IL-28B基因多態性對直接抗病毒藥物治療慢性丙型肝炎患者療效的預測價值

譚文敏 賴庭文 韓鋒

目前，臨床針對CHC患者可采用直接抗病毒(DAA)治療，控制病情進展。然而，部分患者對治療不應答，停藥后復發問題尚未得到解決[1]。近年來，研究發現白細胞介素-28B(IL-28B)基因多態性可能與抗病毒治療療效存在關聯，但有待進一步證實[2]。本研究主要分析了外周血IL-28B基因多態性對DAA治療CHC患者療效的預測價值，以為臨床治療提供依據，提高治療效果，現報道如下。

資料與方法

一、一般資料

選取2014年1月—2017年1月海南醫學院第一附屬醫院收治的CHC患者169例，男97例，女72例；年齡22～55歲，平均年齡為(31.29±8.64)歲。納入標準：(1)參考《中國丙型病毒性肝炎醫院感染防控指南》[3]診斷：伴有尿黃眼黃、食欲減退、惡心、乏力等表現；(2)血清HCV RNA呈陽性；(3)血清谷丙轉氨酶(ALT)、谷草轉氨酶(AST)增高；(4)經MRI、CT等檢查提示無肝硬化表現。體質指數為18～26 kg/m2，平均為(22.64±2.18)kg/m2；血清HCV RNA為≤4×105拷貝/毫升者90例，>4×105拷貝/毫升79例；有飲酒史者31例，有吸煙史者27例，有脂肪肝者16例，有高血壓病者43例；HCV基因型為Ib型者150例，非Ib型19例。納入患者入院前未進行過抗病毒治療。排除標準：(1)妊娠、哺乳期婦女；(2)惡性腫瘤；(3)自身免疫性疾病；(4)既往有吸毒史；(5)合并存在甲狀腺機能亢進癥?；颊呓o出書面知情同意書，本研究方案經本院醫學倫理委員會通過。

二、治療方法

DAA方案：給予索非布韋(吉利德)400 mg口服，1次/d，達拉他韋(AstraZeneca Pharmaceuticals LP)60 mg口服，1次/d，共治療24周。

三、療效評定

在治療24周后入院復查，評價療效。參考《中國丙型病毒性肝炎醫院感染防控指南》[3]評估：(1)快速病毒學應答(RVR)：療程滿4周后，未測到HCV RNA；早期應答(EVR)：療程滿12周后，HCV RNA下降≥2個對數級，或<最低檢測限；持續應答(SVR)：療程滿24周后，HCV RNA<最低檢測限；無應答(NR)：未滿足上述標準。

四、IL-28B基因多態性測定

儀器包括PCR擴增儀(美國ABI PCR 9700)、熒光定量PCR儀(美國ABI 7000)、離心機(德國Sigma 3-18K)、凝膠圖像分析系統(上海天能 GIS-2010)、電泳儀(北京六一 DYY-Ⅲ8)、分光光度計(Eppendorf BioPhotometer)。首先根據DNA提取試劑盒說明書進行操作提取DNA：具體如下：①搗碎凝血塊，取100 μL放置在離心管內，取800 μL溶血試劑，離心5 min(8 000 rpm)，分離血清；②取溶血試劑800 μL加入，離心5 min(8 000 rpm)，分離血清，搗碎；③于60℃環境下水??；④加飽和酚500 μL，離心5 min(12 000 rpm)；⑤對上層水相進行吸取，置于離心管內，加氯仿300 μL，離心10 min(12 000 rpm)；⑥分離上層清液，置于離心管內，再次加氯仿、離心；⑦分離血清，加NaAC，加異丙醇，沉淀20 min，溫度為-20℃；⑧離心10 min(12 000 rpm)，分離血清；⑨若溶解不充分，則水浴30 min，溫度為55℃；⑩對DNA純度進行測定，獲得電泳結果。獲得DNA后，經PCR擴增儀對其進行擴增，設空白對照(3個)，反應條件為95℃ 5 min，(95℃ 30 s，64℃ 30 s，72℃ 1 min，35個循環)，72℃ 10 min。經配套軟件對熒光信號進行讀取，分析等位基因類型。

五、統計學方法

經SPSS 20.0軟件分析對臨床資料進行分析，計數資料用(%)表示，采用χ2檢驗，利用logistic回歸模型分析IL-28B基因多態性是否為CHC患者抗病毒療效的影響因素。P<0.05為差異有統計學意義。

結 果

一、169例CHC患者預后與IL-28B基因多態性的關系

在169例CHC患者中，有135例存在病毒學應答，占79.88%，34例無應答，占20.12%。在有應答組中，rs8099917TT、rs12979860CC占比分別為89.63%、88.15%，顯著高于無應答組的44.12%、47.06%(P<0.05)，見表1。

表1 CHC患者預后與IL-28B基因多態性的關系[n(%)]

二、CHC患者預后與臨床特征的關系 有應答組無脂肪肝、Child肝功能A級、rs8099917 TT、rs12979860CC占比分別為94.81%、40.00%、89.63%、88.15%，顯著高于無應答組的73.53%、26.47%、44.12%、47.06%(P<0.05)，見表2。

表2 CHC患者預后與臨床特征的關系[n(%)]

續表2

注：*采用連續性校正卡方檢驗

三、CHC患者預后的影響因素分析

利用logistic回歸模型對各變量進行量化賦值，見表3，根據表2將脂肪肝、Child肝功能分級、rs8099917、rs12979860納入模型，結果提示脂肪肝、Child肝功能C級、rs8099917TG、rs12979860CT是患者抗病毒治療無病毒學應答的危險因素(P<0.05)，見表4。

表3 量化賦值表

表4 CHC患者預后的影響因素分析

討 論

CHC是臨床常見的肝病，目前，臨床針對病毒性肝炎患者主要采用抗病毒治療，部分患者經治療后能取得較理想的效果，然而，部分病例效果欠佳。研究表明約50%～80%的CHC病例經治療后能獲得病毒學應答[4]。本研究結果提示在169例患者中，有135例經DAA治療后存在病毒學應答，應答率為79.88%，與上述研究結論基本符合。

本研究發現IL-28B的rs8099917TG、rs12979860CT位點基因對抗病毒療效影響較大，其中rs8099917TT、rs12979860CC獲得應答的幾率更高，而rs8099917TG、rs12979860CT獲得應答的幾率相對較小。IL-28B基因在19號染色體上編碼為IFN-λ3，即便含量較低，也能對病毒感染誘導進行表達。既往有研究發現IL-28B危險等位基因可下調IFN-λ水平，并導致細胞因子功能削弱，降低機體抗病毒應答能力，這提示IL-28B基因可能與病毒感染疾病進展存在關聯[5]。另有研究指出要想明確IL-28B基因與丙型肝炎的關系，必須先明確IFN-λ與丙型肝炎的關系[6]。IFN-λ主要通過病毒誘導生成，它與受體相結合，能將Jak-Stat信號途徑激活，并激活ISGF3轉錄復合物，達到抗病毒目的。肝細胞、上皮組織中均含IFN-λ受體，它有抗病毒作用。國外研究發現在IL-28B的rs8099917位點基因中，TT屬于保護性基因，攜帶此基因的患者更易獲得SVR，且IL-28B多態性對IFN-λ表達水平有明顯影響[7]。本研究結果也提示攜帶rs8099917 TT基因的患者病毒學應答率更高，與上述研究結論基本符合。這可能的機制在于攜帶IL-28B優勢基因的患者干擾素刺激基因(ISG)表達較低，其在外源性IFN-α影響下可增強IL-28B誘導作用，提高ISG表達水平，有利于獲得SVR。

本研究還發現IL-28B的rs12979860 CC基因也是CHC患者抗病毒治療療效的保護性基因。有學者以HCV感染者為研究對象，發現rs12979860 CC基因占比高達93.4%，CT型占比僅6.6%，在CC型基因中，超過70%的患者經治療后能獲得SVR[9]，與本研究結論基本符合。本研究經logistic回歸模型證實CHC患者DAA療效的影響因素包括脂肪肝、Child肝功能C級、rs8099917TG、rs12979860CT。其中脂肪肝、肝功能分級已被相關研究[10]證實為CHC患者DAA療效的影響因素，本研究創新點在于證實rs8099917TG、rs12979860CT也對DAA療效有影響，能為該病治療提供依據。在CHC患者未來的治療中，臨床可根據IL-28B基因多態性進行干預，若患者具備優勢基因型，則可給予常規抗病毒治療，或縮短服藥時間，降低不良反應風險。若患者無優勢基因型，可根據情況選擇小分子靶向抗病毒治療，改善預后。

綜上，CHC患者DAA療效與IL-28B的rs8099917TG、rs12979860CT位點基因表達有關，臨床可將其作為預測療效的重要指標。本研究因受研究時間、研究經費的限制，僅納入169例患者為研究對象，未來將擴大樣本量對此進行大樣本、多中心的研究。