AEYLR小肽修飾的紫杉醇納米結構脂質載體的制備及抗腫瘤效果評價

韓翠艷 周建文 劉暢 馬曉星 袁橙 董巖 金珊珊

摘 要 目的：制備序列為丙氨酸-谷氨酸-酪氨酸-亮氨酸-精氨酸（簡稱為“AEYLR”）的小肽修飾的紫杉醇（PTX）納米結構脂質載體（A-P-NLC），并對其體內外抗腫瘤效果進行評價。方法：采用熔融乳化-低溫固化法制備納米結構脂質載體（NLC）、PTX納米結構脂質載體（P-NLC）和A-P-NLC，表征其外觀形態、粒徑、多分散指數（PDI）、Zeta電位，并檢測其包封率、載藥量及體外釋放度；以NCI-H1299細胞和S180細胞為對象，采用CCK-8法對游離PTX、P-NLC、A-P-NLC（0.44～44.00 μg/mL，以PTX計）的細胞抑制作用進行考察，并計算其半數抑制濃度（IC50）；以S180荷瘤小鼠為模型動物，對游離PTX、P-NLC、A-P-NLC（5 mg/kg，以PTX計）的抑瘤效果進行評價。結果：P-NLC和A-P-NLC外觀均呈類圓形、分布均勻；A-P-NLC的粒徑、PDI、Zeta電位分別為（43.92±0.76）nm、0.203±0.034、（-19.77±1.16）mV，較P-NLC有所增加；A-P-NLC的包封率、載藥量分別為（95.71±0.68）%、（1.97±0.25）%，較P-NLC有所降低；A-P-NLC在48 h內累積釋放百分率達（35.17±2.08）%，較游離PTX表現出明顯的緩釋作用，且比P-NLC的釋放更緩慢。與游離PTX和P-NLC比較，相同質量濃度的A-P-NLC對NCI-H1299細胞和S180細胞的抑制率大部分均顯著升高，IC50值均顯著降低；A-P-NLC給藥處理的S180荷瘤小鼠無死亡現象，一般狀態良好，且瘤體積顯著縮小、瘤質量顯著降低、瘤質量抑制率顯著升高（P<0.05或P<0.01）。結論：A-P-NLC具有明顯的緩釋作用，其對NCI-H1299細胞和S180細胞的體外抑制作用以及對小鼠S180實體瘤的抑制作用均優于游離PTX和P-NLC，且毒性有所降低。

關鍵詞 AEYLR；小肽；紫杉醇；納米結構脂質載體；抗腫瘤；小鼠

Preparation of Small Peptide AEYLR Modified Paclitaxel Nanostructured Lipid Carriers and Evaluation of Its Anti-tumor Effects

HAN Cuiyan1，ZHOU Jianwen2，LIU Chang1，MA Xiaoxing1，YUAN Cheng1，DONG Yan1，JIN Shanshan3（1. School of Pharmacy， Qiqihar Medical College， Heilongjiang Qiqihar 161006， China； 2. School of Pharmacy， Jiamusi University， Heilongjiang Jiamusi 154007， China； 3. Dept. of Preparation， Beijing Wanquan Dezhong Pharmaceutical Technology Co.， Ltd.， Beijing 102299， China）

ABSTRACT OBJECTIVE： To prepare Paclitaxel（PTX）nanostructured lipid carriers （NLC） modified by small peptide alanine-glutamic acid-tyrosine-leucine-arginine （AEYLR）， and to evaluate its anti-tumor effect in vitro and in vivo. METHODS： NLC， PTX-NLC （P-NLC） and AEYLR modified P-NLC （A-P-NLC） were prepared by emulsion evaporation-low temperature solidification curing method. Its appearance， particle size， multi-dispersion index（PDI） and Zeta potential were characterized，encapsulation rate，drug loading and in vitro drug release were detected respectively. Using NCI-H1299 and S180 cells as objects， CCK-8 method was adopted to investigate inhibitory effects of free PTX， P-NLC and A-P-NLC （0.44-44.00 μg/mL， by PTX） to those cells. The half inhibition concentration （IC50） was calculated. Using S180 tumor-bearing mice as model animal， anti-tumor effects of free PTX， P-NLC and A-P-NLC （5 mg/kg， by PTX） were evaluated. RESULTS： P-NLC and A-P-NLC were round-like and dispersed evenly. The particle size， PDI and Zeta potential of A-P-NLC were （43.92±0.76） nm，

0.203±0.034 and （-19.77±1.16） mV， which were all increased to certain extent， compared with P-NLC. The encapsulation efficiency and drug loading of A-P-NLC were （95.71±0.68）% and（1.97±0.25）%， which were both decreased to certain extent， compared with P-NLC. The cumulative release rate of A-P-NLC was（35.17±2.08）% within 48 h， showing significant sustained-release effect compared with free PTX； the release of A-P-NLC was slower than P-NLC. Compared with free PTX and P-NLC， inhibitory rates of same concentration of A-P-NLC to NCI-H1299 cells and S180 cells were almost increased significantly， while IC50 values were all decreased significantly. There was no death in S180 tumor-bearing mice treated with A-P-NLC and the general condition was good； the volume of tumors was significantly reduced， the mass of tumors was significantly reduced， and the inhibition rate of tumors was significantly increased （P<0.05 or P<0.01）. CONCLUSIONS： A-P-NLC has significantly sustained-release effects； its inhibitory rate to NCI-H1299 cells and S180 cells in vitro， and its inhibitory effects on S180 solid tumor in mice are all better than free PTX and P-NLC， while the toxicity is decreased to certain extent.

KEYWORDS AEYLR； Small peptide； Paclitaxel； Nano- structured lipid carriers； Anti-tumor； Mice

紫杉醇（Paclitaxel，PTX）是從紅豆杉中提取的一種四環二萜類化合物，在臨床上主要用于乳腺癌、卵巢癌、非小細胞肺癌等的一線/二線治療；其常規劑型為溶液型注射劑，但該類劑型含有的增溶劑聚氧乙烯蓖麻油會引起過敏反應，故將其制備成各種納米制劑以降低其毒性已成為研究熱點[1-4]。納米結構脂質載體（Nanostructrued lipid carriers，NLC）是采用單甘油酯、雙甘油酯、其他類甘油酯、磷脂、鞘脂類等脂質為載體，并添加一定比例的液態油，將藥物吸附或包裹于脂質核中而形成的脂質納米給藥系統[5-6]。NLC具有良好的生物相容性，適于靜脈注射、口服等多種途徑給藥[7-8]，具有極大的潛在應用價值。序列為丙氨酸-谷氨酸-酪氨酸-亮氨酸-精氨酸（Ala-Glu-Tyr-Leu-Arg，簡稱為“AEYLR”）的小肽來自于表皮生長因子受體（EGFR）自磷酸化位點Y1173，前期研究已證明其對EGFR高表達的腫瘤具有良好的體內外靶向性[9-10]。為降低抗腫瘤藥物的毒性并提高其靶向性，本課題組將PTX制成AEYLR小肽修飾的NLC（簡稱為“A-P-NLC”），對其進行表征，并對其體內外抗腫瘤效果進行評價，為PTX抗腫瘤制劑的進一步開發提供實驗基礎。

1 材料

1.1 儀器

AL204型電子天平[梅特勒-托利多儀器（上海）有限公司]；DF-101S型集熱式恒溫加熱磁力攪拌器（鞏義市予華儀器有限責任公司）；HT7700型透射電子顯微鏡（日本Hitachi公司）；Zetasizer Nano-ZS90型納米粒徑電位分析儀（英國Malvern公司）；ZHWY-200D型恒溫培養振蕩器（上海智城分析儀器有限公司）；2695型高效液相色譜儀（美國Waters公司）；5804R型臺式高速大容量離心機（德國Eppendorf公司）；3111型細胞培養箱（美國Thermo Fisher Scientific 公司）；Tecan Safire 2型酶標儀（瑞士Tecan公司）；ARZ型電子數顯游標卡尺（寧波市魯匠工具有限公司）；MD44MM透析袋（美國Viskase公司，截留分子量：8 000～14 000 Da）。

1.2 藥品與試劑

PTX對照品（成都曼思特生物科技有限公司，批號：17022701，純度：≥98%）；二硬脂?；字Ｒ掖及?聚乙二醇2000-AEYLR（DSPE-PEG2000-AEYLR，廣州特立生物科技有限公司，批號：GT60304-0324-A，純度：≥90%）；CCK-8試劑盒（碧云天生物技術有限公司，批號：20332）；山崳酸甘油酯（ATO，法國Gattefossé公司）；單硬脂酸甘油酯（GMS，馬來西亞KLK公司）；中鏈三酰甘油（MCT，北京鳳禮精求商貿有限公司）；聚氧乙烯35蓖麻油（ELP）、聚乙二醇-15-羥基硬脂酸酯（HS15）（德國BASF 公司）；RPMI 1640培養基、胎牛血清（美國Gibco公司）；聚山梨酯80（美國Sigma公司）；pH 7.4磷酸鹽緩沖液（PBS，由北京酷來博科技有限公司的固體粉末產品用超純水配制）；乙腈為色譜純，其余試劑均為分析純或實驗室常用規格，水為純化水或超純水。

1.3 細胞

人非小細胞肺癌細胞NCI-H1299、小鼠腹水瘤細胞S180均購自中國科學院典型培養物保藏委員會細胞庫。

1.4 動物

SPF級昆明小鼠50只（雌性30只、雄性20只），體質量18～22 g，購于哈爾濱醫科大學實驗動物學部，生產許可證號：SCXK（黑）2013-001。所有動物均飼養于SPF級實驗室，環境溫度為18～22 ℃、濕度為50%～60%，飼喂清潔級真空包裝小鼠飼料。

2 方法與結果

2.1 不同NLC樣品制備

采用熔融乳化-低溫固化法進行制備。稱取ATO 40 mg、GMS 13 mg、MCT 27 mg、ELP 54 mg作為油相，另稱取/量取HS15 54 mg、水4 mL作為水相，將油相和水相分別置于80 ℃水浴中熔融或溶解；在恒溫磁力攪拌下，將油相緩慢滴入水相，待滴加完成，繼續乳化10 min；隨后將油水混合物迅速置于冰水浴中固化15 min，再分別經0.45 μm、0.22 μm微孔濾膜濾過后，即得NLC溶液。另外，先單獨將5 mg/mL的PTX無水乙醇溶液200 μL（揮干乙醇）或與DSPE-PEG2000-AEYLR 8 mg同時加入上述油相中，再按同樣的操作方法分別制得PTX納米結構脂質載體（P-NLC）溶液和修飾有AEYLR小肽的PTX納米結構脂質載體（A-P-NLC）溶液。3種NLC樣品溶液均顯藍色乳光。

2.2 P-NLC和A-P-NLC的表征

2.2.1 外觀形態 取“2.1”項下制備的P-NLC、A-P-NLC樣品溶液適量，以水稀釋10倍后用磷鎢酸負染，在電鏡下觀察。結果，兩者外觀均呈類圓形、大小均一，詳見圖1。

2.2.2 粒徑、粒度及電位 取“2.1”項下制備的P-NLC、A-P-NLC樣品溶液適量，用水稀釋50倍，采用納米粒徑電位分析儀測定其粒徑、粒度分布及Zeta電位。試驗均重復3次。結果，P-NLC的粒徑為（39.56±1.22）nm，多分散指數（PDI）為0.161±0.026，Zeta電位為（-16.34±0.85）mV；A-P-NLC的上述指標或其絕對值均有增加，分別為（43.92±0.76）nm、0.203±0.034、（-19.77±1.16）mV。P-NLC和A-P-NLC的粒徑與Zeta電位分布見圖2。

2.3 包封率和載藥量

采用高效液相色譜（HPLC）法測定PTX含量。色譜條件：色譜柱為Diamonsil C18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動相為乙腈-水（55 ∶ 45，V/V）；流速為1 mL/min；柱溫為 25 ℃；檢測波長為227 nm；進樣量為20 μL[11]。精密稱取PTX對照品適量，以流動相制成質量濃度分別為5.0、10.0、25.0、50.0、100.0 μg/mL的系列標準溶液，按上述色譜條件測定；以PTX的峰面積（A）對質量濃度（c， μg/mL）進行線性回歸，得標準曲線方程為A=0.558 5c+0.910 7（r=0.999 8）。結果表明，PTX的質量濃度在5.0～100.0 μg/mL范圍內線性關系良好。

采用超濾離心法[12]測定樣品的載藥量和包封率。取“2.1”項下制備的P-NLC樣品溶液適量，置于超濾離心管（截留分子量：10 kDa，下同）中，10 000 r/min離心40 min，收集下清液，經甲醇適當稀釋后，按上述色譜條件進樣測定，得游離藥物含量（W游離）；另取P-NLC樣品溶液適量，置于離心管中，經乙腈破乳后，3 000 r/min 離心20 min，取上清液，按上述HPLC色譜條件進樣測定，得總藥物含量（W總）。按照公式計算P-NLC的載藥量（DL）和包封率（EE）：DL（%）=（W總-W游離）/W脂質×100%，EE（%）=（W總-W游離）/W總×100%；式中，W脂質為處方中液態脂質和固態脂質的總量[13]。另取“2.1”項下制備的A-P-NLC樣品溶液適量，同法測定。試驗均重復3次。結果，P-NLC和A-P-NLC的載藥量分別為（99.13±0.86）%、（95.71±0.68）%，包封率分別為（2.33±0.15）%、（1.97±0.25）%，A-P-NLC的載藥量和包封率較P-NLC均有所降低。

2.4 體外釋放度

取游離PTX和“2.1”項下制備的P-NLC和A-P-NLC樣品溶液適量，采用透析法[13]模擬藥物釋放過程，設置截留分子量為10 kDa、釋放介質為含0.2%聚山梨酯80的PBS，于0、2、4、6、8、10、12、24、48 h時取樣，按“2.3”項下HPLC法測定PTX質量濃度，考察其體外釋放度，并按公式計算累積釋放百分率：累積釋放百分率（%）=[V0×Ct+V（C1+C2+C3+……+Ct-1）]/m×100%，其中，m是加入制劑含藥總量，V是每次取樣體積，V0是釋放介質的總體積，C1、C2、C3……Ct分別是第1、2、3……t取樣時間點的濃度。試驗均重復3次。結果顯示，游離PTX在12 h時的累積釋放率已達到（90.00±2.33）%，而P-NLC、A-P-NLC在48 h時的累積釋放百分率分別為（43.05±3.74）%、（35.17±2.08）%；與游離PTX比較，P-NLC和A-P-NLC均表現出明顯的緩釋作用，且A-P-NLC較P-NLC的釋放更緩慢，詳見圖3。

2.5 不同樣品對NCI-H1299細胞和S180細胞的抑制作用考察

2.5.1 NLC的細胞抑制作用 采用CCK-8法進行檢測。取對數生長期的NCI-H1299細胞進行消化計數后接種于96孔板中（1×104個/孔），在37 ℃、5%CO2（以下培養條件同）的培養箱中培養24 h。棄去孔中培養基（即含10%胎牛血清的RPMI 1640培養基，以下同），分為對照組（細胞+培養基）和不同質量濃度的NLC試驗組（細胞+終質量濃度分別為22、220、2 200、22 000 μg/mL的NLC，分別相當于0.11、1.10、11.00、110.00 μg/mL PTX的載體量），分別加入不含藥/含藥培養基100 μL，每組設置6個孔。劑量均根據預試驗結果設置。各組細胞培養48 h后，每孔加入CCK-8溶液10 μL，混勻后繼續培養4 h。采用酶標儀于450 nm波長處測定各孔光密度（OD）。按照公式計算細胞存活率：細胞存活率（%）=ODNLC試驗組/OD對照組×100%。另取對數生長期的S180細胞，同法測定NLC作用后的細胞存活率。結果顯示，經不同質量濃度的NLC作用后，NCI-H1299細胞和S180細胞的存活率均在83%以上，未表現出明顯細胞抑制作用，表明NLC對上述兩種細胞的毒性均較小，詳見圖4。

2.5.2 不同PTX樣品的細胞抑制作用 按“2.5.1”項下方法取細胞接種并培養，分為對照組（細胞+培養基）和各藥物組（細胞+游離PTX或P-NLC或A-P-NLC的含藥培養基，所含PTX的終質量濃度均分別為0.44、1.10、4.40、11.00、44.00 μg/mL）；另設不含細胞的空白組（培養基），每組設置6個孔。劑量均根據預試驗結果設置。按照“2.5.1”項下方法培養并測定各孔OD值，并按公式計算細胞抑制率：細胞抑制率（%）=（OD藥物組-OD空白組）/（OD對照組-OD空白組）×100%。采用SPSS 17.0軟件進行統計分析，數據以x±s表示，多組間比較采用單因素方差分析，兩組間比較采用t檢驗（P<0.05為差異有統計學意義）；同時，計算藥物的半數抑制濃度（IC50）。

結果顯示，當PTX質量濃度為0.44～44.00 μg/mL時，各樣品對兩種細胞的抑制率隨著PTX濃度增加而呈升高趨勢，表明不同PTX樣品對兩種細胞的抑制作用均具有劑量依賴趨勢；與游離PTX比較，在相同質量濃度的P-NLC和A-P-NLC作用下，兩種細胞的抑制率均顯著升高，IC50值均顯著降低；與P-NLC比較，在相同質量濃度的A-P-NLC作用下（除1.10 μg/mL外），兩種細胞的抑制率均顯著升高，IC50值均顯著降低。以上差異均有統計學意義（P<0.05或P<0.01），詳見圖5、表1。

2.6 A-P-NLC的體內抗腫瘤實驗

2.6.1 S180荷瘤小鼠模型建立 取對數生長期的S180細胞，以4 ℃生理鹽水漂洗并調節細胞濃度至1×107個/mL，按200 μL/只接種于小鼠（雌性10只）的腹腔[14]。4～5 d后可見小鼠腹部凸起、明顯增大，此時取其S180腹水瘤細胞用于傳代[13]。傳至第3代后，抽取腹水瘤模型小鼠的腹水，以4 ℃生理鹽水漂洗并調節細胞濃度至1×108個/mL，另取小鼠（雌雄各20只），按200 μL/只注射至其腋窩皮下，并觀察其腋窩處實體瘤形成情況。當小鼠腋窩處出現小的突起且觸摸有硬結感時，即為荷瘤造模成功。

2.6.2 A-P-NLC的體內抗腫瘤作用考察 取“2.6.1”項下造模成功的荷瘤小鼠32只，隨機分為對照組、游離PTX組、P-NLC組、A-P-NLC組，每組8只。各組小鼠均尾靜脈給藥100 μL/次，隔天1次，連續8次。除對照組給予生理鹽水外，各給藥組的給藥劑量均以5 mg/kg PTX計算，劑量根據預試驗結果設置。每天觀察小鼠一般狀態，并測量其體質量；以游標卡尺測量腫瘤垂直方向上的長徑（a）和短徑（b），計算腫瘤體積（V=ab2/2）[15]；末次給藥24 h后處死小鼠，剖取腫瘤，稱定瘤質量，并按公式計算瘤質量抑制率：瘤質量抑制率（%）=（1-給藥組瘤質量/對照組瘤質量）×100%[16]。統計學方法同“2.5.2”項。

結果顯示，給藥期間，對照組小鼠腫瘤增長速度快，前期進食和飲水量正常、毛發光亮，后期隨著腫瘤變大，其活動變遲緩、毛發變得不光亮，有1只小鼠死亡；游離PTX組小鼠出現躁動、尖叫等現象，精神狀態不佳，毛發不光亮，食欲減退，活動量減少，有3只小鼠死亡；P-NLC組、A-P-NLC組小鼠狀態較好，毛發光亮，進食和飲水量正常，其中P-NLC組有1只小鼠死亡。對照組和游離PTX組小鼠體質量增長較慢，而P-NLC組和A-P-NLC組小鼠體質量增長明顯，詳見圖6。

各組小鼠瘤體積均隨時間延長而呈增加趨勢；與對照組比較，各給藥組小鼠自給藥3 d時起瘤體積均顯著縮小，P-NLC組和A-P-NLC組小鼠在末次給藥后24 h時瘤質量均顯著降低；與游離PTX組比較，P-NLC組和A-P-NLC組小鼠分別自給藥7、5 d時起瘤體積顯著縮小，在末次給藥后24 h時瘤質量顯著降低、瘤質量抑制率顯著升高；與P-NLC組比較，A-P-NLC組小鼠自給藥7 d時起瘤體積顯著縮小，在末次給藥后24 h時瘤質量顯著降低、瘤質量抑制率顯著升高。以上差異均有統計學意義（P<0.05或P<0.01）

3 討論

經PEG修飾的NLC可通過“高滲透、長滯留”效應被動靶向進入腫瘤組織，即通過腫瘤微血管的空隙滲漏進入腫瘤組織，但進入腫瘤組織的NLC因其表面修飾有PEG故親水性增強，會使其跨膜進入細胞受到影響；AEYLR小肽對EGFR具有特異的靶向性，可使連接有AEYLR的NLC對EGFR高表達的細胞及腫瘤組織具有主動靶向作用，同時還可通過EGFR受體介導腫瘤細胞對NLC的內吞，提高NLC的入胞量[9-10]。

DSPE-PEG2000-AEYLR是AEYLR通過PEG末端活化技術連接在DSPE-PEG2000末端的產物。本研究采用熔融乳化-低溫固化法制備A-P-NLC，在乳化過程中DSPE-PEG2000-AEYLR結構中的親水部分PEG2000- AEYLR存在于乳滴表面，而在低溫固化后AEYLR部分即被修飾到了P-NLC的表面。與P-NLC比較，A-P-NLC在制備過程中加入了DSPE-PEG2000-AEYLR，增加了NLC表面PEG的量，導致粒徑、粒度分布及Zeta電位絕對值均有所增長，同時空間位阻的增加使其包封率和載藥量略有降低；二者的體外釋放行為相似，均有緩釋效果，但A-P-NLC的緩釋效果更為明顯，可能是由于DSPE-PEG2000-AEYLR的加入使P-NLC的結構變得更加穩定，從而使藥物釋放更緩慢。

本研究選擇EGFR高表達的人非小細胞肺癌細胞系NCI-H1299和鼠源S180細胞系[17-18]作為模型細胞，主要考察了A-P-NLC對兩種腫瘤細胞的體外抑制效果。結果顯示，與游離PTX和P-NLC比較，加入了具有主動靶向作用的AEYLR后，A-P-NLC顯示出更強的體外腫瘤細胞抑制效果。而進一步采用S180細胞建立小鼠荷瘤模型并進行體內抑瘤作用考察的結果顯示，與游離PTX組和P-NLC組比較，A-P-NLC組小鼠的瘤體積、瘤質量均顯著縮小或降低，瘤質量抑制率均顯著升高；另外，游離PTX組有3只小鼠由于PTX的長期毒性而死亡，而P-NLC組與A-P-NLC組小鼠死亡情況減少，且體質量較游離PTX組顯著增長，提示PTX制成NLC后可減小藥物的毒副作用，提高用藥安全性。

綜上，A-P-NLC具有明顯的緩釋作用，其對NCI- H1299細胞和S180細胞的體外抑制作用以及對小鼠S180實體瘤的抑制作用均優于游離PTX和P-NLC，且毒性有所降低。

參考文獻

[ 1 ] CHOI H，LIU T，QIAO H，et al. Biomimetic nano-surfactant stabilizes sub-50 nanometer phospholipid particles enabling high paclitaxel payload and deep tumor penetration[J]. Biomaterials，2018. DOI：10.1016/j.biomaterials.2018.

07.034.

[ 2 ] TUTEJA M，KANG M，LEAL C，et al. Nanoscale partitioning of paclitaxel in hybrid lipid-polymer membranes[J]. Analyst，2018，143（16）：3808-3813.

[ 3 ] ZHAI J，LUWOR RB，AHMED N，et al. Paclitaxel-loaded self-assembled lipid nanoparticles as targeted drug delivery systems for the treatment of aggressive ovarian cancer[J]. ACS Appl Mater Interfaces，2018，10（30）：25174- 25185.

[ 4 ] 王子琪，王狄獅，李馨儒，等.紫杉醇的pH敏感聚合物膠束的制備及其體外釋放研究[J].中國新藥雜志，2018，27（4）：459-464.

[ 5 ] PARDEIKE J，HOMMOSS A，MüLLER RH. Lipid na- noparticles（SLN，NLC）in cosmetic and pharmaceutical dermal products[J]. Int J Pharm，2009，366（1/2）：170-184.

[ 6 ] CHAKRABORTY S，SHUKLA D，MISHRA B，et al. Lipid：an emerging platform for oral delivery of drugs with poor bioavailability[J]. Eur J Pharm Biopharm，2009，73（1）：1-15.

[ 7 ] FENG L，MUMPER RJ. A critical review of lipid-based nanoparticles for taxane delivery[J]. Cancer Lett，2013，334（2）：157-175.

[ 8 ] LIN X，GAO R，ZHANG Y，et al. Lipid nanoparticles for chemotherapeutic applications：strategies to improve anticancer efficacy[J]. Expert Opin Drug Deliv，2012，9（7）：767-781.

[ 9 ] HAN C，YUE L，TAI L，et al. A novel small peptide as an epidermal growth factor receptor targeting ligand for nanodelivery in vitro[J]. Int J Nanomedicine，2013. DOI：10.2147/IJN.S43627.

[10] HAN C，LI Y，SUN M，et al. Small peptide-modified nanostructured lipid carrier distribution and targeting to EGFR overexpressing tumor in vivo[J]. Artif Cells Nanomed Biotechnol，2014，42（3）：161-166.

[11] 靳彩玲，趙樹鵬，張敏，等.轉鐵蛋白修飾紫杉醇脂質體的制備及其抑瘤作用[J].中國藥房，2016，27（1）：44-47.

[12] WANG W，CHEN L，HUANG X，et al. Preparation and characterization of minoxidil loaded nanostructured lipid carrier[J]. AAPS PharmSciTech，2016，18（2）：1-8.

[13] CAO J，HOU D，LU J，et al. Anti-tumor activity of exopolysaccharide from Rhizopus nigricans Ehrenb on S180 tumor-bearing mice[J]. Bioorg Med Chem Lett，2016，26（8）：2098-2104.

[14] 姜一樸，滕晉瑩，胡金芳，等.小鼠H22、S180腹水模型臨床檢查特征研究[J].藥物評價研究，2018，41（8）：1386-1390.

[15] 李學濤，程嵐，姜英，等.長春堿親水基修飾陽離子脂質體對荷瘤小鼠的抗腫瘤作用研究[J].中國藥房，2015，26（31）：4339-4341.

[16] OLERILE LD，LIU Y，BO Z，et al. Near-infrared mediated quantum dots and paclitaxel co-loaded nanostructured lipid carriers for cancer theragnostic[J]. Colloids Surf B Biointerfaces，2017. DOI：10.1016/j.colsurfb.2016.11.032.

[17] LIAO H，ZHAO X，QU J，et al. Matrine suppresses invasion and metastasis of NCI-H1299 cells by enhancing microRNA-133a expression[J]. Int J Clin Exp Med，2015，8（7）：10714-10722.

[18] WANG J，CHEN S，XU S，et al. In vivo induction of apoptosis by fucoxanthin，a marine carotenoid，associated with down-regulating STAT3/EGFR signaling in sarcoma 180（S180）xenografts-bearing mice[J]. Mar Drugs，2012，10（9）：2055-2068.

（收稿日期：2018-09-28 修回日期：2019-01-22）

（編輯：段思怡）