清肝降濁顆粒治療大鼠絕經后非酒精性單純性脂肪肝的實驗研究

王永香，鄧厚波，王勝軍，丁云錄，李 琳，成光宇，連樹林*

（1.北京大學腫瘤醫院吉林國文醫院，吉林 公主嶺 136100；2.長春中醫藥大學附屬醫院，長春 130103）

清肝降濁顆粒是長春中醫藥大學附屬醫院臨床應用驗方，對痰證，虛損，胸痹等均有較好療效。本研究旨在證實其對絕經大鼠NAFL模型的降低血脂肝脂含量、保肝降酶及升高肝總脂酶的作用，為清肝降濁顆粒對絕經后非酒精性單純性脂肪肝的臨床治療提供實驗室數據支持。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 Wistar大鼠，雌性，SPF級，體質量（250±10）g，購于長春市億斯實驗動物技術有限責任公司，合格證號：SCXK-（吉）2016-0003。

1.1.2 藥品 清肝降濁顆粒，顆粒劑，批號：201812 15，由長春中醫藥大學實驗研究中心植物化學室提供。

1.1.3 試劑 氨基甲酸乙酯，規格：500 g/瓶，批號：T20100310，國藥集團化學試劑有限公司產品；膽固醇，規格：分析純，500 g/瓶，批號：LOT5AF10250，北京鼎國昌盛生物技術有限責任公司產品；膽酸鈉（豬），規格，分析純，500 g/瓶，批號：K01N8B47111，上海源葉生物技術有限公司產品；總膽固醇檢測試劑盒，批號：181971；甘油三脂檢測試劑盒，批號：187651；高密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒，批號：180751；低密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒，批號：180831；天冬氨酸氨基轉移酶試劑盒，批號：180437；丙氨酸氨基轉移酶試劑盒，批號：180526；中生北控生物科技股份有限公司產品；脂蛋白脂酶試劑盒，批號：20180601A；肝脂酶試劑/盒，批號：20180601A，美國RD公司產品。

1.1.4 儀器 Junior全自動分析儀，荷蘭威圖公司；BIO680酶 標 儀，Japan BIO RAD公 司；Biofuge Stratos臺式高速冷凍離心機，德國賀利氏公司；FSH-2可調高速勻漿器，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司；HH·SY21-Ni電熱恒溫水浴鍋，北京長源試驗設備廠。

1.2 方法

1.2.1 實驗造模與分組 去勢造模[1-3]：取體質量（240～260）g的雌性WISTAR大鼠70只，隨機選10只作為假手術組，其余大鼠制作去勢模型。以20%氨基甲酸乙酯按5 mL/kg腹腔注射（ip）將動物麻醉，固定，背部肋骨下端脊柱兩側脫毛，碘酒消毒，切開背部皮膚和肌肉，找到卵巢。先細手術線結扎卵巢下輸卵管，摘除左側卵巢，同一種方法行右側卵巢摘除術。術后連續3日肌注青霉素20萬U/kg，以防感染。連續6 d陰道涂片檢查，以確保手術成功。選擇50只造模成功的大鼠，分為對照組；模型組；清肝降濁顆粒設高（800 mg/kg）、中（400 mg/kg）、低（200 mg/kg）3個劑量組。每組10只大鼠，共分5組。NAFL模型制備[4-6]，對照組飼喂常規飼料；余各組均高脂飼料飼養，高脂飼料配方（82.3%標準飼料+15%豬油+2%膽固醇+0.2%丙硫氧嘧啶+0.5%膽酸鈉），連續12周。灌胃給藥1次/d，給藥體積為10 mL/（kg·d），連續給藥12周，每周稱重1次。

1.2.2 檢測指標，實驗周期結束后，腹主動脈采血5 mL/只，采血前禁食不禁水12 h。全血靜止30 min，3500 rpm，離心15 min，取血清，檢測血清中TC、TG、HDL-cho、LDL-cho含量及AST、ALT活性。摘取肝臟稱重，計算臟器系數，定量剪取肝組織制備肝組織勻漿，檢測肝組織中TC、TG含量及LPL、HL水平。

1.3 統計學處理 統計學處理采用組間t檢驗，所列試驗數據以均數±標準差（±s）表示。

2 結果

2.1 各組血清中TC、TG、HDL-cho和LDL-cho含量較 見表1。

表1 各組血清中TC、TG、HDL-cho和LDL-cho含量較（± s，n = 10） mmol/L

表1 各組血清中TC、TG、HDL-cho和LDL-cho含量較（± s，n = 10） mmol/L

注：與模型對照組比較，# P＜0.05，## P＜0.01

組 別 給藥量/（mg/kg） TC TG HDL-cho LDL-cho空白對照組 - 1.94±0.49## 1.19±0.27## 0.57±0.19 0.82±0.15##模型對照組 - 5.86±1.51 3.10±0.77 0.59±0.25 1.75±0.65清肝降濁組 800 3.08±1.02## 1.80±0.49## 0.77±0.29 0.91±0.26##清肝降濁組 400 4.38±0.95# 2.10±0.76## 0.67±0.22 1.08±0.37#清肝降濁組 200 4.47±0.87# 2.17±0.86# 0.67±0.32 1.29±0.43

2.2 各組肝臟系數及肝功能情況比較 見表2。

表2 各組肝臟系數及肝功能情況比較（± s ，n = 10）

表2 各組肝臟系數及肝功能情況比較（± s ，n = 10）

注：與模型對照組比較，# P＜0.05，## P＜0.01

組 別 給藥量/（mg/kg） 肝臟系數/（g/100g） AST活性/（U/L） ALT活性/（U/L）空白對照組 - 3.76±0.36## 27.73±10.52## 32.84± 9.40##模型對照組 - 4.79±0.93 88.73±38.71 106.38±39.73清肝降濁組 800 3.92±0.74# 38.16± 9.59## 43.98±12.73##清肝降濁組 400 3.97±0.92 49.67±17.86# 50.02±19.27##清肝降濁組 200 4.02±0.77 57.64±15.93# 5 6.32±20.64##

2.3 各組肝臟脂質含量及總脂酶水平比較 見表3。

表3 各組肝臟脂質含量及總脂酶水平比較（± s，n = 10）

表3 各組肝臟脂質含量及總脂酶水平比較（± s，n = 10）

注：與模型對照組比較，# P＜0.05，## P＜0.01

組 別 給藥量/（mg/kg） TC/（mmol/mgprot） TG/（mmol/mgprot） LPL/（U/mgprot） HL/（U/mgprot）空白對照組 - 4.26±0.30## 18.95± 3.94## 21.79±3.37## 9.23±1.57##模型對照組 - 8.58±1.04 68.90±12.32 15.26±2.36 4.13±1.20清肝降濁組 800 5.00±0.76## 49.77±11.88## 19.48±3.27## 6.96±1.97##清肝降濁組 400 5.80±0.94## 51.00±14.99## 18.38±3.84# 6.02±2.01#清肝降濁組 200 6.38±0.71## 57.11±11.46# 17.67±4.84 5.65±1.65#

3 討論

婦女絕經后出現一系列脂代謝紊亂，TC、TG、LDL-cho含量明顯升高，而HDL-cho含量降低，這些不利改變和非酒精性單純性脂肪肝的發生密切相關[7-9]。非酒精性脂肪肝在我國成人中發病率較高，患病率絕經后女性患病率高于男性[10-12]。非酒精性單純性脂肪肝直接促進其他慢性肝病的進展，還參與2型糖尿病和動脈粥樣硬化性等心腦血管疾病的發病機率。近年來，中藥可通過多機制、多靶點來抑制非酒精性單純性脂肪肝發生發展，甚至能夠使已形成的病變逐步消退，體現了中藥治療非酒精性單純性脂肪肝的優勢。從本實驗我們可以看出，清肝降濁顆粒能夠絕經后大鼠NAFL模型血清及肝組織中的脂質含量，并且升高肝臟中總脂酶水平，降低血清轉氨酶含量，明顯改善肝臟系數，說明清肝降濁顆粒可以發揮其多靶點，具有多種機制協同作用，對防治絕經后非酒精性單純性脂肪肝顯示出了好的應用前景。