍藥散治療具有一定的可行性，但其具體作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。