SLCO1B1 和APOE 基因多態性與他汀類藥物療效的相關性

高輝 王楊 陳婉婷 衛波

昆明醫科大學附屬延安醫院醫學檢驗科（昆明650051）

隨著社會經濟發展，人們飲食方式的改變，生活水平的提高，老齡化人口加劇，我國人群血脂水平正在逐步升高［1-2］。高脂血癥作為冠狀動脈粥樣硬化性心臟病等心血管疾病的獨立危險因素之一［3］，其高發病率日益成為吞噬人類健康的隱形殺手。因此，高脂血癥的有效治療成為臨床最需迫切解決的問題。

他汀類藥物是公認最有效的降脂藥物，具有較好的耐受性和安全性。他汀類藥物是羥甲基戊二酰輔酶A（hydroxylmethylglutaryl-coenzyme A，HMG-CoA）還原酶抑制劑，主要通過競爭性抑制膽固醇合成的限速酶-HMG-CoA 還原酶的活性，阻斷肝細胞內膽固醇的合成，上調肝細胞表面LDL 受體的水平，促進血液中LDL 膽固醇的清除，從而達到有效降低血脂水平的目的。但不同個體對他汀藥物的反應不同，個體的差異主要與他汀類藥物代謝的酶、轉運蛋白及藥物靶受體等的基因多態性相關［4］，特別是與編碼他汀類藥物肝臟代謝關鍵轉運蛋白（OATP1-B1）的SLCO1B1 基因以及參與體內脂質代謝的APOE 基因多態性相關。它們可影響他汀類藥物在血漿和肝臟中的濃度，進而影響他汀類藥物的療效和安全性［5］。

本研究通過收集臨床診斷為高脂血癥患者的基線血脂和應用他汀類降脂后的血脂結果等數據，采集患者的靜脈血進行基因多態性的檢測，根據收集到的數據及臨床資料做SLCO1B1 521T ＞C位點和APOE 基因E2、E4 位點多態性與他汀類藥物療效的相關性研究分析。

1 對象與方法

1.1 研究對象選取2016年6月至2018年3月就診于昆明醫科大學附屬延安醫院且診斷為高脂血癥的住院患者81 例作為研究對象，其中男62 例，女19 例，年齡為（62 ± 12.43）歲。診斷標準參照2007年版《中國成人血脂異常防治指南》［6］：（1）膽固醇（total cholesterol，TC）≥6.22 mmol/L；（2）甘油三酯（triglyceride，TG）≥2.26 mmol/L；（3）低密度脂蛋白（low density lipoprotein cholesterol，LDL-C）≥4.14 mmol/L。符合上述條件之一確診為高脂血癥。排除入院前已使用調脂藥物的患者及慢性肝病、嚴重腎功能不全、腫瘤、對他汀類藥物過敏和家族性高膽固醇血癥患者。

1.2 研究方法

1.2.1 臨床資料收集收集口服他汀類藥物進行降脂治療患者的用藥前、用藥1 個月后的5 項血脂TG、TC、高密度脂蛋白（high density lipoprotein cholesterol，HDL-C）、LDL-C、載脂蛋白A1（apolipoprotein A1，APOA1）檢測結果，并隨訪觀察患者用藥期間的不良反應情況。血脂檢測使用儀器為貝克曼全自動生化分析儀AU5421，所用試劑為貝克曼原廠配套試劑。

1.2.2 DNA 提取取患者EDTA 抗凝靜脈全血2 mL 進行核酸提取，使用天根生化科技股份有限公司血液基因組DNA 提取試劑盒（離心柱法），具體操作方法參照提取試劑盒操作說明書。

1.2.3 SLCO1B1 和APOE 的熒光PCR 檢測使用武漢友芝友醫療科技股份有限公司的人類SLCO1B1 和APOE 基因檢測試劑盒，采用多重熒光PCR 法對提取的DNA 進行SLCO1B1 基因SLCO1B1*5 521T ＞C 位點和APOE 基因E2、E4位點的檢測。反應體系：基因組DNA 2 μL，SLCO1B1*5 反應液、APOE2 反應液、APOE4 反應液分別23 μL，共25 μL。循環參數設置：UNG 處理階段共1 個循環，溫度設定37 ℃，共10 min；預變性階段共1 個循環，溫度設定為95 ℃，共5 min；PCR 反應階段共40 個循環，循環溫度設定為95 ℃，時間為15 s，60 ℃時間為1 min，熒光信號的收集定為FAM 和VIC，并在60 ℃采集熒光信號。

1.3 統計學方法采用SPSS 17.0 數據分析包對所得到的實驗數據進行統計學分析。計量資料符合正態分布采用（±s）表示，偏態分布采用四分位數表示，兩組間正態分布計量資料采用獨立樣本t 檢驗或配對t 檢驗；偏態分布計量資料比較采用兩樣本秩和檢驗。計數資料采用率及構成比表示，計數資料及多組間的計量資料比較采用χ2檢驗，以P＜0.05 表示差異有統計學意義。

2 結果

2.1 基因型多態性頻率的Hardy-Weinberg H-W遺傳平衡檢驗采用直接計數法統計基因型，計算各位點等位基因頻率。基因型分布符合H-W 平衡，說明具有群體代表性。見表1、2。

2.2 SLCO1B1 521T ＞C 位點與應用他汀類藥物療效相關性分析SLCO1B1 521T ＞C位點應有CC、TC 和TT 3 個基因型，此次未檢測到CC 型，所以只對TC 型組和TT 型組這2 個基因型組進行統計分析：用藥前5 個血脂指標（TG、TC、HDL-C、LDL-C、APOA1）分別進行組間比較，TC 型組、TT 型組間的差異無統計意義（P ＞0.05）。用藥后5 個血脂分別進行組間比較：APOA1 水平組間比較，差異有統計學意義（P＜0.05），且TT 型組APOA1 水平變化顯著高于TC 型組；其余4 個血脂指標（TG、TC、HDL-C、LDL-C）的組間差異無統計意義（P＞0.05）。見表3。

表1 SLCO1B1 基因的等位基因頻率和基因型頻數分布及H-W 平衡檢驗Tab.1 Allele frequency and genotype frequency distribution of SLCO1B1 gene and H-W balance test 例

表2 APOE 基因的等位基因頻率和基因型頻數分布及H-W 平衡檢驗Tab.2 Allele frequency and genotype frequency distribution of APOE gene and H-W balance test 例

表3 SLCO1B1 521T ＞C 位點與他汀類藥物療效Tab.3 Efficacy between SLCO1B1 521T ＞C and statins ±s

表3 SLCO1B1 521T ＞C 位點與他汀類藥物療效Tab.3 Efficacy between SLCO1B1 521T ＞C and statins ±s

參數TC（mmol/L）用藥前用藥后TG（mmol/L）用藥前用藥后HDL-C（mmol/L）用藥前用藥后LDL-C（mmol/L）用藥前用藥后APOA1（g/L）用藥前用藥后TT 型（69 例）4.57±1.11 3.83±0.95 2.43±1.92 1.53±0.72 0.98±0.22 0.98±0.22 2.75±0.88 2.25±0.81 1.20±0.27 1.17±0.18 TC 型（12 例）4.93±1.49 3.55±1.02 2.29±1.25 1.38±0.47 0.95±0.27 0.95±0.27 2.84±1.06 2.06±0.88 1.21±0.30 0.93±0.33 t 值-0.977 0.940 0.237 0.667 0.419 1.601-0.305 0.726-0.069 2.488 P 值0.331 0.350 0.813 0.507 0.677 0.113 0.761 0.470 0.945 0.028

2.3 APOE 基因與他汀類藥物療效的相關性分析APOE 基因共有E2/E3、E2/E2、E3/E3、E2/E4、E3/E4、E4/E4 6 個基因型，此次未檢測到E2/E2、E4/E4 型。根據其基因表型分為APOE E2 型（E2/E3、E2/E2）、APOE E3 型（E3/E3、E2/E4）和APOE E4 型（E3/E4、E4/E4）3 組。E2 型患者9 例，E3 型58例，E4 型14 例。對3 組數據進行統計分析得出：E2 型、E3 型E4 型與他汀類藥物用藥前的血脂水平相關性研究：用藥前E2 型、E3 型和E4 型與TG、TC 、HDL-C 和APOA1 水平間有差異，E2 型的TG和TC 水平顯著高于E3 和E4 型的患者，E4 型的HDL-C 和APOA1 水平顯著高于E2 和E3 型患者，其余血脂指標差異無統計意義（P＞0.05）。

E2 型、E3 型E4 型與他汀類藥物用藥后血脂水平相關性研究：用藥后患者的E2 型、E3 型和E4型與TG 、TC 和LDL-C 水平之間有差異，且E4 型的TC 和LDL-C 水平顯著高于E2 型、E3 型患者，E2型的TG 顯著高于E3 型和E4 型的患者。其余血脂指標差異無統計意義（P＞0.05）。見表4。

3 討論

有研究指出，應用他汀類藥物用藥后血脂結果變化的差異可達10%～70%［7］。這些差異受多種因素影響，除患者的性別、年齡、生活方式、用藥的依從性等非遺傳因素外，基因多態性已成為影響他汀類藥物調脂效果及不良反應發生風險的重要因素之一。

SLCO1B1 基因定位于12 號染色體短臂12 區（12p12），全長約109 kb，有14 個編碼外顯子和一個非編碼外顯子［8］。COUVERT 等［9］和THOMPSON等［10］研究結果顯示SLCO1B1 基因521 T ＞C 多態性與他汀療效無關聯。張昀赟等［11］研究得出SLCO1B1 521 T ＞C 基因變異可增強瑞舒伐他汀鈣降脂療效不同。APOE 基因多態性已被證實是心腦血管疾病的危險因素［12］。劉國棟等［13］研究中指出不同的基因表型間個體血脂水平存在差異，APOE 基因表型組各占比E3 型＞E4 型＞E2型，E2、E3 表型組TC 濃度水平與E4 表型組比較差異有統計學意義（P ＜0.05）。3 組均值比較顯示E2 表型組TG 濃度最高，E4 表型組TC、LDL-C濃度均值最高。

表4 APOE 基因與5 個血脂指標之間的關系Tab.4 Analysis of APOE gene and seven blood lipid indices

本研究中檢測SLCO1B1 521T ＞C 位點基因多態性，對得到的TT 型、TC 型這2 個基因型組進行組間比較，用藥后APOA1 水平組間比較差異有統計學意義（P ＜0.05），TC 型組顯著高于TT 型組，2組間的其余4 個血脂指標的組間比較差異無統計學意義（P ＞0.05），提示SLCO1B1 521T ＞C 位點與他汀類藥物的療效有一定的相關性，需進一步深入研究。另對APOE 位點E2 型、E3 型和E4 型3組進行組間比較，用藥前5 個血脂指標分別進行組間比較：TG、TC、HDL-C、APOA1 水平組間比較差異有統計學意義（均P＜0.05）。用藥后5 個血脂分別進行組間比較：TG 、TC、LDL-C 水平組間比較差異有統計學意義（均P＜0.05）。這一研究結果與劉國棟等人的研究中得出E4 表型組在TC、LDL-C 濃度最高的結果相符。

基于分子生物學技術的不斷發展，聯合各種實驗室不同檢測項目的檢驗，未來SLCO1B1 和APOE基因的實驗室檢測將會更加成熟地應用于臨床，在他汀類藥物的個體化防治中發揮重要作用。