乳腺癌p53與Ki-67和TopoⅡ的相關(guān)性研究及其預(yù)后價值探討

吳韶娜 方亞

（1長治市第二人民醫(yī)院病理科 山西 長治 046000）

（2廈門大學(xué)預(yù)防醫(yī)學(xué)系 福建 廈門 361005）

本研究擬通過p53、Ki-67和DNA拓撲異構(gòu)酶Ⅱ(TopoⅡ)各指標(biāo)的蛋白檢測以及與臨床病理特征的關(guān)系和各蛋白之間的相關(guān)性，來探討其對乳腺癌患者的預(yù)后價值。

1.資料及方法

1.1 資料來源

廈門市某醫(yī)院2003年2月－2008年5月接受乳腺癌手術(shù)的乳腺癌病例。

1.2 檢測方法

所有標(biāo)本均經(jīng)10%中性福爾馬林固定，石蠟包埋，4μm連續(xù)切片，采用二步法（EliVision試劑盒）檢測。采用已知乳腺癌陽性標(biāo)本作陽性對照；以PBS代替一抗作陰性對照。

1.3 結(jié)果判斷

所有切片采用雙盲觀察，p53、Ki-67和TopoⅡ以細胞核出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性。陽性百分率采用半定量判斷標(biāo)準(zhǔn)，即選5個不同高倍視野，每個視野計數(shù)100個細胞，計算出其中陽性細胞的百分率。陽性細胞數(shù)＜10%為（-），10%～25%為（+），26%～50%為（++），＞50%為（+++）。

1.4 隨訪

所有患者均采用電話或者信件隨訪的方式。隨訪觀察的起點為患者手術(shù)日期，隨訪截止日期為2009年5月20日，隨訪觀察終點事件為復(fù)發(fā)、轉(zhuǎn)移或死亡。

1.5 統(tǒng)計學(xué)方法

采用SPSS13.0軟件進行數(shù)據(jù)統(tǒng)計，各組間率的比較采用χ2檢驗，配對資料采用McNemar檢驗，小概率事件采用Fisher確切概率法，數(shù)據(jù)相關(guān)性分析采用Spearman秩相關(guān)分析，生存數(shù)據(jù)分析采用Kaplan-Meier法，采用Log-rank和Breslow法進行生存曲線的比較，生存因素分析采用Cox比例風(fēng)險回歸模型，P＜0.05表示有統(tǒng)計學(xué)意義。

2.結(jié)果

2.1 一般情況

共收集經(jīng)過病理學(xué)診斷的乳腺癌病例169例，均為女性，年齡23～90歲，平均48.17歲，平均隨訪時間23.18個月，其中26例復(fù)發(fā)，24例轉(zhuǎn)移，13例死亡。

2.2 p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白在乳腺癌組織中的表達以及與臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

p53蛋白陽性率為37.3%（22/59），p53蛋白陽性率在ER陽性組和ER陰性兩組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義。Ki-67蛋白陽性率為57.9%（11/19），Ki-67蛋白陽性率在有無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，ER陽性組與ER陰性組的Ki-67蛋白陽性率差異有統(tǒng)計學(xué)意義。TopoⅡ蛋白陽性率為39.5%（17/43），TopoⅡ蛋白陽性率在ER陽性組和ER陰性兩組之間差異有統(tǒng)計學(xué)意義（表）。

表 p53、Ki-67、TopoⅡ蛋白表達與乳腺癌臨床病理參數(shù)之間的關(guān)系

2.3 p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白表達之間的相關(guān)性分析

spearman相關(guān)分析顯示，Ki-67蛋白表達與ER蛋白表達呈正相關(guān)(rs=0.570，P＜0.05)， ER蛋白表達和PR蛋白表達呈正相關(guān)（rs=0.435，P＜0.05），p53蛋白表達和TopoⅡ蛋白表達呈正相關(guān)（rs=0.629，P＜0.05），即p53蛋白陽性表達率越高，TopoⅡ蛋白陽性表達率也越高。

2.4 p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白表達與乳腺癌患者預(yù)后的關(guān)系

以復(fù)發(fā)或轉(zhuǎn)移或死亡為乳腺癌患者預(yù)后的觀察終點，采用Kaplan-Meier法分析p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白表達與乳腺癌患者預(yù)后之間的關(guān)系，結(jié)果顯示，p53蛋白表達率不同，患者生存期也有明顯的不同（圖1），p53蛋白陽性患者的5年生存率為78%，p53蛋白陰性患者的5年生存率為89%，經(jīng)統(tǒng)計分析，兩者之間的差異有統(tǒng)計學(xué)意義（χ2=4.14，P=0.042），說明p53陽性患者的生存期比陰性患者的生存期短。Cox比例風(fēng)險回歸模型分析，p53陽性患者發(fā)生終點事件的危險度（OR）是陰性患者的2.16倍。而Ki-67、TopoⅡ蛋白對患者預(yù)后均無統(tǒng)計學(xué)意義。

圖1 p53與患者預(yù)后的生存曲線

3.討論

分子標(biāo)志物在乳腺癌診斷、判斷預(yù)后和治療方案中的價值越來越受到人們的重視。本研究對乳腺癌患者p53、Ki-67和TopoⅡ蛋白聯(lián)合檢測，初步探討其在臨床的應(yīng)用價值以及與預(yù)后的相關(guān)性，有助于評估乳腺癌患者的預(yù)后，并對臨床治療有一定指導(dǎo)意義。

本研究結(jié)果表明，PR受體陽性者p53蛋白陽性表達率高于PR陰性者，且ER受體陽性者p53蛋白陽性表達率高于ER陰性者，說明p53蛋白與ER、PR密切相關(guān)，從而可能通過ER、PR的表達來推測p53蛋白的表達情況。

TopoⅡ是存在于細胞核內(nèi)催化DNA拓撲異構(gòu)體相互轉(zhuǎn)換的一種酶，TopoⅡ含量和活性的降低可導(dǎo)致腫瘤細胞產(chǎn)生耐藥。近年來免疫組化研究顯示，在乳腺癌中TopoⅡ可以作為細胞增殖的可靠指標(biāo)［1］。TopoⅡ在正常細胞中不易檢測到，而在很多腫瘤中，尤其在低分化腫瘤內(nèi)呈高表達狀態(tài)。本實驗結(jié)果顯示，TopoⅡ蛋白陽性表達率在ER、PR受體分組間差異有統(tǒng)計學(xué)意義，說明TopoⅡ蛋白表達與ER、PR受體表達密切相關(guān)。

我們進一步探討了p53蛋白表達與TopoⅡ蛋白表達之間的關(guān)系，結(jié)果顯示，p53蛋白表達與TopoⅡ蛋白表達呈正相關(guān)，即隨著p53陽性表達率的增高，TopoⅡ陽性表達率也增高，大多乳腺癌患者p53基因突變，導(dǎo)致p53蛋白過表達，可增加TopoⅡ蛋白表達，這可能是p53蛋白高表達的乳腺癌患者對化療藥物不敏感的原因之一，這也可能是p53陽性患者5年生存率低的原因之一，p53突變可能是乳腺癌病情進展惡化的重要因素。本研究結(jié)果還表明，p53陽性表達者發(fā)生終點事件的風(fēng)險是陰性表達者的2.16倍，如此將p53對乳腺癌患者預(yù)后風(fēng)險評估量化，可對乳腺癌生存預(yù)后有一定的參考價值。

Ki-67是在增殖細胞中表達的一種核抗原，也是目前較為肯定的核增殖標(biāo)志物[2-3]。國內(nèi)外許多研究表明，Ki-67在多種惡性腫瘤中的表達遠高于相應(yīng)的正常組織，可見Ki-67有可能作為篩檢癌前人群中髙危個體的生物學(xué)標(biāo)志物。本研究顯示，Ki-67蛋白表達與ER受體呈正相關(guān)，說明隨著ER受體陽性表達率的增高，Ki-67蛋白陽性表達率也增高。

Ki-67和P53蛋白是乳腺癌中常用的檢測及預(yù)測評估患者治療及預(yù)后的免疫組化指標(biāo)［4-5］。本研究結(jié)果顯示，p53可對乳腺癌患者進行預(yù)后風(fēng)險評估，而TopoⅡ與p53密切相關(guān)，Ki-67與乳腺癌轉(zhuǎn)移密切相關(guān)，以上提示，對乳腺癌患者進行上述指標(biāo)檢測有助于評估腫瘤的臨床與預(yù)后，并對治療方案選擇有一定指導(dǎo)意義。