中藥重樓種子繁殖技術研究進展

劉賀賀 梁玖華 阮成江 田雪麗

文章編號： 1005-2690（2019）09-0036-02? ? ? ?中圖分類號： S567.239? ? ? ?文獻標志碼： A

摘? ?要：中藥重樓為我國重要的中藥資源，目前急需重樓的快速繁殖，一直以來使用的根莖繁殖的特點限制了重樓產業的發展。綜述了重樓種子繁殖技術的研究進展，以期為重樓種子的快速繁殖和重樓產業的快速發展提供參考。

關鍵詞：中藥;重樓;種子;繁殖技術;研究進展

重樓為百合科（Liliaceae） 重樓屬（Paris L.） 七葉一枝花（Paris polyphylla Smith var. chinensis（Franch.） Hara）或云南重樓（Paris polyphylla Smith var. yunnanensis（Franch.） Hand. -Mazz.）的干燥根莖[1]。

重樓具有清熱解毒、消腫止痛、涼肝定驚之功效，用于癰瘡、咽喉腫痛、毒蛇咬傷、跌打傷痛、涼風抽搐等癥，是奪命丹、云南白藥及其他中成藥的重要原料。始載于《神農本草經》，名蚤休，列為下品;《滇南本草》始以重樓作為其正式藥名，記載重樓為：“消諸瘡，無名腫痛，利小便”。

重樓生長周期較長，近年來對重樓資源的需求量逐漸增加，采挖過程中忽視了對重樓資源的保護和繁育，導致野生重樓資源嚴重透支，需要大量的人工繁殖栽培才能滿足市場需求。重樓繁殖，以根莖切塊繁殖與種子繁殖兩種方式為主。①根莖切塊繁殖是最為常用、成熟的種苗繁殖方式，但該方法存在耗種量大、種苗成本高、繁殖系數低、與藥材市場爭奪根莖原料、種苗退化等問題，根莖的切塊繁殖限制了重樓產業的可持續發展[2]。②重樓種子產量高、繁殖系數大，是大量獲得重樓種苗的有效方法之一。

本文就重樓種子繁殖技術的研究情況進行了綜述，期望為重樓種子種苗的快速繁殖及重樓的產業化發展提供建議。

1? ?重樓種子

重樓果實為蒴果或漿果狀蒴果，果實近球形，果皮綠色，成熟時果皮自然開裂，光滑或具棱，果實含種子，種子數量不一，少則數粒，多則上百粒。種子由種皮、胚、胚乳3個主要部分組成，成熟種子的胚發育不完全，處于球形胚階段。重樓果期8—11月，當果實開裂，種子外種皮由橙色逐漸變為深紅色時種子成熟。

2? ?種子萌發過程

重樓種子萌發周期較長，綜合種子萌發時外觀形態變化、內部結構電鏡觀察、田間出苗時間等因素，一般將種子萌發分為3個階段：第一階段為未萌發、未解除休眠階段;第二階段為萌發后未形成根系，當年不出苗，處于上胚軸休眠階段;第三階段為根系形成，子葉發育完全，當年出苗階段[3]。

自然條件下，重樓種子存在休眠現象，需要兩冬一夏才能順利萌發，且隨著時間的推移種子萌發率下降，l5個月的出苗率僅為46.2%[4]。大量種子在漫長的休眠期間喪失了生命力。重樓種子休眠程度高、萌發速率慢、萌發率低等客觀條件，限制了重樓的人工栽培規模。

3? ?重樓種子萌發過程中激素的變化

重樓種子在萌發過程中，隨著時間推移，種子內部激素發生變化，赤霉素（GA3）含量升高、脫落酸（ABA）含量持續降低，重樓種子在即將出苗階段的超氧化物歧化酶（SOD）、過氧化物酶（POD）活性迅速升高，生長素（IAA）、GA3含量均在即將出苗階段顯著高于其他階段，種子休眠解除后ABA含量迅速下降，SOD、POD、GA3是種子出苗階段的關鍵物質[5]。

4? ?重樓種子的休眠

目前研究普遍認為，種皮（果皮）吸水障礙、胚休眠與種子中存有萌發抑制類物質是種子休眠的三大主要原因。

Baskin等人將植物種子休眠分為5種類型，即生理休眠、形態休眠、生理形態休眠、物理休眠、綜合休眠[6]。綜合研究認為，重樓種子成熟時種胚發育不完全、種子中存在萌發抑制類物質是其休眠的主要原因，種子不存在吸水障礙，與休眠無關，重樓種子休眠類型為綜合性休眠。在自然環境條件下，重樓生境中較長的低溫時期可能是導致重樓種子具有較長時間休眠的外界原因。

5? ?重樓種子破除休眠的方法

為打破種子休眠，常用的方法有3種類型[7]。

第一種為物理方法，主要采用機械、溫度（高溫、低溫、變溫）、干藏干熱、射線、超聲波、電場和磁場處理等物理手段打破種子休眠。

第二種為化學方法，即使用激素、無機化學試劑、有機化學藥劑處理，打破種子休眠的方法。

第三種為綜合處理方法，即結合物理和化學方法，使用不同的組合方法打破種子休眠。

5.1? ?物理方法

5.1.1? ?層積

層積處理是在適宜的環境條件下，種胚完成后熟的過程和結束休眠促進萌發的一項措施。休眠的重樓種子在經過層積處理后，可促進其順利完成形態后熟和生理后熟，并最終獲得萌發能力。

李昭玲[8]等人采用（18±1）℃溫度對重樓種子進行層積，在層積后80 d種子形態后熟基本完成，然后以（4±1）℃的低溫層積，進一步促進種子的生理后熟。并發現，重樓種子萌發的過程中，呼吸代謝途徑由三羧酸途徑為主轉為磷酸戊糖途徑為主，從而促進種子解除休眠。

5.1.2? ?去皮

重樓的外種皮含有萌發抑制物，資料顯示，重樓種子外種皮提取物對水稻種子萌發及幼苗生長具有明顯的抑制作用，表明重樓種子的外種皮可能對種子萌發產生不利影響。姜美杰等人比較不同去皮方式對重樓種子萌發的影響，發現當采用冷凍去皮法恰當去皮后，可顯著促進種子及早發芽，縮短萌發時間[9]。

5.1.3? ?超聲波

超聲波是一種頻率超過20 kHz的彈性機械波，可刺激植物種子提高發芽率、加速幼苗生長、增加產量等，采用超聲波處理之后的種子，可以達到比野生或常規種植培育的藥用植物生長速度快的效果。

周濃等人研究超聲波對重樓種子萌發能力的影響，在使用超聲波處理（40 min、50 ℃、200 W）后的種子萌發的時間縮短，提高了發芽率和發芽指數[10]。使用超聲波處理重樓種子需要有專業儀器，在大規模生產中使用度不高。

在用物理方法破除重樓種子休眠的過程中，可以使用疊加的方式促進種子后熟、加速萌發，既可以采用冷凍去皮法去皮，再使用層積處理，少量樣品還可以使用超聲波處理加速種子后熟和種子萌發。

5.2? ?化學方法

5.2.1? ?激素

重樓種子在萌發的過程中，種子內源激素發生變化，因而可以使用激素處理以促進重樓種子的萌發。張家玲等人研究發現，500 mg/L GA3對重樓種子進行浸種處理，有利于打破重樓種子的二次休眠，可以大大提高其萌發率與出苗的整齊度[11]。500 mg/L的GA3處理，促進了重樓種子淀粉和脂肪的降解、可溶性蛋白和可溶性糖的產生及α淀粉酶、β淀粉酶的合成，表明GA3處理可能是通過影響α淀粉酶和β淀粉酶對淀粉的降解，使可溶性糖積累，從而促進種子萌發。

IAA具有促進細胞分裂、胚根及芽生長的作用，研究發現，1 mg/L的IAA對種子的發芽率、發芽勢、發芽天數均有提高作用[12]。

6-BA作用于細胞分裂和根的伸長，研究結果顯示，1 mg/L的6-BA對重樓種子的發芽率、發芽勢及發芽天數均具顯著的提升作用[13]。

因此，使用合適濃度的外源激素處理重樓種子可以促進重樓種子解除休眠，加速種子的萌發。綜合文獻資料中的信息，GA3是最常用、效果最好的一種激素，研究報道也相對較多，實際生產中可采用500 mg/L GA3對重樓種子進行浸種處理。

5.2.2? ?無機試劑

低濃度（10%）的稀H2SO4浸種處理重樓種子可以提高種子的萌發率，高濃度反而抑制其萌發。姜美杰試驗中施加的H2O2可促進種子萌發過程中胚乳弱化及胚根伸長，外源的H2O2處理對重樓種子存在一定的發芽促進作用。KNO3通過內滲調節作用可顯著促進種子萌發，用KNO3浸種處理的重樓種子在150 d內促進種子的萌發率，但是對發芽勢、發芽天數會造成不利影響[14]。

使用化學試劑處理重樓種子，促進作用不顯著或者抑制萌發，因而在試劑應用中，不建議使用化學試劑處理的方法。

6? ?展望

種子休眠是植物具有正常活力的種子萌發前的一種適應機制，此時的種子即使處于適宜的萌發條件下也不能正常萌發。但是種子休眠期過長，同樣會影響植物本身的生產種植，最終降低經濟效益。因此運用植物外源激素浸種，可以破壞妨礙種子萌發的活性物質，打破種子休眠，從而促進種子的吸水萌發。重樓種子的休眠在一定程度上抑制了重樓產業的快速發展，應采用綜合的技術方法打破種子的休眠，加快種子的萌發速度，保障種子萌發率，促進產業的快速發展。綜合前人研究結果、在實際生產過程中的經濟效益等因素，建議采用不去皮，使用變溫層積處理重樓種子，層積結束后使用GA3浸泡種子，在20 ℃下恒溫萌發，待萌發長出葉子后移栽大田。

目前關于重樓種子研究的主要方向為如何破解重樓種子的休眠及加快重樓種子的萌發，對重樓種子休眠的生理生化及破解休眠的作用機制相對較少，分子生物學角度分析重樓種子休眠原因的報道還未發現。隨著經濟及科技的發展，相信很快能從基因的角度揭示重樓種子休眠的原因。

今后，應更加深入地研究重樓種子的繁殖技術，培育高產、優質的重樓品種品系，促進重樓的產業化發展。

參考文獻：

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（收稿日期：2019-02-26）