高綠補血膠囊對大鼠血液指標及骨髓細胞影響的研究

王紅明 俸一然 許東云

摘要：目的 觀察高綠補血膠囊對大鼠血常規、血生化、骨髓細胞的影響。方法 將Wistar大鼠隨機分為正常組、高綠補血膠囊初始、治療、負荷劑量組。觀察不同劑量高綠補血膠囊對大鼠血液指標及骨髓細胞的影響。結果 高綠補血膠囊治療劑量組AST/ALT下降（P<0.05），高綠補血膠囊治療劑量及負荷劑量均能夠上調大鼠白細胞水平（P<0.05）。高綠補血膠囊能促進骨髓細胞的增殖及鐵元素的吸收。結論 高綠補血膠囊能一定程度提高大鼠的造血功能及免疫力，且不對大鼠肝腎功能產生損傷。

關鍵詞：類風濕關節炎合并貧血;高綠補血膠囊

中圖分類號：R285 ? 文獻標志碼：A ? 文章編號：1007-2349（2019）07-0059-04

【Abstract】Objective： To observe the effect of Gaolu Buxue Capsule on blood routine， blood biochemistry and bone marrow cells in rats. Methods： Wistar rats were randomly divided into a normal group， Gaolu Buxue capsule groups with initial， treatment and loading-dose to observe the effects of different doses of Gaolu Buxue Capsule on blood parameters and bone marrow cells in rats. Results： The AST/ALT in the treatment group of Gaolu Buxue Capsule decreased （P<0.05）. The treatment dose and loading dose of Gaolu Buxue Capsule could up-regulate the white blood cell level of rats （P<0.05）. Gaolu Buxue Capsule could promote the proliferation of bone marrow cells and the absorption of iron element. Conclusion： Gaolu Buxue Capsule can improve the hematopoietic function and immunity of rats to a certain extent， and does not damage the liver and kidney function of rats.

【Key words】rheumatoid arthritis combined with anemia， Gaolu Buxue Capsule

類風濕關節炎（rheumatoid arthritis，RA）是一種主要累及關節的自身免疫性疾病，常有其他系統和重要臟器受累，貧血（Anemia）是RA最常見的關節外表現之一[1]，其發病機制中鐵代謝紊亂[2-3]和相關細胞因子[4-5]占了關鍵的因素。現研究高綠補血膠囊對血常規、血生化、骨髓細胞的影響，以大鼠為動物模型，檢測血常規及血生化的表達并觀測骨髓細胞形態及骨髓內外鐵等實驗室指標，探討高綠補血膠囊的藥理特性，明確其治療的作用靶點及方向，為中醫藥防治RA合并貧血[6-7]的安全合理用藥提供可靠的理論和依據。

1 材料與方法

1.1 實驗動物和藥品 選取SPF級Wistar雌性大鼠48只，8周齡，體重（200±20）g，健康，由昆明楚商科技有限公司提供。

高綠補血膠囊，300 mg/粒，由專利負責人許東云提供配方，昆明市醫學科學研究所濃縮制備為高綠補血膠囊湯劑。

1.2 藥物劑量的確立 高綠補血膠囊規格為300 mg/粒，成人服用劑量為2 粒/次，日2 次，共1200 mg·d-1 。按照人與動物藥物劑量的換算方法，采取體表面積折算方法計算，換算劑量為24 mg·d-1，按大鼠體重200 g/只計算，則治療劑量組為120 mg·kg-1·d-1，按照藥理研究要求，取1/3 治療劑量為初始劑量，即40 mg·kg-1·d-1，取3倍治療劑量為負荷劑量，即480 mg·kg-1·d-1。

1.3 實驗設計

1.3.1 藥物干預及取材 48只大鼠隨機分成4組，A組：正常對照組;B組：高級補血膠囊初始劑量組;C組：高級補血膠囊治療劑量組;D組：高級補血膠囊負荷劑量組。除正常對照組外分別每天等體積不同濃度梯度高綠補血膠囊溶液灌胃。給藥療程：參照藥理研究要求，實驗的總給藥時間定為21 d，大鼠灌胃容量定為1.0 mL/只。連續21 d灌胃結束后24h內心臟取抗凝血標本約2 mL送檢，頸椎脫臼處死，分離出股骨骨髓行普魯士染色、瑞氏染色后顯微鏡下拍照。

1.3.2 大鼠血常規、血生化的測量 心臟取抗凝血標本約2 mL，應用血常規分析儀和血生化分析儀進行大鼠血常規、肝腎功測定。

1.3.3 骨髓細胞內、外鐵染色觀察 剪斷股骨兩端，用空注射器（抽取一定量的空氣）打出骨髓液，迅速推片，晾干。骨髓普魯士染色采用索萊寶 G1422普魯士藍染色試劑盒（核固紅法）進行。 固定、染色、脫水透明、中性樹膠封片后顯微鏡下觀察拍照。

結果判定：含鐵血黃素或三價鐵被染成藍色;細胞核、其他組織被染成紅色。

1.3.4 骨髓細胞形態觀察 剪斷股骨兩端，用空注射器（抽取一定量的空氣）打出骨髓液，迅速推片，晾干。骨髓瑞氏染色采用索萊寶 G1040瑞氏染液進行。固定、染色、脫水透明、中性樹膠封片后顯微鏡下觀察拍照。

結果判定：細胞被染成藍色;胞漿被染成紅色;細胞核被染成紫紅色。

2 統計學方法

采用SPSS 20.0進行數據統計及分析，各組間計量資料用均數±標準差（x±s）表示，組內比較用方差齊性檢驗，多組間兩兩比較用t 驗驗;所有單向等級資料的比較用秩和檢驗和Ridit檢驗;統計學差異標準設為P<0.05。

3 實驗結果

3.1 大鼠一般狀況的改變 服用高綠補血膠囊后大鼠體力、精神及活動度較正常組明顯上升，但各藥物組間大鼠體力、精神及活動度改善未見明顯差異。

3.2 各組藥物對大鼠血常規及血生化指標的影響 見表1及表2。

血常規及血生化的比較結果：1.與其它各組相比較高綠補血膠囊治療劑量組對大鼠AST/ALT比值存在下調作用（P<0.05），但其對ALT和AST無相應的影響（P>0.05）;2.與正常組、高綠補血膠囊初始劑量組相比，高綠補血膠囊治療劑量及負荷劑量均能夠上調大鼠白細胞水平（P<0.05），但高綠補血膠囊治療劑量及負荷劑量之間上調水平無明顯差別（P>0.05）。

結果表明：高綠補血膠囊能一定程度提高大鼠免疫力，且不對大鼠肝腎功能產生損傷。

3.3 各組藥物對大鼠骨髓細胞內外鐵及骨髓細胞增殖的影響

3.3.1 對骨髓細胞內外鐵的影響 鏡下觀察各組大鼠骨髓細胞內外鐵的含量（圖1），根據細胞外鐵顆粒、鐵小珠和鐵小塊的多少和細胞內鐵顆粒數目、大小、染色深淺，將細胞外鐵含量分為五級[8]（表3）。

對骨髓細胞內外鐵的影響：與正常組相比，高綠補血膠囊各個劑量組均能夠促進骨髓細胞攝取鐵（P<0.05），其促進能力隨劑量的提升而提升。

結果表明：高綠補血膠囊能促進骨髓細胞吸收鐵元素。

3.3.2 對骨髓細胞增殖的影響 鏡下觀察各組大鼠骨髓細胞的增殖情況（圖2），根據細胞數目、大小、染色深淺，將骨髓細胞增殖情況分為五級（表4）。

對骨髓細胞增殖的影響：與正常組相比，高綠補血膠囊各個劑量組均能夠促進骨髓細胞的增殖（P<0.05），其促進能力治療劑量組最強。

結果表明：高綠補血膠囊能促進骨髓細胞的增殖。

4 討論

目前現代醫學認為RA 合并貧血的發病機制中鐵代謝紊亂和相關細胞因子占了重要的因素，主要體現在三個病理生理方面：1、鐵代謝紊亂[9]; 2、紅細胞壽命縮短：RA 患者細胞因子激活[4];3、骨髓代償不足[10]。

中醫認為RA合并貧血屬于“尪痹病”的氣血虛弱證型，其病因以氣血虧虛為要，《景岳全書·風痹》[11]曰：“痹者，閉也。以氣血為邪所閉，不得通行為病也。”該疾病的治療以補益氣血為要[12]，方能達到治療效果，正如《醫宗必讀卷十·痹》[13]中所言：“治行痹者，散風為主，御寒利濕仍不可廢，大抵參以補血之劑，蓋治風先治血，血行風自滅也。”

本次研究旨在探索高綠補血膠囊對正常大鼠的各項血液指標及骨髓細胞的影響，并以此研究與貧血模型大鼠的各項指標進行對照，以便于進一步的摸索高綠補血膠囊對貧血模型大鼠的影響因素。此次研究結果表明：①高綠補血膠囊對正常大鼠體力、睡眠、精神及活動度均有一定程度的改善作用。②高綠補血膠囊不對正常大鼠肝腎功能產生損傷。③高綠補血膠囊各劑量均能夠繼續上調正常大鼠白細胞水平，提示其能一定程度提高正常大鼠免疫力。④高綠補血膠囊各劑量均增加正常大鼠骨髓細胞內外鐵的含量、促進骨髓細胞的增殖，提示其促進正常大鼠骨髓細胞的增殖及鐵元素的吸收。

高綠補血膠囊[14]系專利發明人許東云經過十多年的醫學生物研究和臨床實踐研究總結，根據中醫對RA 合并貧血的發生機理和治療原則[15-16]，以結合中醫整體調節觀組方，利用我省特有的綠色生物資源螺旋藻[17-18]，形成能全面調理人體造血機能，補充造血營養物質，對貧血改善效果快[19]，且效果容易驗證和觀察的產品。該配方以螺旋藻及動物鐵為君藥以補益氣血及調節鐵代謝，佐以茯苓及山藥以健脾益氣生血，全方共奏健脾益氣生血之效。且使用云南高原特色的食用生物原料及中藥，利用現代生物技術制備生產，2001 年經過小量制備試用觀察研究證明：其有效性高、安全性好。

因此，通過檢測血常規及血生化的表達并觀測骨髓形態及骨髓內外鐵等實驗室指標，能為進一步的探索中藥制劑對RA并貧血模型的研究提供一定的實驗室依據。

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