赪桐提取物抗菌活性及其對金黃色葡萄球菌的抗菌機理

羅澤萍　潘立衛　李麗

摘要：【目的】揭示赪桐提取物（Extracts from Clerodendrum japonicum，EFC）對金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）的抗菌機理，為臨床抗病原菌感染藥及植物殺菌劑的研發提供理論依據。【方法】采用紙片擴散法和微量肉湯稀釋法測定金黃色葡萄球菌、傷寒沙門菌和枯草芽孢桿菌對EFC的敏感性，明確EFC的抗菌活性;通過試劑盒、流式細胞儀及掃描電鏡等測定EFC作用后金黃色葡萄球菌細胞膜、細胞壁、三羧酸（TCA）循環、可溶性蛋白、胞內活性氧（ROS）水平、細胞凋亡及形態結構的變化，研究EFC的抗菌機理。【結果】EFC對金黃色葡萄球菌、傷寒沙門菌和枯草芽孢桿菌3種供試細菌均具有抗菌活性，其中對金黃色葡萄球菌的抗菌活性最強，其抑菌圈（IZ）、最小抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）分別為19.04 mm、0.50 mg/mL和1.00 mg/mL。經EFC作用10 h后，金黃色葡萄球菌的乳酸脫氫酶（LDH）、鉀離子（K+）及堿性磷酸酶（AKP）外泄分別顯著增加72.0%、43.0%和78.0%（P<0.05，下同），琥珀酸脫氫酶（SDH）和蘋果酸脫氫酶（MDH）活性分別顯著下降80.0%和36.4%。金黃色葡萄球菌經EFC作用24 h后，與對照組相比，5MIC（2.50 mg/mL）、10MIC（5.00 mg/mL）和20MIC（10.00 mg/mL）組的胞外蛋白含量分別上升28.6%、41.8%和61.5%，胞內蛋白含量分別下降40.9%、61.3%和82.5%，胞內ROS水平分別增加9.1%、33.5%和51.0%，細胞凋亡率分別增加24.0%、50.6%和72.8%。經EFC作用24 h后，掃描電鏡下的菌體形態結構不規則、萎縮、畸形。【結論】EFC通過破壞金黃色葡萄球菌細胞壁和細胞膜的完整性及通透性，影響蛋白合成，導致TCA循環減慢而發揮抑菌作用。

關鍵詞： 赪桐;提取物;金黃色葡萄球菌;抑菌機理

中圖分類號： S853.75? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?文獻標志碼： A 文章編號：2095-1191（2019）12-2778-09

Antimicrobial activity of extracts from Clerodendrum japonicum and its antibacterial mechanism on Staphylococcus aureus

LUO Ze-ping1， PAN Li-wei1， LI Li2*

（1College of Chemical and Biological Engineering， Hechi University， Hechi， Guangxi? 546300， China;

2College of Pharmacy， Guangxi University of Chinese Medicine， Nanning? 530200，? China）

Abstract：【Objective】To reveal the antibacterial mechanism of extracts from Clerodendrum japonicum （EFC） against Staphylococcus aureus， and to provide a theoretical foundation for the research and development of clinical anti-pathogenic bacteria infection drugs and plant fungicides. 【Method】The sensitivity of S. aureus， Salmonella typhimurium and Bacillus subtilis to EFC was determined by disk diffusion method and microbroth dilution method， and the antibacterial activity of EFC was determined. The changes of cytomembrane， cytoderm， tricarboxylic acid （TCA） cycle， soluble protein， intracellular reactive oxygen species（ROS） level， apoptosis and morphological structure of S. aureus treated with EFC were determined by kit， flow cytometry and scanning electron microscope to study the antibacterial mechanism of EFC. 【Result】EFC had antibacterial activity against S. aureus， S. typhimurium and B. subtilis， among which the antibacterial activity against S. aureus was the strongest， and its bacteriostatic zone（IZ）， minimum inhibitory concentration（MIC） and minimum bactericidal concentration（MBC） were 19.04 mm， 0.50 mg/mL and 1.00 mg/mL， respectively. After 10 h of treatment with EFC， the leakage of lactate dehydrogenase（LDH）， potassium ion（K+） and alkaline phosphatase（AKP） of S. aureus increased significantly by 72.0%， 43.0% and 78.0%， respectively（P<0.05， the same below）. The activities of succinate dehydrogenase（SDH） and malate dehydrogenase（MDH） decreased significantly by 80.0% and 36.4%， respectively. After S. aureus was treated with EFC for 24 h， compared with the control group， the extracellular protein content of 5 MIC， 10 MIC and 20 MIC groups increased by 28.6%， 41.8% and 61.5%， respectively， while the intracellular protein content decreased by 40.9%， 61.3% and 82.5%， respectively. The intracellular ROS level increased by 9.1%， 33.5% and 51.0%， and the apoptosis rate increased by 24.0%， 50.6% and 72.8%， respectively. After 24 h of treatment with EFC， the morphology and structure of the bacteria were irregular， atrophied and deformed under scanning electron microscope. 【Conclusion】By destroying the completeness and permeability of the cytoderm and cytomembrane of S. aureus， EFC affecting protein synthesis which leads to the slowdown of TCA circulation and hence plays a role in antibacterial action. Therefore， strengthening the research on the antibacterial components of EFC is an important way to develop new， efficient and low-toxic anti-pathogenic drugs and plant fungicides.

Key words： Clerodendrum japonicum; extracts; Staphylococcus aureus; antibacterial mechanisms

0 引言

【研究意義】使用抗生素是臨床治療傳染性疾病的主要手段，但隨著抗生素的大量及不合理應用，耐藥細菌不斷出現，超級耐藥菌也隨之產生（Deng et al.，2015），而如何應對多重耐藥菌帶來的危害已成為當前醫學界廣泛關注的重要課題之一。中藥作為我國醫學的寶貴遺產，具有獨特的資源優勢，且毒副作用小、不易產生抗藥性（楊健等，2016;樸喜航和艾紅佳，2017），推測利用中藥及其有效成分控制細菌感染及降低細菌耐藥性具有廣闊的應用前景。因此，研究并開發中藥抗菌制劑對避免耐藥菌株的產生具有重要意義。【前人研究進展】赪桐（Clerodendrum japonicum）為馬鞭草科（Verbenaceae）大青屬（Clerodendrum）植物，該屬植物因具有豐富的化學成分及獨特的藥理活性而受到廣泛關注。田軍和孫漢董（1995）應用正反相硅膠柱層析、中壓柱層析及制備性薄層層析等手段，從赪桐中分離得到4個苯丙素苷類成分，同時獲得22，23-二氫菠甾醇、豆甾醇、25，26-去氫豆甾醇、烏索酸、丁二酸酐和小麥黃素等化合物。尚冀寧（2010）對赪桐乙醇提取物石油醚、氯仿、乙酸乙酯和正丁醇4個萃取部分的化學成分進行分離，結果鑒定出17種化合物，分別屬于二萜、黃酮、甾體和香豆素等類型。陳俊等（2013）采用二甲苯致小鼠耳腫脹、醋酸致小鼠腹腔毛細血管通透性增加及小鼠棉球肉芽腫等急慢性炎癥模型，結果發現赪桐根水提物對急慢性炎癥有明顯的抗炎作用。焦楊等（2016）采用細胞溶血法研究赪桐醇提取物經典途徑和旁路途徑的抗補體活性，結果發現其具有較強的經典途徑抗補體活性。張樹琳（2018）利用系統溶劑法、正反相硅膠色譜和制備型HPLC等方法從赪桐乙醇提取物的乙酸乙酯中分離獲得35種化合物，其中化合物Japonicum cyclic pentapeptide A、Japonicum cyclic pentapeptide B、Hydroxyhomodestru-xin B及Hydroxydestruxin B具有抗腫瘤活性。目前，關于赪桐抗菌活性的研究甚少，但已有大量研究表明同屬植物臭牡丹、苦郎樹和大青葉等均具有抑菌活性。臭牡丹提取物對金黃色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）、白色葡萄球菌和大腸埃希菌等均有較強的抑制作用（劉建新等，2015）;苦郎樹葉提取化合物（KLS-46和KLS-54）對西瓜枯萎病菌、芒果葉枯病菌、甘蔗鳳梨病菌等植物病原真菌有明顯抑菌活性（鄧業成等，2012）;大青葉粗黃酮對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌和李斯特菌具有明顯抑制作用（劉富康等，2018）。【本研究切入點】赪桐在廣西的資源非常豐富，但在臨床上的應用并不廣泛，通常作為可供觀賞的園藝栽培植物，其藥理作用及機制尚缺乏系統研究。【擬解決的關鍵問題】測定赪桐提取物（Extracts from C. japonicum，EFC）對金黃色葡萄球菌細胞膜、細胞壁、三羧酸（TCA）循環、可溶性蛋白、胞內活性氧（ROS）水平、細胞凋亡及形態結構的影響，揭示其抗菌機理，為臨床抗病原菌感染藥及植物殺菌劑的研發提供理論依據。

1 材料與方法

1. 1 試驗材料

試驗材料為赪桐的新鮮莖葉，母株采自廣西河池市宜州區小龍村。金黃色葡萄球菌（ATCC6538）、傷寒桿菌（ATCC13311）和枯草芽孢桿菌（ATCC9372）由河池學院化學與生物工程學院制藥工程實驗室保藏提供。活性氧檢測試劑盒（批號S0033）購自碧云天生物技術研究所;鉀離子（K+）測定試劑盒（批號2018003）購自長春匯力生物技術有限公司;Annexin V-FITC/PI細胞凋亡檢測試劑盒（批號20171212）購自江蘇凱基生物技術股份有限公司;堿性磷酸酶（AKP）試劑盒（批號20171221）、琥珀酸脫氫酶（SDH）試劑盒（批號20171225）、蘋果酸脫氫酶（MDH）試劑盒（批號20171225）購自南京建成生物工程研究所;蛋白濃度測定試劑盒（批號20171116）購自北京常萊寶科技有限公司;乳酸脫氫酶（LDH）試劑盒（批號20180319）購自上海科華生物工程股份有限公司;其他試劑均為國產分析純。主要儀器設備：AUW220D電子天平（日本島津），HVE-50全自動滅菌鍋（日本Hirayama），SW-CJ-IFD超凈工作臺（蘇州凈化設備有限公司），Forma 3110生化培養箱（美國熱電公司），SU80-40掃描電鏡（日立），DH-20F臺式高速冷凍離心機（長沙市百諾克離心機儀器有限公司），Agilent 8453紫外可見分光光度計（美國安捷倫科技公司），Accuri? C6 Plus流式細胞儀（美國BD公司），CS-2000高速多功能粉碎機（永康市天祺盛世工貿有限公司），xMark酶標儀（美國伯樂BIO-RAD公司）。

1. 2 赪桐提取物制備

將新鮮采摘的赪桐莖葉置于50 ℃烘箱中烘干，粉碎成粉末。稱取500 g赪桐粉末，80%乙醇（料液比1∶10）超聲波提取3次，每次1 h，合并濾液，濃縮回收乙醇，得浸膏131.8 g，浸膏以少量純化水分散懸浮，再用石油醚、乙酸乙酯和正丁醇分別萃取，減壓濃縮蒸干溶劑，得到正丁醇相浸膏54.0 g。

1. 3 抑菌圈（IZ）測定

IZ試驗采用紙片擴散法，并以無菌水及慶大霉素作為對照。

1. 4 最小抑菌濃度（MIC）和最低殺菌濃度（MBC）測定

采用微量肉湯稀釋法（鄭翠萍等，2015）測定EFC的MIC和MBC，設5次平行試驗，以刃天青作為指示劑，無細菌生長的孔呈藍色，有細菌生長的孔則逐漸由藍色變成粉色，并設陽性對照組（加菌和加慶大霉素）及陰性對照組（加菌和加無菌水）。

1. 5 細胞膜通透性測定

菌體處理方法：在肉湯培養基中分別加入對數生長期的金黃色葡萄球菌和EFC，使藥物終濃度為2.5 mg/mL，另設無菌水為空白對照，于37 ℃下130 r/min搖床培養。取各組培養液2.0 mL，4000 r/min離心10 min，棄沉淀，按試劑盒說明測定各時段培養液上清液中的LDH活性（黎芳靖，2018）;按照鉀離子測定試劑盒說明測定各時段培養液上清液中的K+濃度（黃巍等，2017）。

1. 6 細胞壁通透性測定

菌體處理方法同1.5。按照試劑盒說明測定各時段培養液上清液中的AKP活性（劉昊等，2017）。

1. 7 可溶性蛋白含量測定

在肉湯培養基中分別加入對數生長期的金黃色葡萄球菌和EFC，使藥物終濃度為0、2.50、5.00和10.00 mg/mL。于37 ℃下130 r/min搖床連續培養24 h，取各組培養液4000 r/min離心10 min，分別收集上清液和沉淀，測定上清液蛋白含量即胞外可溶性蛋白含量，沉淀用0.2 mol/L磷酸鹽緩沖液（pH 7.2）洗滌3次，再加入蒸餾水5.0 mL，超聲波處理20 min后4000 r/min離心10 min，去除沉淀，然后測定上清液蛋白含量即胞內可溶性蛋白含量（李璐等，2016）。蛋白含量參照試劑盒說明進行測定。

1. 8 TCA循環影響測定

菌體處理方法同1.5。參照Li等（2017）的方法收集菌體，然后根據試劑盒說明測定各時段培養液上清液中的SDH和MDH活性。

1. 9 胞內ROS水平測定

菌體處理方法同1.7。取連續培養12 h的各組培養液，參照黃燕飛（2016）的方法收集菌體;再根據試劑盒說明采用流式細胞儀（FCM）測定各樣品熒光強度。

1. 10 細胞凋亡測定

菌體處理方法同1.7。取連續培養20 h的各組培養液，參照黃燕飛（2016）的方法收集菌體;再根據試劑盒說明采用FCM測定各樣品熒光強度。

1. 11 超微結構分析

菌體處理方法同1.5。取連續培養24 h的各組培養液，參照黃燕飛（2016）的方法收集菌體;再參照王永剛等（2018）的方法制備電鏡樣品后進行掃描電鏡（SEM）觀察。

1. 12 生長曲線測定方法

菌體處理方法同1.7。紫外分光光度計（600 nm）測定各組培養液中不同時間點的吸光值。

1. 13 統計分析

采用SPSS 13.0對試驗數據進行統計分析，其中組間兩兩比較采用 t 檢驗。

2 結果與分析

2. 1 EFC的IZ、MIC及MBC測定結果

由表1可知，EFC對革蘭氏陽性菌和革蘭氏陰性菌均有不同程度的抑制作用，對金黃色葡萄球菌（G+）、傷寒沙門菌（G?）和枯草芽孢桿菌（G+）的IZ分別為19.04、14.85和10.04 mm，MIC分別為0.50、1.25和2.50 mg/mL，MBC分別為1.00、2.50和5.00 mg/mL。EFC對金黃色葡萄球菌的抑制作用最強，因此有必要對其抑菌機制進行深入研究。

2. 2 細胞膜完整性測定結果

細胞膜是金黃色葡萄球菌的保護屏障之一。LDH是一種胞內酶，正常情況下不會外漏，當菌體細胞膜受損時LDH可從胞漿滲出至培養液中，即通過測定培養液中LDH活性的變化可推斷細胞膜是否完整。細胞膜通透性發生改變，胞內離子也可穿過細胞膜而外泄，導致培養液中離子濃度增加。由圖1和圖2可知，與對照組相比，LDH和K+外泄均呈逐漸增加趨勢，培養至10 h時LDH、K+外泄分別增加72.0%和43.0%，差異顯著（P<0.05，下同）。說明EFC可能具有破壞金黃色葡萄球菌細胞膜完整性的作用，從而導致細菌內容物大量外泄。

2. 3 細胞壁完整性測定結果

培養基上清液AKP活性改變可反映菌體細胞壁通透性的變化，藥物處理后菌液AKP活性增加，說明藥物可破壞菌體細胞壁，而失去對菌體的保護作用，最終致使細菌溶解死亡。由圖3可看出，EFC組培養液中的AKP活性較對照組高，并隨著時間的延長而逐漸增強。培養至10 h時AKP活性較對照組增加78.0%，且差異顯著。說明EFC可能具有破壞金黃色葡萄球菌細胞壁完整性的作用，從而導致細菌胞AKP大量外泄。

2. 4 可溶性蛋白含量測定結果

由圖4可知，金黃色葡萄球菌經EFC作用24 h后，其胞外蛋白含量與對照組相比呈明顯的上升趨勢，5MIC（2.50 mg/mL）、10MIC（5.00 mg/mL）和20MIC（10.00 mg/mL）組分別上升28.6%、41.8%和61.5%，可能是細菌細胞膜通透性增加導致部分蛋白外漏所致。與對照組相比，胞內蛋白含量呈明顯下降趨勢，5MIC、10MIC和20MIC組分別下降40.9%、61.3%和82.5%，可能是EFC對金黃色葡萄球菌蛋白具有一定的抑制作用，通過破壞部分蛋白結構而抑制蛋白合成。

2. 5 TCA循環影響測定結果

SDH和MDH是三羧酸循環中的關鍵調控酶，檢測培養液中SDH和MDH的活性能間接反映菌體內能量代謝的情況。由圖5和圖6可知，EFC組的SDH和MDH活性與對照組相比明顯下降，連續培養10 h后SDH和MDH活性分別顯著下降80.0%和36.4%。說明EFC能抑制金黃色葡萄球菌的SDH和MDH活性，進而擾亂菌體內能量代謝。

2. 6 胞內ROS水平測定結果

ROS作為細菌新陳代謝的產物在細胞中不斷產生和消除，ROS系統失衡會對細胞造成傷害，甚至導致細胞死亡。ROS水平變化在一定程度上可反映細菌細胞內部活性的變化。2'，7'-二氯熒光黃雙乙酸鹽（DCFH-DA）本身沒有熒光，可自由穿過細胞膜，進入胞內后可被細胞內的酯酶水解生成DCFH。DCFH不會通透細胞膜，因此探針極易被積聚在細胞內。細胞內的活性氧能將無熒光的DCFH氧化生成具有熒光的DCF。本研究通過DCFH-DA單染色法，采用FCM檢測DCF熒光強度以評價細菌胞內ROS水平。由圖7可知，5MIC、10MIC和20MIC組金黃色葡萄球菌的ROS含量與對照組相比分別增加9.1%、33.5%和51.0%，說明EFC可能通過擾亂細菌ROS平衡而達到抑制細菌生長繁殖的作用。

2. 7 細胞凋亡測定結果

細胞凋亡是指細胞在環境條件改變時為了維護內環境穩定而通過基因調控使其自動結束生命的過程。本研究采用Annexin-V/PI復染法檢測菌體細胞凋亡，結果（圖8）顯示，金黃色葡萄球菌經EFC處理后，Annexin V-FITC染色呈陽性且PI染色呈陰性的細胞即凋亡細胞（圖右下象限Q4-LR）呈增加趨勢;Annexin V-FITC染色和PI染色均呈陽性的細胞即壞死細胞（圖右上象限Q4-UR）也有所增加;Annexin V-FITC染色呈陰性而PI染色呈陽性的細胞（圖左上象限Q4-UL）則是許可范圍內檢測誤差所在象限。細胞凋亡率=Q4-UR+Q4-LR。由圖8可知，5MIC、10MIC和20MIC組的細胞凋亡率與對照組相比分別增加24.0%、50.6%和72.8%，說明EFC的抑菌作用可能與其促使金黃色葡萄球菌發生細胞凋亡及影響菌體系列基因激活、表達和調控有關。

2. 8 菌體超微結構分析結果

對照組金黃色葡萄球菌在掃描電鏡下外觀飽滿、形態規則、表面光滑（圖9-A）;而經EFC作用24 h后，掃描電鏡下的菌體形態結構不規則、萎縮、畸形（圖9-B）。說明EFC具有破壞菌體形態結構的作用，可能與破壞菌體細胞壁、細胞膜及抑制蛋白合成等有關。

2. 9 生長曲線圖繪制結果

生長曲線可表征菌體的生長規律，同時反映藥物對細菌生長增殖周期的抑制情況。由圖10可知，對照組金黃色葡萄球菌培養2 h后開始進入對數生長期，培養22～24 h后進入細菌穩定生長期，培養26 h后進入衰亡期。加入EFC后，金黃色葡萄球菌的生長受到抑制，其生長曲線發生明顯改變，未出現快速生長對數期，說明EFC具有抑制金黃色葡萄球菌生長繁殖的作用，其抑菌機理可能與縮短細菌分裂速度有關。

3 討論

細菌細胞膜通過調節和選擇必需養分及代謝產物進出細胞，從而維持內環境的相對穩定和有序運行。K+能維持細胞內外液的滲透壓平衡，當細胞膜通透性增大時，K+大量外泄（Cox et al.，2000）。本研究結果顯示，經EFC作用后金黃色葡萄球菌的胞內蛋白、LDH和K+均出現外泄，說明EFC具有破壞菌體細胞膜或促使細胞膜通透性增大的作用。AKP存在于細菌細胞壁和細胞膜間，主要參與細菌磷代謝，當細胞壁通透性增大或受損時會發生大量AKP外泄（劉昊等，2017）。本研究結果表明，與對照組相比，經EFC處理后的金黃色葡萄球菌AKP大量外泄，說明EFC具有破壞細胞壁完整性或增大細胞壁通透性的作用。蛋白作為生命活動的物質基礎廣泛存在于菌體內，在藥物作用下菌體蛋白結構受損或合成受抑制，導致部分生物功能消失。經EFC處理的金黃色葡萄球菌胞內蛋白含量明顯下降，說明EFC的抑菌機理可能與阻礙菌體某些蛋白合成有關。

TCA循環是機體糖或其他物質氧化而獲得能量的最有效方式，也是糖、脂類、蛋白及核酸代謝與轉化的樞紐。SDH和MDH是TCA循環的關鍵酶（Naseri et al.，2016）。本研究結果表明，經EFC處理后金黃色葡萄球菌的MDH和SDH活性較對照組明顯降低，說明EFC的抑菌作用與破壞或抑制TCA循環有關。ROS可使類脂中的不飽和脂肪酸發生過氧化反應，破壞細胞膜結構，造成機體多種損傷和病變，而加速衰老（Elloumi et al.，2017;Vassie et al.，2017）。本研究結果顯示，經EFC處理后金黃色葡萄球菌胞內ROS水平與對照組相比明顯增加，說明EFC破壞了菌體ROS與抗氧化系統間的平衡。此外，經EFC處理后金黃色葡萄球菌的細胞凋亡率與對照組相比明顯上升，說明EFC具有誘導細胞凋亡的作用。

李開泉等（2002）研究發現烏索酸能抑制金色葡萄糖球菌及酵母的生長;趙雁武等（2003）研究證實3，4-二羥基苯甲醛對金黃葡萄球菌和大腸桿菌均有抑制作用;孫濤（2013）研究發現七星瓢蟲的次生代謝產物對羥基苯乙醇對沙門氏菌、綠膿桿菌、金黃色葡萄球菌和大腸桿菌具有良好的抑菌活性;蔡百祥等（2015）研究表明0.6 mg/mL丁香脂素對油菜菌核病菌的抑制率達36.72%;石麗娟（2015）研究證實反式對羥基肉桂酸對小麥赤霉病菌的半數有效濃度（EC50）為10.80 mg/L;熊麗霞（2016）研究發現對羥基苯甲醛對釀酒酵母表現出較強的抑制作用，且枯草芽孢桿菌和大腸桿菌對對羥基苯甲醛也較敏感;陸俊（2018）研究證實芹菜素是鴨兒芹發揮抗氧化和抗菌活性的主要活性成分;楊光等（2018）研究表明對羥基苯甲酸對大腸桿菌、枯草芽孢桿菌和金黃色葡萄球菌具有不同程度的抑制作用。根據以上文獻推測，張樹琳（2018）從赪桐提取分離的化合物馬桶花酮、3，4-二羥基苯甲醛、對羥基苯乙醇、對羥基苯甲酸、對羥基苯甲醛、丁香脂素和反式對羥基肉桂酸等可能都是赪桐的有效抑菌活性成分。此外，從赪桐中提取獲得的烏索酸（田軍和孫漢董，1995）和芹菜素（尚冀寧，2010）可能也是抑菌活性成分。赪桐化學成分種類較多，且其單一成分藥理活性作用廣泛。本研究結果表明，EFC具有較強的抑菌作用，對金色葡萄糖球菌的IZ、MIC、MBC分別為19.04 mm、0.50 mg/mL和1.00 mg/mL，可能是通過破壞細胞壁和細胞膜的完整性及通透性，影響蛋白合成，導致TCA循環減慢而發揮作用，但具體抑菌作用機理有待進一步探究。

4 結論

EFC通過破壞黃金色葡萄球菌細胞壁和細胞膜的完整性及通透性，影響蛋白合成，導致TCA循環減慢而發揮抑菌作用。因此，加強EFC抑菌活性成分研究是開發新型、高效、低毒抗病原菌感染藥和植物殺菌劑的重要基礎。

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（責任編輯 蘭宗寶）