Survivin shRNA-APC雙基因?qū)T-29結(jié)腸癌細(xì)胞中 MLH1、 MSH2表達(dá)影響的進(jìn)展研究

張玉健 王鳳榮 陳月 孫元佳 袁喜先

摘要：已證實?APC、?survivin是結(jié)腸腫瘤中重要的兩種基因，其功能異常在結(jié)腸腫瘤的生長階段中起到重要作用，本課題探討?Survivin?shRNA-?APC雙基因?qū)?HT-29結(jié)腸癌細(xì)胞中?MLH1、?MSH2表達(dá)的影響，通過檢測?MLH1、?MSH2的表達(dá)來檢驗雙基因?qū)?HT-29結(jié)腸腫瘤細(xì)胞的影響，深入了解?survivin?shRNA-?APC雙基因?qū)?MLH1、?MSH2表達(dá)的影響可為結(jié)腸癌在靶向治療中提供一定的基礎(chǔ)實驗依據(jù)，為以后改善結(jié)腸癌的治療現(xiàn)狀及預(yù)后情況提供理論依據(jù)，使?MLH1、?MSH2也有望成為結(jié)腸癌檢測的幾個靶向指標(biāo)。

關(guān)鍵詞：APC; survivin;雙基因;c-myc; hMLH1;hTERT;hMS2;結(jié)腸癌;

【中圖分類號】735.3 ???【文獻(xiàn)標(biāo)識碼】A ???【文章編號】2107-2306（2019）06-198-02

結(jié)腸癌是世界上第三大最常見的癌癥，也是導(dǎo)致癌癥相關(guān)死亡的第四大原因。結(jié)腸癌是一個復(fù)雜的多因素、多步驟、多層次的漸進(jìn)過程，涉及編碼或非編碼基因突變、組織形態(tài)及遺傳變化，遺傳和表觀遺傳修飾而成，可導(dǎo)致抑癌基因的失活和（或）原癌基因的激活，其中內(nèi)在元素和外觀環(huán)境因素在疾病的形成過程中不可缺少 。本文現(xiàn)就MLH1、MSH2、survivin、APC的生物學(xué)特性以及與腫瘤的關(guān)系方面進(jìn)一步進(jìn)行闡述。

1.1?hMLH1與hMSH2的生物學(xué)特性

保護(hù)基因組完整性的關(guān)鍵分子途徑之一是DNA錯配修復(fù)（MMR）途徑，遺傳穩(wěn)定性對生物的生存和維持至關(guān)重要。DNA錯配修復(fù)是一種辨別和糾正DNA拷貝和重組過程中或許呈現(xiàn)的堿基配對的差錯，以及修復(fù)某些形式的DNA損傷的系統(tǒng)??。MMR基因核心蛋白主要是?MLHI和?MSH2，它們編碼的一系列蛋白質(zhì)在維系基因組不變性中發(fā)揮重要價值，而?hMLH1與?hMSH2是?MMR的核心蛋白，?hMLH1是人類錯配修復(fù)（?MMR）基因之一，位于染色體3?q21-23，通過與其它修復(fù)蛋白完成異質(zhì)二聚體完成去除、啟動、辨別錯配的?DNA片斷，合成新的正確?DNA片段而完成修復(fù)過程。

1.2?hMLH1、MSH2與腫瘤的關(guān)系

MMR是用于校正錯誤的系統(tǒng)，其中不正確的堿基被合并到子鏈中，MMR對于基因組的不變性、經(jīng)過修復(fù)堿基配對錯誤、插入缺失循環(huán)以及?DNA拷貝和重組過程中產(chǎn)生的異質(zhì)性來提高基因組保真度是必不可少的。dMMR（錯配修復(fù)基因缺陷）和PMMR?（錯配修復(fù)基因完整）是錯配修復(fù)基因表達(dá)的兩種狀態(tài)。雖然許多MMR基因與腫瘤易感性有關(guān)，但hMLH?1和hMSH2是腫瘤細(xì)胞中最常見的突變基因。

2.1?survivin生物學(xué)特性

Survivin由?BIR5（桿狀病毒IAP重復(fù)序列含5）?IAP（凋亡抑制蛋白）重復(fù)序列5基因編碼的，是 IAP家族的最新成員，它是迄今為止8個?IAP蛋白中最小最強(qiáng)的一個，含有一個桿狀病毒?IAP重復(fù)序列，Survivin啟動子沒有?TATA盒，具有豐富的?GC序列。Survivin在胞漿和線粒體中發(fā)揮促增殖抑凋亡的作用，凋亡應(yīng)激被激活后，Survivin從線粒體被送達(dá)到胞漿，與?HBXIP（乙肝?X-相互作用蛋白）和?XIAP（?X-連鎖凋亡抑制蛋白）相互結(jié)合，從而抑制?caspase并賦予細(xì)胞保護(hù)作用，。

2.2?survin與腫瘤的關(guān)系

Survivin被認(rèn)為是一種潛在的抗癌干預(yù)靶點，一些Survivin抑制劑和與Survivin相關(guān)的分子治療正在發(fā)展。Survivin在發(fā)育過程中強(qiáng)烈表達(dá)，而在健康生物體中在不同組織中未表達(dá)，其在幾乎所有類型的惡性疾病（包括膀胱癌、食管癌、乳腺癌、?肺?癌、胰腺、肝、子宮內(nèi)膜癌、卵巢腫瘤和血液癌）中的表達(dá)顯著升高。

3.1?APC的生物學(xué)特性

APC基因位于人類Sq21染色體上，8635?bp約為整個cDNA編碼區(qū)長度。整個基因包含16個可以被翻譯的外顯子，一共包含21個外顯子。研究表明：APC基因在超過85%的結(jié)腸癌細(xì)胞中呈現(xiàn)出表達(dá)能力缺失或低表達(dá)的特點，并且該特點可以導(dǎo)致家族性結(jié)腸腺瘤息肉病和大腸癌的發(fā)生。APC基因失活不但存在于結(jié)直腸腫瘤初期，甚至調(diào)控整個結(jié)直腸癌發(fā)展過程。

3.2?APC與腫瘤的關(guān)系

在APC的突變中，多于90%的突變導(dǎo)致非正常終止密碼子的產(chǎn)生，從而產(chǎn)生無活性C端缺失的突變體。?APC野生型基因產(chǎn)物與短截的?APC蛋白可以經(jīng)過相互影響而產(chǎn)生一種負(fù)顯性效應(yīng)，使其基本細(xì)胞生理學(xué)的發(fā)生變化，導(dǎo)致細(xì)胞分化、增殖、凋亡調(diào)控、黏附、生長、和細(xì)胞內(nèi)信號等功能的紊亂，使細(xì)胞發(fā)生癌變。有研究表明?APC作為?Wnt/β-?catenin細(xì)胞通路的上部基因，β-?catenin穿過?Wnt信號通路在細(xì)胞增殖和分化中發(fā)揮重要作用，并與?E-鈣粘素和α-?catenin相互作用，調(diào)節(jié)細(xì)胞的粘附和生長，其突變會激活該通路下游原癌基因?Survivin的表達(dá)，survivin會抑制細(xì)胞凋亡，從而導(dǎo)致結(jié)腸惡性疾病的發(fā)生。

6.結(jié)語

近幾年來，隨著對基礎(chǔ)研究進(jìn)展的逐漸深透，與臨床聯(lián)系也越來越緊密，針對結(jié)腸癌在細(xì)胞通路、細(xì)胞周期、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)和血管生成等分子特異性靶向治療中提供了新方向，通過了解研究這些基因的生物特性及與腫瘤的關(guān)系，為臨床找到了四個潛在的靶基因奠定了理論基礎(chǔ)，為臨床上醫(yī)治結(jié)腸 腫瘤提出了新的靶標(biāo)。

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