銀杏酸的藥理毒理作用及脫酸方法研究進展

張思玨

摘要 以銀杏為原料的制劑是現代植物藥的重要產品，占據較大的市場份額，此類產品的安全問題時有報道，其主要不良反應是由銀杏成分中的銀杏酸引起的，解決問題的關鍵在于對除酸工藝的研究，提高現行標準的質量控制水平。通過國內外文獻，總結銀杏酸的藥理毒理作用及脫酸方法研究進展，旨在提高對銀杏葉酸的關注，提高銀杏葉提取物制劑的安全性。

關鍵詞銀杏酸;藥理;毒理;脫酸

銀杏屬于銀杏科裸子植物，是我國特有的珍貴樹種之一。國內外對銀杏葉進行較多的研究，銀杏葉提取物具有擴張血管、調血脂、拮抗血小板活化因子、保護缺血損傷、抗炎及抗腫瘤等多種藥理作用[1]。但銀杏葉成分復雜，一般提取物中總黃酮醇苷類含量24% -32%，萜類內酯成分6% - 9%，其余成分還有待更多的研究[2]。目前銷往市場的銀杏葉提取物，其提取方法大部分是用水提法或醇提法，但是同時被提取出來的還有大量的銀杏酸[3]，能引起銀杏葉制劑的不良反應。本文從銀杏酸的藥理毒理、脫酸方法等方面作一綜述。

銀杏酸藥理研究

抗腫瘤作用：研究發現[4]，銀杏葉中主要成分銀杏酸能夠誘導腫瘤細胞凋亡，抑制腫瘤細胞生長的作用。研究認為[5]，銀杏酸性成分中的十七碳烯鏈水楊酸和銀杏黃素對機體能夠起到強抑制EB病毒和致癌啟動因子活性的作用。藥理試驗顯示，長鏈酚酸抗癌活性主要與烷基側鏈的長短和酚羥基有關，與羧基無關，這主要是因為抗微生物活性需要羧基，且與側鏈不飽和程度有關，不飽和度越大其活性越強。研究表明，銀杏酸對人肺癌細胞、人乳腺癌細胞、人結腸腺癌細胞、人膀胱癌細胞和人卵巢腺癌細胞的生長均有不同程度的抑制作。

抗病毒作用：在對銀杏提取物藥理試驗中發現其對單純皰疹I型病毒和水皰性口炎病毒均無作用，但對柯薩奇B3病毒具有一定的抗病毒作用[6]。銀杏酚酸在體外能夠對機體非細胞體系的人類免疫缺陷病毒（HIV）蛋白酶活性和人體細胞的HIV感染產生抑制作用。

抑菌殺菌作用：在對銀杏提取物藥理試驗中發現銀杏酸類物質對細菌、致病性真菌具有不同程度殺菌或抑菌作用，對變形桿菌、青霉菌、大腸埃希菌等均有抑制作用，其中對巨大芽孢桿菌和枯草芽孢桿菌的抑菌活性效果在各種病菌中最強。石啟田研究發現位于銀杏外種皮中的銀杏酸酚類物質具有殺蟲活性，防治菜青蟲、蚜蟲、薊馬有良好效果，與其進行對照的化學農藥，兩者有相似的防治效果[7];王杰等從銀杏外種皮提取物中篩選出明顯具有抑菌活性的組分[8]。

抗炎抗過敏作用：動物試驗發現，銀杏提取物銀杏酸還具有抗過敏性作用，其能夠起到的作用與地塞米松類藥物相類似，其可達到拮抗過敏介質如組胺等引起的豚鼠回腸平滑肌的收縮反應，此拮抗作用通常是通過抑制大鼠顱骨骨膜肥大細胞顆粒釋放和小鼠被動性皮膚過敏反應而實現的。并且銀杏酸結構中抗過敏反應程度與羧基結構完整性具有一定的相關性。許麗麗等研究表明銀杏甲素能顯著抑制乙酸所致小鼠腹腔毛細管通透性增高、角義菜膠所致大鼠足腫脹以及二甲苯所致的小鼠耳廓腫脹[9]。對機體炎癥早期的毛細血管滲透性增高，炎性滲出和水腫具有很好的抑制作用，其藥理作用與陽性對照組地塞米松相似。銀杏酸的毒理研究

細胞毒性：Hecker H（2002）等通過對銀杏葉提取物中銀杏酚酸的細胞毒素性質進行研究[10，11]。在銀杏酚酸（濃度≥30 mg/L）作用18h后，細胞HaCaT死亡率從6%上升到80%左右。進行HaCaT細胞的形態學觀察發現，可能是由于溶酶體的酶受到抑制引起，所以形成髓鞘質瘤。通過對LLC-MK2細胞進行觀察，發現主要是由線粒體介導銀杏酚酸的細胞毒性。研究認為原因可能是線粒體氧化磷酸化反應的解偶聯作用。

致敏性、致突變、神經毒性：何靜仁的研究表明[12，13]，銀杏酸可以促進B細胞增殖分化成IgE抗體產牛細胞，同時通過誘導機體內T細胞分裂的增殖，增強機體內細胞免疫應答，作為變應原增強機體的敏感性。楊劍婷等的研究指出，銀杏酸的致敏機制可能是抑制變態反應、細胞毒性、酶活性等[14]。銀杏酸和相關的烷基酸可引起精子染色體斷裂導致胚胎突變。

銀杏酸分離祛除方法

對銀杏酸進行脫酸的方法主要有微波輔助提取、有機溶劑提取法、樹脂提取、超聲輔助提取和超臨界二氧化碳萃取等。尹秀蓮等研究顯示銀杏酸的脫酸方法中超聲萃取，萃取過程中會受設備的限制[15]，不利于大規模生產。超臨界流體萃取方法整個萃取過程中工藝成本過高，因其設備投入較大;有機溶劑萃取法在萃取過程中會損害人員、設備、環境，而且其能源需求高、工藝選擇性差，使得生產成本增加;樹脂提取應用于工業化生產更加普遍。

有機溶劑提取法：用丙酮進行提取，對其萃取使用有機溶劑、脫脂等一系列工藝處理，使烷基酚酸< 10μg/g（特別可達到<1μg/g）。

樹脂提取：秦俊哲通過對不同大孔樹脂（D 101、DA 201、DM 301、DS 401）進行研究[16]，，使用靜態與動態相結合的方法，以銀杏酸的吸附率、解析率為指標，優化大孔樹脂純化銀杏酸的工藝參數。結果表明，大孔吸附樹脂DA 201對銀杏酸的吸附為快速平衡型，銀杏酸粗提取液上樣濃度0.45 mg/mL，靜態吸附時間4h，動態上樣流速l mL/min，洗脫劑乙醇濃度95%，洗脫速度l mL/min，銀杏酸吸附容量59.00 mg/g，解析率98.46%，銀杏酸純度83.4%。以銀杏葉提取物中銀杏酸含量為指標，對比LX-202、LX-9、HDP 5000、ADS-7、ADS-8等5種大孔樹脂對銀杏酸的洗脫效果及靜態吸附效果。最終結果顯示，脫除銀杏酸效果最佳的是HDP 5000樹脂。

超臨界二氧化碳萃取：沈剛等研究中采用超臨界二氧化碳萃取技術[17]。采用壓力30 MPa，采用硅膠為載體，8%甲醇作為改性劑，溫度55℃進行萃取。結果表明超臨界二氧化碳萃取對銀杏酸的選擇性和回收率效果顯著。王志強等利用Agilent 1100高效液相色譜儀對甲醇回流萃取和SC-C02萃取的銀杏酸進行含量測定[18]。結果顯示萃取銀杏外種皮中銀杏酸采用SC-CO2萃取法，不僅環境污染小，而且萃取率和萃取純度較高，操作過程簡便，無溶劑殘留，比傳統的溶劑萃取法優異，可用于工業化生產。

微波輔助提取：李澤榮等采用單因素試驗和正交試驗分析，探討了料液比、提取溫度、提取時間、乙醇濃度對銀杏中銀杏酸脫除率的影響[19]，并優化了提取工藝。結果表明，微波輔助脫除銀杏酸的最佳工藝條件為提取溫度60℃，以濃度75%的乙醇為提取劑，料液比（m：V）1：35，提取時間55 min，在此條件下，銀杏酸脫除率可達0.191 8‰。其與樹脂提取法進行比較提取率略低，但可以顯著縮短提取時間。

超聲輔助提取：劉俊峰通過響應面試驗優化得到銀杏酚酸的提取工藝為超聲溫度55.6℃，超聲時間40 min，液料比1：3（g：g），此時銀杏酚酸提取量最大值0.167 8 mg/mL。

蒸煮及干燥處理：劉俊峰研究了蒸煮處理及干燥處理對銀杏酚酸和銀杏黃酮的影響，結果顯示蒸煮溫度、時間以及料液比3種因素與銀杏酚酸脫除率呈顯著相關。在熱風處理的試驗過程中可以將銀杏黃酮損失控制在< 10%，3種銀杏酚酸的脫除效率明顯受到熱風處理溫度和時間的影響，并且在處理溫度80℃、處理時間9h的條件下，可完全脫除白果新酸，并降低十七烷基一烯銀杏酸和白果酸的含量。

我國為銀杏產出大國，然而銀杏制品我國的國際市場份額很低，因此，我們要學習國外植物藥發展經驗，進一步加強開工作。充分利用我國得天獨厚的銀杏樹資源，對全國各地銀杏葉資源加以合理評定，合理利用;重視研究工藝，關注制劑安全，根據不同的銀杏葉制劑的質量標準，為盡快達到國際標準，不懈地進行工藝改進。

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