ISSR分子標記技術在作物遺傳育種中的應用

孫玥，蘇京平，王勝軍，閆雙勇，孫林靜

文章編號： 1005-2690（2019）12-0026-02 ? ? ? 中圖分類號： S336 ? ? ? 文獻標志碼： B

摘 ? 要：ISSR分子標記是目前生物標記上新型的標記技術模式，通過引用設計簡單的SSR技術，按照兩端堿基礎序列，實施高重復性操作，完成多信息的綜合重組。在作物的種植鑒定、遺傳定位、多樣性區(qū)分上具有良好的標記作用，可以實現(xiàn)多態(tài)化的操作。針對ISSR分子標記技術的相關特點進行了分析，研究作物實驗操作上，通過遺傳育種技術領域的操作，完成作物遺傳育種的整體應用操作過程。

關鍵詞：ISSR分子標記;遺傳作物;育種;應用

通過SSR技術標記，對衛(wèi)星序列兩側的保守序列進行引物設計分析，完成PCR擴容和衛(wèi)星序列的增序操作。通過SSR序列的拷貝，可以重點分析其中的差異，依照技術的穩(wěn)定和重復情況，分析遺傳種質標準，明確SSR技術兩側引物的操作和特異性，依照引物設計費用消耗比例關系，分析一定程度上技術的廣泛應用。

1 ? ISSR技術標準特點分析

ISSR技術是以多分子標記為基礎，通過組建內的擴容，實現(xiàn)微衛(wèi)星序列的單一設計操作。依據(jù)兩側的反向序列對DNA進行SSR排列，完成單引物的擴增。通過染色體、色譜、色帶電泳等相對位置，判斷相同ISSR品間標記下的多態(tài)數(shù)據(jù)內容;通過ISSR的堿基數(shù)據(jù)引物操作分析，判斷串聯(lián)重復組建序列下的組成標準。按照3端、5端的錨定位堿基分析，確保ISSR引物下SSR的DNA數(shù)據(jù)序列擴增水平;通過衛(wèi)星基因的增效分布判斷，對燈位變異狀態(tài)進行分析，明確ISSR技術檢測的多態(tài)性操作;通過物種的特異性判斷，將ISSR、SSR進行特異性的研究;通過與動植物等各類基因的對比分析，可以從不同角度進行設計要求分析，判斷產物的多態(tài)水平，提供必要的基因組數(shù)據(jù)信息。

2 ? ISSR作物遺傳育種標記上的作用分析

依照國際上的先進技術，通過組建分析獲取更加便捷、快速的多態(tài)性數(shù)據(jù)分析。通過對小麥的作圖分析、定位基因判斷、多樣遺傳分配等確定多方面的廣泛應用操作模式。

2.1 ? 遺傳作圖數(shù)據(jù)分析

ISSR標記中包含高度多態(tài)模式的整體基因組操作過程。根據(jù)有效繪制遺傳連圖操作，確定ISSR標記下的小麥遺傳作圖數(shù)據(jù)。根據(jù)相關操作結果，對ISSR數(shù)據(jù)圖進行標記，確定整體分布下的染色體組成過程。按照圖位置與之處理，明確標記的區(qū)域范圍。分析飽和度的增加情況水平，通過分子標記組建進行縮小，調整遺傳作圖數(shù)據(jù)的分析過程。

2.2 ? 基因的定位數(shù)據(jù)分析

按照ISSR標記數(shù)據(jù)作物，對基因進行定位，明確小麥、水稻的標記過程。分析與小麥之間的分子標記，完成與小麥種子之間的連鎖操作。通過大種子之間的連鎖標記，確定組建尋找控制的連鎖型模式。通過引物、定位完成數(shù)據(jù)基因的恢復操作。按照恢復基因的連鎖定位，落實在1B染色體上。依照ISSR引物定位的T型模式，逐步恢復系列因素;按照標記小麥的T連鎖狀態(tài)后才能對細胞質基因的連鎖處理，控制遺傳基因的距離范圍。通過輪回本位分析，判斷相關基因下的數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)基因連鎖下的ISSR標記過程。依照細胞質不育與之強化恢復系列的配組操作，通過不同群體的恢復性定位群體判斷。使用ISSR引物，完成恢復基因的定位連鎖分析，表明數(shù)據(jù)緊縮的連續(xù)性，確定交換律和成圖距離范圍。

2.3 ? 中間種質數(shù)據(jù)資源的分析

按照ISSR數(shù)據(jù)的高度應用多態(tài)標準，以準確高效地鑒別數(shù)據(jù)等位分析，通過區(qū)別不同物種的基因，判斷在引物狀態(tài)下的多倍體小麥品種擴增情況。通過引物可以清晰地觀察其譜帶情況。按照ISSR數(shù)據(jù)的對比信息分析，判斷譜帶的多態(tài)程度，分析標記多態(tài)性能的估測。按照小麥品種間的親緣關系，通過標記確定結果的一致性[1]。根據(jù)標記構建，明確小麥品種體系的圖譜。通過使用PAPD進行對比分析，發(fā)現(xiàn)數(shù)據(jù)中二核苷酸的重復引物類型，分析親緣關系，確定品系間的分別。

通過引入的供試小麥品種，采用明顯區(qū)分的操作方法，對各個基因之間的遺傳差異、親緣關系進行判斷。依照具體的ISSR分子，合理標記小麥雜種的劃分優(yōu)勢，確定結論關系。按照具體的作物數(shù)據(jù)分析，通過ISSR標記完成品種遺傳差異的數(shù)據(jù)效果分析。根據(jù)作物的多樣性，及時檢查ISSR數(shù)據(jù)分析標記的栽培過程。

依據(jù)結果的ISSR引物判斷，確定擴增的多態(tài)鏈條模式，根據(jù)每一個引物的平均擴增標準，明確多態(tài)性鏈條的模式。擴增產物中，需要根據(jù)大小進行區(qū)間分析，按照普通化的栽培遺傳關系親密度，判斷野生稻之間的親緣關系水平。通過聚類標準分析，明確栽培野生稻的顯示分組關系。按照標準建立水稻光溫度敏感不育體系的核算圖譜。利用ISSR引物完成引物檢測分析，通過多態(tài)形式的數(shù)據(jù)分析，判斷ISSR引物檢測的比例關系，完成更多大段的數(shù)據(jù)分配，確定聚合類型。通過材料確定聚合形式，按照不育體系標準，分析顯示的亞類群，將衍生的不育體系聚集在一起。通過遺傳差異的數(shù)據(jù)分析，判斷總體計算遺傳距離內容。根據(jù)收到的數(shù)據(jù)模式，分析多態(tài)下的狀況水平[2]，完成多態(tài)ISSR數(shù)據(jù)標記。利用ISSR標記、PAPD標記，完成組建多栽培品種的遺傳多樣數(shù)據(jù)分析。通過品類數(shù)據(jù)分析，判斷現(xiàn)骨干多態(tài)性帶因素。結合2種標記，完成聚合類物質的研究、供貨引物操作類別的區(qū)分。

3 ? ISSR體系作物的鑒定應用分析

ISSR是按照準確的聚合酶鏈接反應操作完成分子標記。通過檢查各類因素的影響情況，判斷其反應體系和建設程序流程。依照鑒定的通用反應水平體系，分析擴增程序流程。充分利用擴增標準穩(wěn)定性，判斷ISSR快速標記下的作物品鑒視頻，明確ISSR技術反應體系和反作用程度特異性。依照ISSR分子反應程序進行優(yōu)化，明確不同作物的優(yōu)化建設模式，獲取ISSR反應體系完成鑒定分析效果的準確判斷。

3.1 ? 試驗分析

選取小麥、棉花、水稻、玉米、煙草等品種進行試驗分析。采用聚合酶蛋白下DNA數(shù)據(jù)標記的模式，分析測定其濃度和質量水平。

3.1.1 ? ISSR數(shù)據(jù)反映優(yōu)化

按照ISSR數(shù)據(jù)反映優(yōu)化體系，對名稱、序列信息進行調整，記錄ISSR反映優(yōu)化的過程，分析聚合酶DNA以判斷數(shù)據(jù)水平，結合相關組合完成數(shù)據(jù)優(yōu)化的測試分析。記錄PCR反映程序，通過對溫度、擴增循環(huán)數(shù)的組合分析，調整擴增譜帶內容。按照火溫梯度試驗水平進行判斷，明確反映下的測算。通過分析混合擴容增產物，按照瓊脂糖凝膠染色，通過凝膠圖像數(shù)據(jù)，檢測拍圖，判斷PCR反應試劑情況[3]。通過聚合酶的合生分析，判斷優(yōu)化方式。

3.1.2 ? 反應穩(wěn)定檢驗物品鑒定分析

依照不同的作物，分析優(yōu)化適應的PCR體系模式。通過利用反應體系確定擴增、篩選多態(tài)的引物品種，完成數(shù)據(jù)的鑒定分析。

3.2 ? 結果分析

ISSR檢驗結果顯示，不同作物的PCR反應不同。根據(jù)擴增結果判斷電泳，明確DNA測定的保準。通過準確的反應體系逐步增容擴效，優(yōu)化適應ISSR反應體系。退火穩(wěn)度不同，擴增譜帶、清晰度不同。在低溫退火下，調整拖尾和彌散的情況下。在高溫退火下，調整穩(wěn)定條帶關系，逐步減少確定最佳的溫度范圍。

3.2.1 ? 煙草鑒定結果分析

通過利用ISSR體系，對煙草的生物體系進行鑒定，確定PCR穩(wěn)定反應。其中有16條ISSR增擴容達65條，平均引物為4.1條。其中有30條多態(tài)條帶，多臺比率為46%。通過引物可以鑒別出品類。

3.2.2 ? 小麥鑒定結果分析

通過ISSR對反應體系進行鑒定，判斷相關反應體系下的穩(wěn)定性。按照擴增產物大小，判斷間值，明確譜帶范圍。根據(jù)多態(tài)磁條情況，分析每條ISSR引物擴增條目，確定引物標準。

3.2.3 ? 水稻鑒定結果分析

依照100條ISSR引物所篩選出的多態(tài)性水稻品種進行鑒定，其中有17條多態(tài)引物，共產生98條譜帶，平均每條5.76。按照引條完成組合分析，判斷帶型，明確鑒別的型號和標準，完成組建品類的分析。

3.2.4 ? 玉米鑒定結果分析

共5條多態(tài)ISSR引物，且共增擴出48條譜帶，平均引物為9.6條。按照擴增的大小進行分析，確定48條譜帶中有40條多態(tài)譜帶，多態(tài)比率為83%。通過對引腳擴增的多態(tài)進行目標分析，確定3條引物組合，最終鑒定分析玉米的品種。

3.2.5 ? 棉花鑒定結果分析

按照棉花最適應的反應體系，分析優(yōu)化棉花的最佳標準。依照ISSR引物，分析棉花的PCR擴增比例關系，確定體系的穩(wěn)定性。通過試驗結果的優(yōu)化，加強對反應體系下不同棉花品種的分析，適應不同的ISSR引物操作。按照ISSR組合引物，調整棉花的品類鑒定過程，明確棉花的最佳品類。

3.3 ? PCR反應體系的優(yōu)化分配

按照ISSR數(shù)據(jù)分析標記，判斷遺傳多樣圖譜數(shù)據(jù)內容。通過資源信息的收集，對ISSR進行鑒定分配，調整擴增的比例關系。通過用量數(shù)據(jù)分析，判斷聚合酶的用量特異性。分析電泳圖譜的比例關系，判別合成速率和產量關系。對比DNA聚合酶活性，控制濃度標準水

綜上所述，ISSR技術是一項快速、準確、多態(tài)的分子標記操作方法。通過大規(guī)模的數(shù)據(jù)基因分析，按照指紋數(shù)據(jù)、遺傳數(shù)據(jù)、基因定位數(shù)據(jù)等模式的判斷，從物種遺傳學角度，分析相關的整體作用發(fā)揮水平，判斷其實際的作用標準和應用價值意義，滿足現(xiàn)代基因數(shù)據(jù)種植標記分析的研究需求。

參考文獻：

[ 1 ] 孫洪，程靜，詹克慧，等.ISSR標記技術及其在作物遺傳育種中的應用[J].分子植物育種，2005（1）.

[ 2 ] 林志坤，孫威江，陳志丹，等.ISSR分子標記技術及其在茶樹研究中的應用[J].廣東農業(yè)科學，2014（9）.

[ 3 ] 白成科，文苗苗，于鳳，等.基于ISSR分子標記技術構建黃芩核心種質的方法研究[J].中藥材，2010（11）.