HMGB1與胃癌組織血管形成的關系及其臨床意義

舒旭 蔣婷 李姿萱

摘要：目的? 確定高遷移率族蛋白B1與胃癌組織血管生成之間的聯系，篩選胃癌診斷和治療的靶點。方法? 收集2008年6月～2016年6月懷化市第一人民醫院病理科正常胃、胃癌旁、胃癌癌組織蠟塊共105例，采用常規HE染色（蘇木素-伊紅）、免疫組織化學染色（鏈霉菌抗生物素蛋白-過氧化物酶連結法-SP法），檢測正常胃組織、胃癌旁組織及胃癌組織中HMGB1的表達情況、檢測人造血祖細胞抗原（CD34）的表達情況來反映正常胃組織、胃癌旁組織及胃癌組織中的微血管密度（MVD），統計學分析HMGB1的表達與胃癌組織MVD之間存在的相關性。結果? 正常胃組織HMGB1的陽性表達率低，胃癌癌旁組織HMGB1的陽性表達率增高、胃癌組織中HMGB1的陽性表達率最高，在三種組織中HMGB1的表達存在差異（P<0.05）;HMGB1的表達水平與MVD表現出正相關性（r=0.205，P<0.05）。結論? HMGB1在胃組織、胃癌旁組織、胃癌組織中的表達呈階梯型增高，胃癌組織中HMGB1的表達水平與組織MVD成正相關性。

關鍵詞：胃癌;血管生成;HMGB1;CD34

中圖分類號：R735.2? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標識碼：A? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?DOI：10.3969/j.issn.1006-1959.2019.15.024

文章編號：1006-1959（2019）15-0077-03

Abstract：Objective? To determine the relationship between high mobility group protein B1 and angiogenesis in gastric carcinoma， and to screen the target of diagnosis and treatment of gastric carcinoma. Methods? A total of 105 cases of normal stomach， gastric carcinoma and gastric carcinoma tissue were collected from June 2008 to June 2016 in the Department of Pathology， First People's Hospital of Huaihua City， using conventional HE staining （hematoxylin-eosin） and immunohistochemical staining. Streptomyces avidin-peroxidase-linked-SP method， detecting the expression of HMGB1 in normal gastric tissue， para-cancerous tissues and gastric carcinoma tissues， and detecting the expression of human hematopoietic progenitor antigen （CD34） to reflect normal Microvessel density （MVD） in gastric tissue， paracancerous tissues and gastric carcinoma tissues， and statistical analysis of the correlation between HMGB1 expression and MVD in gastric carcinoma tissues.Results? The positive expression rate of HMGB1 in normal gastric tissue was low， the positive expression rate of HMGB1 in gastric carcinoma tissues was increased， and the positive expression rate of HMGB1 was the highest in gastric carcinoma tissues. The expression of HMGB1 was different in three tissues （P<0.05）. The expression level of HMGB1 was positively correlated with MVD （r=0.205，P<0.05）.Conclusion? The expression of HMGB1 in gastric tissue， paracancerous tissues and gastric carcinoma tissues is increased stepwise. The expression level of HMGB1 in gastric carcinoma tissues is positively correlated with tissue MVD.

Key words：Gastric carcinoma;Angiogenesis;HMGB1;CD34

胃癌（gastric carcinoma）在消化道疾病中很常見，是由于胃黏膜上皮細胞惡變產生，對患者危害程度很高[1]，其臨床癥狀沒有特異性，與胃的其他慢性疾病難鑒別，提高胃癌的早期診斷率成為臨床上迫切需要解決的問題。研究表明[2]，許多腫瘤組織中，高遷移率族蛋白B1（HMGB1）的表達是增高的，它可能通過血管內皮生長因子（VEGF）的表達上調，促進腫瘤血管的形成。血管供血是腫瘤組織細胞生長的物質基礎，為腫瘤細胞的侵襲和轉移提供營養物質[3]。VEGF能讓血管管壁通透性增高，導致血漿滲出形成腹水或水腫，影響細胞外基質，參與血管的形成的過程[4]。除此之外，HMGB1還可以通過誘導局部組織產生炎癥反應，促進反應區域組織修復和血管新生，是由于血管內皮細胞生長的過程中有HMGB1的參與[5]。本研究通過檢測HMGB1在正常胃組織、胃癌旁組織及胃癌組織中的蛋白表達以及微血管密度（MVD）的測定，探討胃組織、胃癌旁組織、胃癌組織中HMGB1的表達情況，以及胃組織、胃癌旁組織、胃癌組織中HMGB1的表達情況與組織MVD之間的相關性。

1材料和方法

1.1標本? 收集2008年6月～2016年6月懷化市第一人民醫院病理科正常胃、胃癌旁、胃癌癌組織蠟塊共105例，其中正常胃組織蠟塊10例，胃癌旁組織蠟塊32例，胃癌組織蠟塊63例。

1.2試劑和儀器? HMGB1免疫組化試劑盒，采購自北京博奧森公司，PBS檸檬酸鹽緩沖液，切片機，烤片機。

1.3實驗方法

1.3.1組織切片的制作? 選取的標本每個切取5張白片，4張免疫組化備用，1張HE染色。

1.3.2免疫組化? 4張白片進行免疫組化檢測，步驟和方法（參考北京博奧森公司生產的HMGB1免疫組化試劑盒說明書）。陽性對照用已知HMGB1及CD34陽性表達的組織進行，陰性對照為PBS代替一抗來進行。細胞核或細胞漿出現棕黃色顆粒作為染色陽性判定標準[6]。MVD計數方法：隨機選取10個高倍鏡視野，統一血管數量，取其平均值。

1.4 統計學分析? 統計方法為顯著性檢驗的？字2檢驗，HMGB1與MVD的相關性分析應用Spearman相關分析進行檢驗，所有分析均SPSS 22.0統計軟件進行，按α=0.05水準，P<0.05為差異具有統計學意義。

2結果

2.1 HMGB1在胃組織、胃癌旁組織及胃癌組織中的表達? HMGB1在胃組織、胃癌旁組織及胃癌組織（圖1）中的陽性表達率分別為10.00%、46.87%和88.89%，差異具有統計學意義（P<0.05），見表1。

2.2 HMGB1表達與CD34標記的微血管的相關性? 腫瘤組織細胞高度異型區微血管密度高（圖2）。Sperman相關分析的統計學方法分析HMGB1表達與MVD的相關性，表明HMGB1的表達與MVD正相關（r=0.205，P<0.05），見表2。

3討論

腫瘤組織內新生血管有很多生成機制，而血管量的增多使腫瘤組織繼續生長，導致其惡性行為的發生。胃癌腫瘤組織的生長與血供直接相關，血管的數量是其發生發展的關鍵點[7]。因為腫瘤組織細胞生長速度很快，細胞增殖過程中會出現缺氧，可以通過促進血管的生成和增強腫瘤組織細胞對缺氧的耐受來適應缺氧環境，在這個過程中有包括HMGB1在內的多種因子的參與[8]。HMGB1作為非組蛋白染色體蛋白，具有較高的非特異性親和力，參與DNA轉錄調控。目前的研究結果表明[9]，胞外HMGB1可與受體結合，主要通過晚期糖基化終產物受體的結合[10]，刺激其他細胞產生相應的復合生物效應，包括炎癥、刺激反應、神經生長。D細胞增殖、分化、遷移等。

近年來研究表明[11]，HMGB1可通過Janus激酶/信號轉導與轉錄激活子（JAK/STAT）信號通路調節促進炎癥反應，而這種對炎癥反應的促進作用可能與HMGB1的高表達能促進腫瘤血管生成。STAT在多種惡性腫瘤中高表達[12]，但在正常組織和細胞中很少或沒有激活。HMGB1作為STAT信號通路中可能的調控因子，與腫瘤的發展密切相關。HMGB1與晚期糖基化終產物受體（RAGE）的結合，RAGE是HMGB1的主要受體，與HMGB1具有高親和力。現有研究發現[13]，HMGB1和RAGE共表達可影響腫瘤侵襲和轉移的程度，并且可以干擾細胞內外的信號調節，影響腫瘤的生長和轉移。HMGB1和Toll樣受體除了RAGE、Toll樣受體TLR2和TLR4還可以作為HMGB1受體，并且可以與它們的相互作用相互作用以誘導細胞活化，這與腫瘤的發展密切相關[14]。TLR是一種重要的轉運蛋白，參與TLR介導的信號轉導，在HMGB1信號轉導中起重要作用。HMGB1聯合TLR激活NF-κB，參與腫瘤的增殖、侵襲和轉移的信號轉導[15]。

HMGB1在腫瘤生長過程中促進血管生成可能與以下機制有關：①HMGB1可誘導血管內皮生長因子等促血管生成因子的表達;②HMGB1通過增加基質金屬蛋白酶-9的活性，讓正常組織的組織學屏障被破壞，促進了腫瘤血管的生成;③HMGB1能夠對血管內皮細胞調亡產生抑制，促進腫瘤血管的生成。

本研究發現，在正常胃組織、胃癌旁組織、胃癌組織中HMGB1的表達呈明顯上調的趨勢，說明HMGB1可能在促進腫瘤細胞增殖和生長、介導腫瘤血管的形成過程中發揮了作用。本研究還發現，正常胃組織中的微血管密度值小，胃癌旁組織中微血管密度值增大;微血管密度在胃癌組織中最高，而且這些組織的微血管密度值與HMGB1的表達表現出了同步性和相關性，提示HMGB1與胃癌組織中血管的生成關系密切，它們的檢測對臨床胃癌的病理診斷有一定意義。近年研究表明，多種腫瘤細胞中均發現HMGB1蛋白表達，HMGB1 已成為與腫瘤的生長、浸潤、轉移及與血管生成有密切關系的染色質蛋白。在腫瘤中，HMGB1可通過其受體激活一系列信號通路，促進腫瘤的增殖、侵襲和轉移，因此HMGB1為腫瘤的抑制和治療提供了新的靶點。目前，信號轉導的機制尚不完全清楚，這些問題有待進一步研究并可能腫瘤防治提供新的理論依據和控制方向。

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收稿日期：2019-5-30;修回日期：2019-6-10

編輯/楊倩