雞大腸桿菌的分離鑒定及藥敏試驗(yàn)

徐秋鳳

(河南省方城縣動(dòng)物衛(wèi)生監(jiān)督所,河南方城 473200)

大腸桿菌病是以侵害腸道為主的原發(fā)性傳染病，由致病性大腸桿菌及其毒素引起，其中包括大腸桿菌輸卵管炎、腸炎、關(guān)節(jié)炎、腹膜炎等各種疾病，對(duì)養(yǎng)雞業(yè)危害極大。

2018年4月，方城縣博望鎮(zhèn)某雞場(chǎng)雞群出現(xiàn)精神萎靡不振、采食減少或不食、離群呆立或蹲伏不動(dòng)、羽毛松亂、肛門周圍羽毛粘有糞便、綠色或黃白色稀糞、并陸續(xù)出現(xiàn)死亡，對(duì)病死雞進(jìn)行剖檢觀察疑似為大腸桿菌病。但該雞場(chǎng)對(duì)此病癥治療狀況不佳。

因此，防止本病時(shí)應(yīng)對(duì)分離到的大腸桿菌進(jìn)行藥物敏感性試驗(yàn)，在此基礎(chǔ)上篩選出高效藥物用以治療，才能收到預(yù)期的效果。本次試驗(yàn)即對(duì)方城縣博望鎮(zhèn)范圍內(nèi)雞大腸桿菌的致病群進(jìn)行分離鑒定及藥敏試驗(yàn)，起到對(duì)全縣養(yǎng)殖場(chǎng)（戶）雞大腸桿菌病的提供有效幫助。

1 試驗(yàn)準(zhǔn)備

1.1 選取材料

（1）樣品的采集：通過對(duì)我縣博望鎮(zhèn)某雞場(chǎng)送檢的疑似大腸桿菌病的病料進(jìn)行樣品采集，死亡雞只死亡時(shí)間不超過24h。

（2）試劑準(zhǔn)備：麥康凱瓊脂培養(yǎng)基及生化試劑均由市場(chǎng)采購(gòu)。

（3）藥片準(zhǔn)備：采用市售的多粘霉素E、螺旋霉素、新霉素等含藥紙片。

（4）實(shí)驗(yàn)動(dòng)物選用昆明系小白鼠雌雄各6只。

1.2 試驗(yàn)方法

1.2.1 病株的分離與培養(yǎng) 將提前采集的心血、肝、脾、等樣品接種在麥康凱瓊脂培養(yǎng)基上，于恒溫箱內(nèi)37℃培養(yǎng)18～24h，觀察菌落生成情況，從培養(yǎng)基上挑取粉紅色、表面光滑的單個(gè)菌落分別接種到營(yíng)養(yǎng)瓊脂斜面上，于恒溫箱內(nèi)37℃培養(yǎng)18～24h后，置冰箱備用。

1.2.2 染色鏡檢 將以上所得的菌株分別進(jìn)行涂片，革蘭氏染色后鏡檢，通過觀察細(xì)菌形態(tài)和染色特征，選取符合大腸桿菌形態(tài)特征的菌株進(jìn)行生化實(shí)驗(yàn)。

1.2.3 生化試驗(yàn) 用分離出的純培養(yǎng)物進(jìn)行吲哚試驗(yàn)、枸櫞酸鹽試驗(yàn)、MR試驗(yàn)、VR試驗(yàn)、糖發(fā)酵試驗(yàn)，根據(jù)觀察變化記錄結(jié)果。

1.2.4 毒力實(shí)驗(yàn) 選取通過鏡檢及生化反應(yīng)的大腸桿菌特性的菌株接種營(yíng)養(yǎng)瓊脂平板，于恒溫箱內(nèi)37℃培養(yǎng)18h，將菌落制成菌懸液。選取小白鼠公母各3只，一組每只皮下注射0.2ml菌懸液，另一組注射相同劑量的無(wú)菌生理鹽水。觀察將1～2d內(nèi)死亡的小鼠立即解剖，采取其心血接種于營(yíng)養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基上，于恒溫箱內(nèi)37℃培養(yǎng)18h，并對(duì)分離出的菌株進(jìn)一步鑒定。

1.2.5 藥敏試驗(yàn) 將0.1ml稀釋好的菌液接種到平板上，讓菌液均勻鋪滿平板，待干后，將5張藥片貼于一個(gè)平板上，每藥片間距3cm之上，全部貼好后置于37℃的恒溫箱中培養(yǎng)18～24h，取出后觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果測(cè)量每個(gè)藥片的抑菌圈直徑，做好記錄，最后依據(jù)藥物的判定標(biāo)準(zhǔn)，判定藥物的敏感度及耐藥性結(jié)果。

2 試驗(yàn)結(jié)果

2.1 分離培養(yǎng)情況

培養(yǎng)后可在培養(yǎng)基上發(fā)現(xiàn)邊緣整齊、表面濕潤(rùn)光滑、呈粉紅色的菌落；在普通瓊脂培養(yǎng)基上出現(xiàn)了濕潤(rùn)光滑、整齊、圓形、隆起、灰白色的菌落，其菌落特征與大腸桿菌的特征相符。

2.2 染色鏡檢情況

通過革蘭氏染色分離菌株顯示陰性小桿菌，多單個(gè)存在，兩端鈍圓，菌株的染色鏡檢與大腸桿菌染色特性相吻合。

2.3 生化試驗(yàn)鑒定情況

分離出菌株的生化試驗(yàn)結(jié)果能發(fā)酵麥芽糖、乳糖、葡萄糖、甘露醇，均能產(chǎn)酸產(chǎn)氣，大多數(shù)菌株不發(fā)酵蔗糖，少數(shù)緩慢發(fā)酵，VP實(shí)驗(yàn)、枸櫞酸鹽試驗(yàn)均為陰性，MR試驗(yàn)、吲哚試驗(yàn)均為陽(yáng)性，以上試驗(yàn)結(jié)果可以證明分離出的菌株為大腸桿菌。

2.4 毒力試驗(yàn)情況

用菌懸液體接種試驗(yàn)組的小白鼠，于接種后2小時(shí)出現(xiàn)精神萎靡，接著出現(xiàn)拉稀腹瀉等臨床癥狀，接種1天后開始1只死亡，2天內(nèi)6只全部死亡，對(duì)死小白鼠進(jìn)行解剖，均見其肝臟腫大，內(nèi)臟淤血，在心、肝中分離出大腸桿菌，而對(duì)照組的6只小白鼠無(wú)明顯變化，由此可見，從雞內(nèi)臟分離出的大腸桿菌均有較強(qiáng)的致病性。

2.5 藥敏試驗(yàn)情況

用19種藥物對(duì)分離出的菌株進(jìn)行藥敏試驗(yàn)，其結(jié)果如附表所示。

附表 分離菌株的藥物敏感性實(shí)驗(yàn)結(jié)果 （mm）

結(jié)果表明，分離菌對(duì)慶大霉素、卡那霉素、阿莫西林、新霉素、氨芐青霉素、復(fù)方新諾明、強(qiáng)力霉素7種藥物具有耐藥性，對(duì)多粘菌素E、阿奇霉素、頭孢噻肟、羅紅霉素、螺旋霉素、頭孢拉啶6種藥物較為敏感，其它藥物中度敏感。

3 討論

（1）通過對(duì)我縣博望鎮(zhèn)某雞場(chǎng)發(fā)生的疑似大腸桿菌病樣品的試驗(yàn)，從菌株特征、染色鏡檢、生化試驗(yàn)、毒力試驗(yàn)幾個(gè)方面來看均和大腸桿菌特征相符，且有較強(qiáng)的致病性。

（2）藥敏試驗(yàn)結(jié)果表明大腸桿菌分離菌株對(duì)多粘菌素E、阿奇霉素、頭孢噻肟、羅紅霉素、螺旋霉素、頭孢拉啶6種藥物較為敏感，對(duì)慶大霉素、卡那霉素、阿莫西林、新霉素、氨芐青霉素、復(fù)方新諾明、強(qiáng)力霉素7種藥物具有耐藥性，對(duì)其它的藥物中度敏感，這為預(yù)防和治療該病提供了理論依據(jù)。

4 防治措施

（1）通過使用敏感藥物多粘菌素E、阿奇霉素、頭孢噻肟、羅紅霉素、螺旋霉素、頭孢拉啶進(jìn)行雞大腸桿菌治療取得了理想的效果，在以后的用藥中建議根據(jù)實(shí)際情況交替用藥，以防耐藥情況發(fā)生。

（2）利用分離出菌株培養(yǎng)后制成自家菌滅活苗，于7～15日齡、30日齡、120日齡各免疫一次，可取得良好的效果。

（3）加強(qiáng)消毒，采用戊二醛、聚維酮碘等消毒劑定期消毒。

（4）采用中草藥預(yù)防抗生素治療。平時(shí)采用黃連、黃芩、黃柏、紅花、白頭翁、板藍(lán)根、大蒜等預(yù)防，以減少耐藥性，發(fā)病時(shí)采用抗生素治療。

（5）提高科學(xué)飼養(yǎng)管理能力，全方位提升管理水平，嚴(yán)格執(zhí)行消毒制度，搞好環(huán)境衛(wèi)生，按免疫程序科學(xué)防疫，加強(qiáng)雞場(chǎng)群體的抗病能力，達(dá)到預(yù)防和減少疫病發(fā)生，增加養(yǎng)殖效益之目的。