IL-6、STAT3在妊娠期肝內膽汁淤積癥產婦胎盤組織中的表達及意義

葉云飛　陳柏秀

[摘要] 目的 研究白細胞介素6（IL-6）和信號傳導與轉錄激活因子3（STAT3）在妊娠期肝內膽汁淤積癥（ICP）產婦胎盤組織中的表達及二者間的關系。 方法 選取2016年1月～2017年12月于廣西科技大學附屬柳州市人民醫院（以下簡稱“我院”）產科門診產檢并住院分娩的ICP產婦50例（ICP組），其中重度ICP組25例，輕度ICP組25例;同時取同期于我院分娩的健康產婦30名為對照組，搜集其胎盤組織采用免疫組織化學法檢測IL-6及STAT3的表達。 結果 ICP組孕婦胎盤滋養細胞中IL-6和STAT3陽性表達率明顯高于對照組，差異有高度統計學意義（P < 0.01），而在ICP輕度組和ICP重度組中兩者陽性表達率比較，差異無統計學意義（P > 0.05）;IL-6和STAT3在對照組、ICP輕度組、ICP重度組產婦胎盤滋養細胞中的陽性表達率呈遞增趨勢;ICP組IL-6與STAT3蛋白的表達呈正相關（r = 0.694，P < 0.01）。 結論 IL-6及STAT3信號通路表達水平與ICP發病程度呈正相關，可作為聯合診斷和病情評估的重要指標。

[關鍵詞] 白細胞介素6;信號傳導與轉錄激活因子3;妊娠期肝內膽汁淤積癥;胎盤組織

[中圖分類號] R714.25? ? ? ? ? [文獻標識碼] A? ? ? ? ? [文章編號] 1673-7210（2019）06（b）-0068-04

Expression and significance of IL-6 and STAT3 in the maternity placenta tissues with intrahepatic cholestasis of pregnancy

YE Yunfei? ?CHEN Baixiu

Department of Obstetrics， Liuzhou General Hospital Attached to Guangxi University of Technology， Guangxi Zhuang Autonomous Region， Liuzhou? ?545006， China

[Abstract] Objective To study the expression and the correlations of interleukin-6 （IL-6） and signal transducer and activator transcription 3 （STAT3） in the placentas of pregnant women with intrahepatic cholestasis of pregnancy （ICP）. Methods A total of 50 pregnant women with ICP and in Obstetrics Clinic of Liuzhou General Hospital Attached to Guangxi University of Technology （“our hospital” for short） from January 2016 to December 2017 was selected as ICP group， including 25 cases of mild ICP group， 25 cases of severe ICP group. At the same time， 30 healthy pregnant women taking prenatal examination in our hospital at the same period were selected in control group. Placentas of the above gravidas were collected and the expression and localization of IL-6 and STAT3 were determined via immunohistochemistry. Results The IL-6 and STAT3 positive cell rate of ICP group were significantly higher than those of control group， the differences were statistically significant （P < 0.01）. There were no significant differences in positive cell rate between mild ICP group and severe ICP group （P > 0.05）. The positive expression rate of IL-6 and STAT3 were gradually increased in placental trophoblast among the control group， mild ICP group and the severe ICP group. There were positive relations between IL-6 and STAT3 expression in ICP group （r = 0.694， P < 0.01）. Conclusion The expression levels of IL-6 and STAT3 are positively correlated with the disease of ICP， which therefore might be used as combined diagnosis and evaluation of the state disease.

[Key words] Interleukin-6; Signal transduction and activator of transcription 3; Intrahepatic cholestasis of pregnancy; Placental tissue

妊娠期肝內膽汁淤積癥（intrahepatic cholestasis of pregnancy，ICP）是一種妊娠特發性疾病，多發生于妊娠中晚期，表現為不明原因皮膚瘙癢、肝功能異常，而產后癥狀迅速消失，肝功能恢復正常[1]，可導致圍生兒發病率及死亡率增加。ICP發病機制尚未明確，但普遍認為其發生是多種因素共同作用引起，包括遺傳變異、免疫功能失常、內分泌及環境因素等，而信號通路的相關研究少見報道。本研究通過檢測ICP患者胎盤組織中白細胞介素-6/信號傳導與轉錄激活因子3（IL-6/STAT3）通路的表達及變化，從信號通路角度研究與ICP進展的內在聯系及相互關系，為進一步探討ICP的發病機制及防治提供新的思路。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2016年1月～2017年12月于廣西科技大學附屬柳州市人民醫院（以下簡稱“我院”）產科住院分娩、資料完整的50例ICP產婦為研究對象（ICP組），其中ICP輕度組（25例），ICP重度組（25例），同時取我院同期分娩的健康產婦30名為對照組。ICP產婦納入標準：符合中華醫學會婦產科學分會2015年發布的《妊娠期肝內膽汁淤積癥診療指南（2015）》[2]對ICP的診斷標準。排除標準：胎位異常、多胎妊娠、頭盆不稱;免疫系統方面疾病、肝膽疾病;具有妊娠期高血壓、心臟病及糖尿病等妊娠合并癥;有復發性自然流產、死胎、畸胎等不良孕產病史;有長期服用藥物及吸煙史。本研究經醫院醫學倫理委員會審核，參與研究者均知情同意。

1.2 ICP的分度標準

ICP分度標準：①輕度ICP，血清總膽汁酸（TBA）10～40 μmol/L;臨床癥狀：瘙癢為主，無明顯其他癥狀。②重度ICP，TBA≥40 μmol/L;臨床癥狀：瘙癢嚴重;伴有其他情況：復發性ICP、曾因ICP致圍生兒死亡者。

1.3 觀察指標及檢測方法

比較兩組產婦的早產率、羊水糞染率及TBA、谷丙轉氨酶（ALT）及谷草轉氨酶（AST）水平。搜集兩組產婦的胎盤，采用鏈霉素抗生物素蛋白-過氧化物酶連接（SP）超敏免疫組化試劑盒檢測胎盤組織IL-6及STAT3的表達。胎盤娩出后10 min內，避開胎盤鈣化灶、梗死區取胎盤母體面組織2塊約1 cm×1 cm×1 cm大小，用磷酸鹽緩沖液（PBS）漂洗后放入10%甲醛中固定，予以酒精梯度脫水，二甲苯透明后常規石蠟包埋，切成5 μm厚的薄片備用。操作嚴格按SP法試劑盒步驟進行，兔抗IL-6、STAT3抗體試劑盒（購自上海生工生物工程股份有限公司），陽性對照取已知陽性片，陰性對照用PBS代替一抗，二氨基聯苯胺（DAB）染色。

1.4 結果判讀方法

IL-6定位在滋養層細胞的胞漿，STAT3定位在滋養層細胞的胞漿和胞核，IL-6、STAT3陽性信號為呈現棕黃色顆粒，按陽性細胞百分率評分：0%～5%為0分，>5%～25%為1分，>25%～75%為2分，>75%為3分。按細胞質或胞核著色程度評分：未著色為0分，淺黃色著色為1分，棕黃色著色為2分，棕褐色著色為3分，將兩項得分相乘，<2分判為陰性（-），≥2分為陽性（+）。所有結果經過2位病理科診斷醫師采用雙盲法進行確認。

1.5 統計學方法

采用SPSS 13.0統計學軟件進行數據分析，計量資料用均數±標準差（x±s）表示，兩組間比較采用t檢驗;計數資料用率表示，組間比較采用χ2檢驗，采用Spearman分析IL-6及STAT3表達相關性，以P < 0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 產婦妊娠資料比較

對照組與ICP組年齡比較差異無統計學意義（t = -0.592，P = 0.556，P > 0.05）。ICP組產婦終止妊娠的孕齡小于對照組，差異有統計學意義（P < 0.05），ICP重度組產婦終止妊娠的孕齡小于ICP輕度組，差異有統計學意義（P < 0.05）。對照組、ICP輕度組、ICP重度組產婦的早產率、羊水糞染率、TBA、谷丙轉氨酶（ALT）及谷草轉氨酶（AST）呈上升趨勢，對照組與ICP組比較，差異有統計學意義（P < 0.05）。ICP重度組的早產率、羊水糞染率稍高于ICP輕度組，但差異無統計學意義（P > 0.05），ICP重度組的產婦TBA、ALT、AST均高于ICP輕度組，差異有統計學意義（P < 0.05）。見表1～2。

2.2 IL-6及STAT3在產婦胎盤組織中陽性表達情況比較

在對照組、ICP輕度組及ICP重度組的胎盤滋養細胞中，IL-6定位在滋養層細胞的胞漿中，見圖1（封四）;STAT3定位在滋養層細胞的胞漿和胞核中，見圖2（封四）。ICP組的IL-6及STAT3的陽性表達率明顯高于對照組，差異有高度統計學意義（P < 0.01），ICP重度組IL-6及STAT3的陽性表達率稍于ICP輕度組，差異無統計學意義（P > 0.05）。IL-6、STAT3在對照組、ICP輕度組、ICP重度組產婦胎盤滋養細胞中的陽性表達率逐漸升高。ICP組中，IL-6與STAT3蛋白的表達呈正相關（r = 0.694，P < 0.01）。見表3～4。

3 討論

ICP作為妊娠期特發性肝臟疾病，多合并有肝功能異常[3]，表現為血清總膽汁酸水平升高，血清總膽汁酸水平升高損傷細胞膜和線粒體膜，使得生物膜受損程度加重，ALT、AST水平升高進一步可導致TBA水平升高，肝功能損害越重，圍生兒不良結局的發生率越高[4]。有此合并癥的孕婦較易發生胎兒宮內窘迫、早產、羊水糞染、新生兒窒息等[5]，一旦孕婦診斷ICP，則需每周監測肝功能，了解總膽汁酸指標變化情況，對胎兒監護方法包括計數胎動、胎兒電子監護、血流頻譜、胎兒超聲，上述方法臨床上普遍應用于預測圍生兒不良結局[6]，但其作用仍有局限性。目前，無治愈ICP的特效藥，藥物只是用于改善皮膚瘙癢癥狀或者ICP的血清生化指標。因此對于ICP早診斷從而加強監護，適時終止妊娠為目前最有效的處理方案[7]。

3.1 IL-6在各組胎盤組織中的定位及表達

IL-6由活化的B細胞、靜止的T細胞及單核巨噬細胞等產生，是一種多向性細胞因子，具廣泛的生物學活性，比如調節細胞增殖分化、調控免疫防御、炎性反應等[8]。IL-6在妊娠、分娩以及胎兒生長發育中均有重要作用，正常妊娠時，IL-6維持在較低水平，調節胎盤組織的正常功能[9]。研究[10-11]發現ICP患者血清中IL-6的表達明顯高于正常妊娠，且隨著病情的加重該指標表達顯著增強。本研究顯示：IL-6定位在滋養層細胞的胞漿，IL-6在對照組、ICP輕度組、ICP重度組產婦胎盤滋養細胞中的陽性表達率呈顯著遞增趨勢，這一結果與上述報道一致。

3.2 STAT3在各組胎盤組織中的定位及表達

STAT3在很多組織中發揮重要功能，是細胞生長過程中的調節者[12-13]。Knofler[14]的研究顯示STAT3轉錄因子的活性與絨毛外滋養細胞的凋亡遷移和侵襲相關。有研究[15]對STAT3靶基因Fga、Fgb、Fgg和Socs3的mRNA表達進行了分析，推測抑制STAT3信號通路可能起到關鍵的抗炎作用，對抗膽汁淤積。本研究顯示：STAT3定位在胎盤滋養層細胞的胞漿和胞核中。STAT3在對照組、ICP輕度組、ICP重度組產婦胎盤滋養細胞中的陽性表達率呈顯著遞增趨勢，提示STAT3可能參與了ICP的發生發展。

3.3 STAT3與IL6的相關性

IL-6是一種多效應的炎癥細胞，能調控多種急性期反應蛋白的轉錄[16]，IL-6可通過JAK-STAT3信號通路[17]發生一系列級聯反應，STAT3經磷酸化入核，調控下游靶基因[18]，參與機體的炎癥和免疫應答。STAT3為IL-6信號傳遞中的急性期反應因子，在調節細胞存活、增殖、分化中起著至關重要的作用。針對于STAT3的各種細胞因子的信號通路研究很多，其存在于細胞質中，被細胞因子激活后進入細胞核中，誘導細胞增殖分化，或促使細胞凋亡[19]。王斯南等[20]通過免疫組織化學法評價膽酸對IL-6/STAT3通路的激活情況。結果顯示：膽酸可通過誘導腸道低度炎性反應激活IL-6/STAT3通路。目前未見有關于IL-6/STAT3信號通路在ICP發病發展中的研究。本研究顯示：IL-6與STAT3蛋白的表達于ICP組中呈正相關，IL-6高表達可能激活了STAT3表達，而且隨著病情進展，表達水平越高。提示ICP的發生發展可能有IL-6/STAT3信號通路的參與，并有共同促進作用，IL-6、STAT3的表達可能與病情進展及不良妊娠結局有關。因此，可通過監測血清中IL-6及STAT3濃度了解ICP病情嚴重程度，為臨床指導終止妊娠時機提供新的參考指標，而從信號通路水平研究ICP發病原因并為評估該病的發生發展提供了新的思路，但是本研究的樣本數有限，仍需大樣本、隨機試驗進一步證實。

[參考文獻]

[1]? Williamson C，Geenes V. Intrahepatic cholestasis of pregnancy [J]. Obstet Gynecol，2014，124（1）：120-133.

[2]? 中華醫學會婦產科學分會產科學組.妊娠期肝內膽汁淤積癥診療指南（2015）[J].中華婦產科雜志，2015，31（10）：1575-1578.

[3]? 黃婷，羅紅霞，邵勇.妊娠期肝內膽汁淤積癥胎盤合體滋養細胞中白細胞介素18和半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶-1表達及其意義[J].中國實用婦科與產科雜志，2013，29（4）：279-283.

[4]? Bull LN，Hu D，Shah S，et al. Intrahepatic Cholestasis of Pregnancy （ICP） in U.S. Latinas and Chileans：Clinical features，Ancestry Analysis， and Admixture Mapping [J]. PLoS One，2015，10（6）：e0131211.

[5]? 蔡艾杞，劉路遙，張應鳳，等.妊娠期肝內膽汁淤積癥的研究進展[J].現代婦產科進展，2016，25（11）：871-873.

[6]? 漆洪波，劉興會.對新版“妊娠期肝內膽汁淤積癥診療指南（2015）”的評價和進一步解釋[J].中華婦產科雜志，2015，50（7）：486-488.

[7]? 陳學海，漆洪波.妊娠期肝內膽汁淤積癥相關問題[J].中國實用婦科與產科雜志，2015，31（12）：1100-1102.

[8]? Liu Y，Lin J. Blocking the IL-6-STAT3 signaling pathway：potential liver cancer therapy [J]. Future Oncol，2011， 7（2）：161-164.

[9]? 方彩云，方孝梅，趙亞娟.妊娠肝內膽汁淤積癥患者血清中sVCAM-1及IL-6臨床檢測意義[J].中國計劃生育學雜志，2008，148（2）：106-108.

[10]? El-Faramawy AA，El-Shazly LB，Abbass AA，et al. Serum IL-6 and IL-8 in infants with biliary atresia in comparison to intrahepatic cholestasis [J]. Trop Gastroenterol，2011，32（1）：50-55.

[11]? 黃鷹.TNF-α在妊娠期肝內膽汁淤積癥中表達的研究[J].重慶醫學，2015，44（14）：1913-1915.

[12]? 殷震惠，楊華.VEGF、JAK2/STAT3信號通路與婦科疾病的關系[J].國際婦產科學雜志，2016，43（6）：708-712.

[13]? Fitzgerald JS，Germeyer A，Huppertz B，et al. Governing the invasive trophoblast：current aspects on intra- and extracellular regulation [J]. Am J Reprod Immunol，2010， 63（6）：492-505.

[14]? Knofler M. Critical growth factors and signalling pathways controlling human trophoblast invasion [J]. Int J Dev Biol，2010，54（2-3）：269-280.

[15]? 譚楨，劉愛明，羅敏，等.茵梔黃注射液抗膽汁淤積藥效成分的篩選及其作用機制研究[J].中國中藥雜志，2016， 41（6）：1113-1118.

[16]? 郭紅梅，王建設.炎癥在膽汁淤積中的作用[J].肝臟，2012，17（8）：574-576.

[17]? Wang Y，Levy DE. Comparative evolutionary genomics of the STAT family of transcription factors[J]. JAK STAT，2012，1（1）：23-33.

[18]? Rawlings JS，Rosler KM，Harrison DA. The JAK/STAT signaling pathway [J]. J Cell Sci，2004，117（8）：1281-1283.

[19]? Siveen KS，Sikka S，Surana R，et al. Targeting the STAT3 signaling pathway in cancer：role of synthetic and natural inhibitors [J]. Biochim Biophys Acta，2014，1845（2）：136-154.

[20]? 王斯南，曹海龍，許夢雀，等.白細胞介素6/信號轉導和轉錄激活因子3通路在膽酸誘導Apcmin/+小鼠腸腺瘤癌變中的作用[J].中華消化雜志，2017，37（2）：101-105.