清肝降濁顆粒治療大鼠絕經(jīng)后非酒精性單純性脂肪肝的實驗研究

王永香，鄧厚波，王勝軍，丁云錄，李 琳，成光宇，連樹林*

（1.北京大學(xué)腫瘤醫(yī)院吉林國文醫(yī)院，吉林 公主嶺 136100；2.長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院，長春 130103）

清肝降濁顆粒是長春中醫(yī)藥大學(xué)附屬醫(yī)院臨床應(yīng)用驗方，對痰證，虛損，胸痹等均有較好療效。本研究旨在證實其對絕經(jīng)大鼠NAFL模型的降低血脂肝脂含量、保肝降酶及升高肝總脂酶的作用，為清肝降濁顆粒對絕經(jīng)后非酒精性單純性脂肪肝的臨床治療提供實驗室數(shù)據(jù)支持。

1 材料與方法

1.1 實驗材料

1.1.1 實驗動物 Wistar大鼠，雌性，SPF級，體質(zhì)量（250±10）g，購于長春市億斯實驗動物技術(shù)有限責(zé)任公司，合格證號：SCXK-（吉）2016-0003。

1.1.2 藥品 清肝降濁顆粒，顆粒劑，批號：201812 15，由長春中醫(yī)藥大學(xué)實驗研究中心植物化學(xué)室提供。

1.1.3 試劑 氨基甲酸乙酯，規(guī)格：500 g/瓶，批號：T20100310，國藥集團化學(xué)試劑有限公司產(chǎn)品；膽固醇，規(guī)格：分析純，500 g/瓶，批號：LOT5AF10250，北京鼎國昌盛生物技術(shù)有限責(zé)任公司產(chǎn)品；膽酸鈉（豬），規(guī)格，分析純，500 g/瓶，批號：K01N8B47111，上海源葉生物技術(shù)有限公司產(chǎn)品；總膽固醇檢測試劑盒，批號：181971；甘油三脂檢測試劑盒，批號：187651；高密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒，批號：180751；低密度脂蛋白膽固醇檢測試劑盒，批號：180831；天冬氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒，批號：180437；丙氨酸氨基轉(zhuǎn)移酶試劑盒，批號：180526；中生北控生物科技股份有限公司產(chǎn)品；脂蛋白脂酶試劑盒，批號：20180601A；肝脂酶試劑/盒，批號：20180601A，美國RD公司產(chǎn)品。

1.1.4 儀器 Junior全自動分析儀，荷蘭威圖公司；BIO680酶 標 儀，Japan BIO RAD公 司；Biofuge Stratos臺式高速冷凍離心機，德國賀利氏公司；FSH-2可調(diào)高速勻漿器，江蘇省金壇市榮華儀器制造有限公司；HH·SY21-Ni電熱恒溫水浴鍋，北京長源試驗設(shè)備廠。

1.2 方法

1.2.1 實驗造模與分組 去勢造模[1-3]：取體質(zhì)量（240～260）g的雌性WISTAR大鼠70只，隨機選10只作為假手術(shù)組，其余大鼠制作去勢模型。以20%氨基甲酸乙酯按5 mL/kg腹腔注射（ip）將動物麻醉，固定，背部肋骨下端脊柱兩側(cè)脫毛，碘酒消毒，切開背部皮膚和肌肉，找到卵巢。先細手術(shù)線結(jié)扎卵巢下輸卵管，摘除左側(cè)卵巢，同一種方法行右側(cè)卵巢摘除術(shù)。術(shù)后連續(xù)3日肌注青霉素20萬U/kg，以防感染。連續(xù)6 d陰道涂片檢查，以確保手術(shù)成功。選擇50只造模成功的大鼠，分為對照組；模型組；清肝降濁顆粒設(shè)高（800 mg/kg）、中（400 mg/kg）、低（200 mg/kg）3個劑量組。每組10只大鼠，共分5組。NAFL模型制備[4-6]，對照組飼喂常規(guī)飼料；余各組均高脂飼料飼養(yǎng)，高脂飼料配方（82.3%標準飼料+15%豬油+2%膽固醇+0.2%丙硫氧嘧啶+0.5%膽酸鈉），連續(xù)12周。灌胃給藥1次/d，給藥體積為10 mL/（kg·d），連續(xù)給藥12周，每周稱重1次。

1.2.2 檢測指標，實驗周期結(jié)束后，腹主動脈采血5 mL/只，采血前禁食不禁水12 h。全血靜止30 min，3500 rpm，離心15 min，取血清，檢測血清中TC、TG、HDL-cho、LDL-cho含量及AST、ALT活性。摘取肝臟稱重，計算臟器系數(shù)，定量剪取肝組織制備肝組織勻漿，檢測肝組織中TC、TG含量及LPL、HL水平。

1.3 統(tǒng)計學(xué)處理 統(tǒng)計學(xué)處理采用組間t檢驗，所列試驗數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示。

2 結(jié)果

2.1 各組血清中TC、TG、HDL-cho和LDL-cho含量較 見表1。

表1 各組血清中TC、TG、HDL-cho和LDL-cho含量較（± s，n = 10） mmol/L

表1 各組血清中TC、TG、HDL-cho和LDL-cho含量較（± s，n = 10） mmol/L

注：與模型對照組比較，# P＜0.05，## P＜0.01

組 別 給藥量/（mg/kg） TC TG HDL-cho LDL-cho空白對照組 - 1.94±0.49## 1.19±0.27## 0.57±0.19 0.82±0.15##模型對照組 - 5.86±1.51 3.10±0.77 0.59±0.25 1.75±0.65清肝降濁組 800 3.08±1.02## 1.80±0.49## 0.77±0.29 0.91±0.26##清肝降濁組 400 4.38±0.95# 2.10±0.76## 0.67±0.22 1.08±0.37#清肝降濁組 200 4.47±0.87# 2.17±0.86# 0.67±0.32 1.29±0.43

2.2 各組肝臟系數(shù)及肝功能情況比較 見表2。

表2 各組肝臟系數(shù)及肝功能情況比較（± s ，n = 10）

表2 各組肝臟系數(shù)及肝功能情況比較（± s ，n = 10）

注：與模型對照組比較，# P＜0.05，## P＜0.01

組 別 給藥量/（mg/kg） 肝臟系數(shù)/（g/100g） AST活性/（U/L） ALT活性/（U/L）空白對照組 - 3.76±0.36## 27.73±10.52## 32.84± 9.40##模型對照組 - 4.79±0.93 88.73±38.71 106.38±39.73清肝降濁組 800 3.92±0.74# 38.16± 9.59## 43.98±12.73##清肝降濁組 400 3.97±0.92 49.67±17.86# 50.02±19.27##清肝降濁組 200 4.02±0.77 57.64±15.93# 5 6.32±20.64##

2.3 各組肝臟脂質(zhì)含量及總脂酶水平比較 見表3。

表3 各組肝臟脂質(zhì)含量及總脂酶水平比較（± s，n = 10）

表3 各組肝臟脂質(zhì)含量及總脂酶水平比較（± s，n = 10）

注：與模型對照組比較，# P＜0.05，## P＜0.01

組 別 給藥量/（mg/kg） TC/（mmol/mgprot） TG/（mmol/mgprot） LPL/（U/mgprot） HL/（U/mgprot）空白對照組 - 4.26±0.30## 18.95± 3.94## 21.79±3.37## 9.23±1.57##模型對照組 - 8.58±1.04 68.90±12.32 15.26±2.36 4.13±1.20清肝降濁組 800 5.00±0.76## 49.77±11.88## 19.48±3.27## 6.96±1.97##清肝降濁組 400 5.80±0.94## 51.00±14.99## 18.38±3.84# 6.02±2.01#清肝降濁組 200 6.38±0.71## 57.11±11.46# 17.67±4.84 5.65±1.65#

3 討論

婦女絕經(jīng)后出現(xiàn)一系列脂代謝紊亂，TC、TG、LDL-cho含量明顯升高，而HDL-cho含量降低，這些不利改變和非酒精性單純性脂肪肝的發(fā)生密切相關(guān)[7-9]。非酒精性脂肪肝在我國成人中發(fā)病率較高，患病率絕經(jīng)后女性患病率高于男性[10-12]。非酒精性單純性脂肪肝直接促進其他慢性肝病的進展，還參與2型糖尿病和動脈粥樣硬化性等心腦血管疾病的發(fā)病機率。近年來，中藥可通過多機制、多靶點來抑制非酒精性單純性脂肪肝發(fā)生發(fā)展，甚至能夠使已形成的病變逐步消退，體現(xiàn)了中藥治療非酒精性單純性脂肪肝的優(yōu)勢。從本實驗我們可以看出，清肝降濁顆粒能夠絕經(jīng)后大鼠NAFL模型血清及肝組織中的脂質(zhì)含量，并且升高肝臟中總脂酶水平，降低血清轉(zhuǎn)氨酶含量，明顯改善肝臟系數(shù)，說明清肝降濁顆粒可以發(fā)揮其多靶點，具有多種機制協(xié)同作用，對防治絕經(jīng)后非酒精性單純性脂肪肝顯示出了好的應(yīng)用前景。