STAT 3、versican在膽囊癌中的表達及與患者臨床特征的關系

胡晟，劉永國，陳翔

重慶市第四人民醫院肝膽外科，重慶400014

膽囊癌患者的預后較差，且生活質量明顯下降[1-2]。在對膽囊癌病情進展的內在機理進行研究的過程中發現，腫瘤調控蛋白的改變在膽囊癌病情進展過程中發揮重要作用。信號轉導蛋白和轉錄激活物3（signal transducer and activator of transcription 3，STAT3）的表達上調，能夠通過提高腫瘤細胞內腫瘤信號通路的激活程度，提高腫瘤基因的轉錄激活程度，進而促進膽囊上皮細胞的早期異常分裂[3]。多能蛋白聚糖（versican）的表達，能夠通過提高膽囊癌細胞對鄰近間質組織成分的黏附和浸潤能力，促進膽囊癌細胞的擴散和轉移[4]。本研究對膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3、versican蛋白的表達情況進行分析，并探討其與患者臨床特征的關系，現報道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2014年1月至2017年7月重慶市第四人民醫院收治的膽囊癌患者。納入標準：①符合人民衛生出版社《外科學》第8版中膽囊癌的診斷標準[5]；②經術后病理學檢查確診為膽囊癌；③年齡≤79歲；④TNM分期為Ⅰ～Ⅲ期。排除標準：①合并其他部位惡性腫瘤；②獲取標本前，患者具有放化療史。根據納入和排除標準，本研究共納入膽囊癌患者58例作為膽囊癌組。另外，選取同期因膽囊息肉于重慶市第四人民醫院行手術切除的膽囊息肉患者80例作為膽囊息肉組，所有患者均符合人民衛生出版社《外科學》第8版中膽囊息肉的診斷標準[5]。膽囊癌組患者中，男28例，女30例；年齡47～76歲，平均（58.6±8.0）歲；組織學分化程度：高分化16例，中分化23例，低分化19例；有淋巴結轉移30例，無淋巴結轉移28例；TNM分期：I期14例，Ⅱ期23例，Ⅲ期21例。膽囊息肉組患者中，男40例，女 40例；年齡 43～79歲，平均（59.2±13.0）歲。收集膽囊癌組患者的膽囊癌組織標本進行研究，并選取膽囊息肉組患者的膽囊息肉組織標本作為對照。

1.2 檢測方法

采用免疫組化染色法檢測膽囊癌組織和膽囊息肉組織中STAT3、versican蛋白的表達。采用二甲苯將組織石蠟切片常規脫蠟至水，5%雙氧水常溫孵育10 min，采用磷酸鹽緩沖液孵育5 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min；5%山羊血清抗體封閉10 min，不沖洗，滴加一抗（購自英國Abcam公司，濃度1∶500），4℃冰箱孵育過夜，蒸餾水沖洗3次，每次5 min；滴加生物素標記的二抗（購自北京康泰生物，濃度1∶1000），37℃孵育30 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min；滴加第二代辣根過氧化物酶標記的工作液體，37℃孵育10 min，蒸餾水沖洗3次，每次5 min，顯色后采用乙醇脫水、二甲苯透明、樹膠封片，鏡下觀察。

1.3 判定標準

免疫組化染色評分標準：以細胞質內出現淡黃色、黃色、棕黃色、褐色或黑色顆粒為STAT3蛋白陽性表達，以細胞核或細胞質內出現黃色、橙色、棕色或褐色顆粒為versican蛋白陽性表達。根據染色強度進行評分：0分，未染色；1分，淡黃色；2分，棕黃色；3分，褐色、黑色。根據陽性細胞所占比例進行評分：1分，陽性細胞所占比例≤10%；2分，陽性細胞所占比例為11%～50%；3分，陽性細胞所占比例為51%～75%；4分，陽性細胞所占比例≥76%。將著色程度與陽性細胞所占比例評分相乘，最終得分＜3分為陰性，≥3分為陽性。

1.4 統計學方法

采用SPSS 21.0軟件對數據進行分析。符合正態分布的計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用t檢驗；計數資料以例數和率（%）表示，組間比較采用χ2檢驗。以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 STAT 3蛋白、versican蛋白表達情況的比較

膽囊癌組織中STAT3蛋白、versican蛋白的陽性表達率均明顯高于膽囊息肉組織，差異均有統計學意義（P＜0.01）。（表1）

表1 不同組織中STAT 3蛋白、Versican蛋白陽性表達情況的比較[ n（%）]

2.2 膽囊癌組織中STAT 3蛋白、versican蛋白表達與膽囊癌患者臨床特征的關系

TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結轉移的膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3蛋白的陽性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移的患者，差異均有統計學意義（χ2=5.100、4.592，P＜0.05）；不同分化程度膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3蛋白的陽性表達率比較，差異無統計學意義（P＞0.05）。TNM分期為Ⅲ期、分化程度為低分化、有淋巴結轉移的膽囊癌患者膽囊癌組織中versican蛋白的陽性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為中高分化、無淋巴結轉移的患者，差異均有統計學意義（χ2=4.196、5.100、7.067，P＜0.05）。（表2）

表2 不同臨床特征膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT 3蛋白、versican蛋白的陽性表達情況（ n=58）

3 討論

膽道系統基礎性疾病、膽囊息肉或有膽囊癌家族史等因素，均能夠促進膽囊癌的發生[6]。已有研究顯示，膽囊癌患者的5年生存率不足40%，膽囊癌患者接受綜合性治療方案治療后，總體生存時間不足38個月[7-9]。目前，臨床仍缺乏對膽囊癌患者病情評估的腫瘤相關指標。本研究通過對膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3、versican蛋白的表達情況進行分析，旨在揭示膽囊癌疾病進展機制的同時，為臨床上膽囊癌的病情評估提供新的參考指標。

STAT3是信號轉導相關因子，其表達水平升高時能夠通過激活下游絲裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinase，MAPK）或信號轉導與轉錄激活子（signal transducer and activator of tranions，STAT）信號通路，提高腫瘤細胞轉錄上游的基因激活程度[10]。已有研究表明，STAT3能夠促進腫瘤細胞紡錘體的異常分裂，增加腫瘤基因錯配修復的風險[11]。versican是腫瘤細胞間糖蛋白黏附因子，能夠通過提高腫瘤細胞的黏附和浸潤能力，促進腫瘤細胞間質成分的分解，從而為腫瘤細胞的擴散提供前提。相關研究對STAT3表達與膽囊癌的關系進行探討，結果發現相比于膽囊結石良性組織，膽囊癌病灶組織中STAT3蛋白表達水平明顯升高，但缺乏對versican表達的分析研究[12-13]。

本研究結果顯示，膽囊癌組織中STAT3蛋白、versican蛋白的陽性表達率均明顯高于膽囊息肉組織（P＜0.01），提示STAT3、versican蛋白可能與膽囊癌的發生有關。李福利等[14]研究發現，在膽囊癌患者中，versican的陽性表達率明顯升高，相比于無淋巴結轉移的患者，在發生明顯腹腔內轉移或淋巴結轉移的患者中，versican蛋白的陽性表達率可進一步上升。本研究在探討STAT3、versican蛋白表達與膽囊癌患者臨床特征的關系過程中發現，TNM分期為Ⅲ期、有淋巴結轉移膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3蛋白的陽性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、無淋巴結轉移的患者（P＜0.05），提示STAT3蛋白表達能夠影響到膽囊癌患者的病情進展。但本研究并未發現不同分化程度膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3的表達差異。本研究還發現，TNM分期為Ⅲ期、分化程度為低分化、有淋巴結轉移膽囊癌患者膽囊癌組織中versican蛋白的陽性表達率分別高于TNM分期為Ⅰ～Ⅱ期、分化程度為中高分化、無淋巴結轉移的患者（P＜0.05），提示versican的表達與膽囊癌患者病情進展同樣密切相關，分析其原因可能與以下兩點有關[15-16]：①STAT3表達水平增高，能夠影響到腫瘤細胞基因錯配修復能力，導致癌基因的異常激活；②versican水平增高，能夠提高腫瘤細胞生物學特征的惡化程度，加劇腫瘤細胞浸潤能力的改變。因此，臨床上可以通過檢測STAT3、versican等指標，對膽囊癌患者的臨床病情進行評估。

綜上所述，膽囊癌患者膽囊癌組織中STAT3、versican蛋白的陽性表達率均明顯升高，而且STAT3、versican蛋白的表達均與膽囊癌患者的臨床分期及淋巴結轉移有關。希望后續研究能夠繼續深入探討STAT3、versican蛋白表達與膽囊癌患者臨床轉歸的關系。