系統性紅斑狼瘡患兒血清sCTLA4、TNF-α水平表達及其臨床意義

信 軍，康 樂，張藝森，張 劍

(河南省駐馬店市中心醫院新生兒科，河南 駐馬店 463000)

系統性紅斑狼瘡(SLE)是一種累及多系統的自身免疫性疾病，發病機制復雜，多認為以各種免疫異常為特征，包括T細胞和B細胞活化失調及循環中B細胞多克隆活化，產生大量自身反應性抗體和大量免疫復合物，導致機體多器官損傷[1]。研究證實[2，3]，T細胞活化需要雙信號，B7-CD28通路構成的協同刺激信號作為T細胞活化的第二信號參與多種免疫性疾病及腫瘤的發病過程。細胞毒性T淋巴細胞相關抗原-4(CTLA4)屬免疫球蛋白超家族成員，可與CD28競爭性與B7結合，阻止T細胞進一步活化[4]。sCTLA4是CTLA4的可溶形式，目前關于sCTLA4的報道較少。腫瘤壞死因子-α(TNF-α)是一種具有多種生物學活性的細胞因子，研究發現它在免疫系統細胞間具相互聯系的介導作用，在自身免疫性疾病中或可起到一定作用[5]。本研究檢測SLE患兒血清中sCTLA4、TNF-α的水平表達，并分析sCTLA4、TNF-α在SLE發病中的作用及意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料2017年10月至2018年10月我院就診的SLE患兒40例(SLE組)，均符合《系統性紅斑狼瘡診斷標準及治療進展》診斷標準[6]，且排除全身嚴重急性感染、合并其他自身免疫性疾病、腫瘤及嚴重心、肺、腎臟疾病者。男9例，女31例，年齡5～16歲[(10.85±4.26)歲]；病程1月至3年[(12.55±5.60)年]；根據SLE疾病活動指數(SLEDAI)評分[7]將患兒分為活動期組(SLEDAI評分≥10分，22例)和靜止期組(SLEDAI評分<10分，18例)。選取同期同年齡組無過敏性疾病及腫瘤疾病家族史的健康兒童40例為對照組，男11例，女29例，年齡6～16歲[(11.24±4.72)歲]。本研究獲得醫院倫理委員會批準，兩組性別、年齡比較，差異無統計學意義(P>0.05)。

1.2 方法采集兩組研究對象晨間空腹狀態靜脈血3 ml，1500 r/min離心10 min，分離血清后凍存于-80 ℃冰箱。擇期行雙抗體夾心ELISA方法測定血清標本中sCTLA4、TNF-α水平。

1.3 統計學方法應用SPSS 19.0軟件處理數據。計數資料比較采用χ2檢驗；計量資料比較采用t檢驗；相關性分析采用Spearman相關分析。P<0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 SLE組與對照組血清sCTLA4、TNF-α水平比較SLE組血清sCTLA4、TNF-α水平高于對照組(P<0.05)。見表1。

表1 SLE組與對照組血清sCTLA4、TNF-α水平比較

2.2 活動期組與靜止期組血清sCTLA4、TNF-α水平比較活動期組血清sCTLA4、TNF-α水平高于靜止期組(P<0.05)。見表2。

表2 活動期組與靜止期組血清sCTLA4、TNF-α水平比較

2.3 SLE患兒血清sCTLA4、TNF-α水平與SLEDAI評分的相關性分析SLE患兒血清sCTLA4、TNF-α水平均與SLEDAI評分顯著正相關(r=0.770，0.757，P<0.05)。見圖1、圖2。

圖1 SLE患兒血清sCTLA4與SLEDAI評分的相關性分析

圖2 SLE患兒血清TNF-α水平與SLEDAI評分的相關性分析

3 討論

SLE發病原因至今未明，多認為是在易患基因基礎上受多種因素作用的結果，其中B細胞慢性持續性多克隆激活是激活是其發病的主要原因，病變可涉及多種組織、器官及系統，發病過程中伴多種細胞因子間的失衡[8]。產生自身抗體的B細胞活化需要T細胞表達的細胞因子和共刺激分子輔助，而T細胞活化需要雙信號刺激：T細胞抗原受體(TCR)識別由抗原提呈細胞(APC)提呈的抗原肽復合物而傳遞的信號為第一信號，T細胞上共刺激受體與T細胞表面多個黏附分子相互作用時產生的輔助信號為第二信號。目前越來越多的研究發現[9，10]，第二信號的表達是建立在第一信號正常傳遞的基礎上，第一信號傳遞受阻，則免疫反應無法進行；但若僅有APC作用的第一信號傳遞正常而缺少第二信號，就無法有效激活T細胞，導致T細胞克隆無反應或程序化細胞死亡，使機體喪失免疫監視作用，從而使免疫性疾病發病。劉芝翠等[11，12]研究發現，T細胞活化的第二信號異常參與多種免疫性疾病及腫瘤行疾病的發病。

B7-CD28通路構成的協同刺激信號在T細胞活化受機體多細胞因子調節過程中起著重要作用，可維持機體免疫平衡穩定性，是免疫學研究的熱點[13]。而CTLA4屬免疫球蛋白超家族成員，在氨基酸水平與CD28具有高度同源性，皆帶有兩個胞外結構域，但與CD28分子功能卻截然相反，可與CD28競爭性與B7結合，干擾B7與CD28介導的共刺激，產生負性調節信號，抑制T細胞活化、增殖。Dahal等[14]研究發現，SLE、類風濕性關節炎(RA)等自身免疫性疾病的T細胞表面CD28、CTLA4的表達都發生了變化，提示這些共刺激分子異常表達或許與自身免疫性耐受的喪失導致的自身免疫性疾病相關。王璇等[15]動物研究對實驗小鼠注射CTLA-4拮抗劑基因起到了治療自身免疫性甲狀腺炎的效果。sCTLA4是CTLA4的可溶形式，可通過干擾T細胞活化的第二信號參與多種免疫性疾病的發病。本研究對比發現，SLE組患兒血清sCTLA4水平顯著高于對照組，活動期組患兒血清sCTLA4水平顯著高于靜止期組，且SLE患兒血清sCTLA4水平與SLEDAI評分顯著正相關，提示SLE患兒血清sCTLA4水平異常升高，且隨病情嚴重程度加重而持續升高，可推測sCTLA4在SLE患兒的發病及病情進展過程中可能具重要作用。

TNF-α是由活化的單核-巨噬細胞及T、B細胞分泌的細胞因子，具有多種生物學活性。國內外多項研究[16，17]已證實TNF-α可誘導角朊細胞和血管內皮細胞表達細胞間黏附分子，從而提供中性粒細胞與淋巴細胞的黏附位點，但其大量產生可導致機體免疫平衡被破壞，與其他炎癥因子介導多種病理損傷，在炎癥及自身免疫反應中具重要調控作用。本研究對比發現，SLE組患兒血清TNF-α水平顯著高于對照組，活動期組患兒血清TNF-α水平顯著高于靜止期組，且SLE患兒血清TNF-α水平與SLEDAI評分顯著正相關，與既往研究相符[18]，認為TNF-α水平異常升高可能會影響機體免疫紊亂，參與SLE的發生發展。

綜上所述，sCTLA4、TNF-α參與了兒童SLE的發病過程，且與SLEDAI評分密切相關，可考慮作為監測兒童SLE病情活動嚴重程度的參考指標，有助于疾病的病情及預后評估。