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蜈蚣草全草石油醚部位的化學成分研究

2019-09-10 07:22:44侯遠鑫侯淑芬高榮敏陳家藝幸問月涂星
中國藥房 2019年6期

侯遠鑫 侯淑芬 高榮敏 陳家藝 幸問月 涂星

摘 要 目的:研究蜈蚣草全草石油醚部位的化學成分。方法:采用硅膠柱色譜、凝膠柱色譜、重結晶和薄層色譜法對蜈蚣草全草石油醚部位的化學成分進行分離純化,根據理化性質、氫譜和碳譜數據鑒定化合物結構。結果:從蜈蚣草全草石油醚部位分離、鑒定得到11個化合物,分別為(2R)-acetyl pterosin B(Ⅰ)、十六烷酸(Ⅱ)、何帕-22(29)-烯(Ⅲ)、表木栓醇(Ⅳ)、羽扇豆酮(Ⅴ)、齊墩果-18-烯-3-酮(Ⅵ)、豆甾醇(Ⅶ)、β-谷甾醇(Ⅷ)、22-羥基何帕烷(Ⅸ)、麥角甾醇(Ⅹ)、β-谷甾醇乙酸酯(Ⅺ)。結論:化合物Ⅰ~Ⅶ和Ⅸ~Ⅺ為首次從該植物中分離得到,可為深入研究蜈蚣草的生物活性藥效物質基礎、豐富其化學成分研究資料提供理論依據。

關鍵詞 蜈蚣草;石油醚部位;化學成分;何帕-22(29)-烯;齊墩果-18-烯-3-酮;22-羥基何帕烷

Study on Chemical Constituents of Petroleum Ether Part from Whole Herbs of Pteris vittata

HOU Yuanxin1,HOU Shufen2,GAO Rongmin1,CHEN Jiayi1,XING Wenyue1,TU Xing3(1. Dept. of Pharmacy, the Affiliated Minda Hospital of Hubei Minzu University, Hubei Enshi 445000, China; 2. Dept. of Critical Care Medicine, Chongqing Three Gorges Central Hospital, Chongqing 404000, China; 3. College of Medical Science, Hubei Minzu University, Hubei Enshi 445000, China)

ABSTRACT OBJECTIVE: To study the chemical constituents from the petroleum ether part from whole herbs of Pteris vittata. METHODS: The petroleum ether part from whole herbs of P. vittata was separated and isolated by silica gel column, gel column, recrystallization and TLC. The structures of the compounds were identified according to physicochemical properties and spectrum data (1H-NMR and 13C-NMR). RESULTS: A total of 11 compounds were isolated and identified from the petroleum ether part from whole herbs of P. vittata, as (2R)-acetyl pterosin B (Ⅰ), palmitic acid (Ⅱ), hop-22(29)-ene (Ⅲ), epifriedelanol (Ⅳ), lupenone (Ⅴ), olean-18-en-3-one (Ⅵ), stigmasterol (Ⅶ), β-sitosterol (Ⅷ), 22-hydroxyhopane (Ⅸ), ergosterol (Ⅹ), β-sitosterol acetate (Ⅺ). CONCLUSIONS: Compounds Ⅰ-Ⅶ and Ⅸ-Ⅺ are isolated from this plant for the first time, and can provide theoretic reference for further studying bioactive pharmacodynamic substances in P. vittata and enriching chemical component data.

KEYWORDS Pteris vittata; Petroleum ether part; Chemical constituents; Hop-22(29)-ene; Olean-18-en-3-one; 22-hydr- oxyhopane

蜈蚣草(Pteris vittata L.)系鳳尾蕨科(Pteridaceae)鳳尾蕨屬(Pteris L.)植物,別名百足草、蜈蚣蕨、舒筋草等,廣泛分布于我國熱帶和亞熱帶地區,尤其是廣東和廣西地區,常以全草入藥[1]。蜈蚣草具有清熱解毒、消腫止痛、舒筋活絡的功效,臨床上主要用來治療蜈蚣咬傷、痢疾、風濕疼痛、跌打損傷、疥瘡等癥[1-2]。蜈蚣草中主要含有黃酮類和有機酸類成分,其中黃酮類成分為芹菜素、木犀草素、芹菜素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、山柰素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、木犀草素-7,3′,4′-三甲醚、3′-甲氧基木犀草素、7-羥基-8-甲氧基香豆素、柯伊利素-7-O-β-D-吡喃葡萄糖苷、紫云英苷等[2-3],其中山柰素-3-O-β-D-吡喃葡萄糖苷具有一定的乙酰膽堿酯酶抑制活性[2];分離鑒定的有機酸類成分為對羥基苯甲酸,具有較好的抗菌活性[3]。作為嶺南地區特色中草藥,蜈蚣草的民間應用廣泛、療效顯著,但現有學成分研究還相對較少,尚無法為其開發應用提供較好的理論支持。為此,筆者對蜈蚣草95%乙醇提取物的石油醚部位進行了較為系統的化學成分研究,以期為蜈蚣草的臨床應用及藥理活性研究提供參考。

1 材料

1.1 儀器

Bruker AVANCE Ⅲ 500MHz型核磁共振儀(德國Bruker公司);Agilent 6460三重四極桿液質聯用儀(美國Agilent公司);XT4雙目體視顯微熔點測定儀(北京泰克儀器有限公司);RV3型旋轉蒸發儀(德國IKA公司);ME104型分析天平(瑞士Mettler- Toledo公司)。

1.2 藥材

蜈蚣草全草(批號:20130101)于2013年9月由湖北民族大學附屬民大醫院侯遠鑫主管藥師采自于廣西壯族自治區南寧市興寧區,經湖北民族大學醫學院文德鑒副教授鑒定為鳳尾蕨科(Pteridaceae)鳳尾蕨屬(Pteris L.)蜈蚣草(Pteris vittata L.)的全草。

1.3 試劑

柱色譜硅膠(100~200目、200~300目、300~400目,批號分別為0150054、0140138、0140027)、薄層色譜GF254預制板(批號:20150406)均由青島海洋化工有限公司提供;Sephadex LH-20凝膠(25~100 μm,批號:10033549,美國Amersham Biosciences公司);β-谷甾醇標準品(中國食品藥品檢定研究院,批號:110851- 201407,純度:98.0%);甲醇、乙腈均為色譜純,石油醚(60~90 ℃)、氯仿、乙酸乙酯等試劑均為化學純,水為純化水。

2 提取與分離

取蜈蚣草的干燥全草6 kg,粉碎成粗粉后用95%乙醇(20 L)加熱回流提取3次,每次2 h。合并提取液,減壓回收,得黑色總浸膏470 g。將總浸膏充分混懸于純化水2.0 L中,依次用石油醚(6.0 L)、乙酸乙酯(6.0 L)和正丁醇(6.0 L)萃取,相同部位萃取液并減壓回收,得各部位的萃取物。取石油醚部位萃取物105 g,經常壓硅膠柱色譜分離,以石油醚-乙酸乙酯(100 ∶ 1、50 ∶ 1、40 ∶ 1、30 ∶ 1、20 ∶ 1、10 ∶ 1、5 ∶ 1、2 ∶ 1,V/V)梯度洗脫,經薄層色譜法鑒別后合并,共得到8個主要流份(Fr.1~Fr.8)。其中,Fr.2(6.5 g)依次經常壓硅膠柱色譜(石油醚-丙酮,60 ∶ 1、40 ∶ 1、30 ∶ 1、20 ∶ 1、10 ∶ 1、5 ∶ 1、 2 ∶ 1、1 ∶ 1,V/V)梯度洗脫和Sephadex LH-20凝膠柱色譜(氯仿-甲醇,1.5 ∶ 1,V/V)等度洗脫分離得到化合物Ⅰ(11 mg)和化合物Ⅱ(130 mg);Fr.3(1.9 g)依次經常壓硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯,40 ∶ 1、30 ∶ 1、20 ∶ 1、10 ∶ 1、5 ∶ 1, V/V)梯度洗脫和Sephadex LH-20凝膠柱色譜(氯仿-甲醇,1.5 ∶ 1,V/V)等度洗脫分離,最后通過氯仿重結晶和制備薄層色譜法(氯仿-甲醇,25 ∶ 1,V/V)得到化合物Ⅲ(39 mg)和化合物Ⅳ(22 mg);Fr.4(7.1 g)依次經常壓硅膠柱色譜(石油醚-丙酮,40 ∶ 1、30 ∶ 1、20 ∶ 1、15 ∶ 1、10 ∶ 1、5 ∶ 1,V/V)梯度洗脫、Sephadex LH-20凝膠柱色譜(氯仿-甲醇, 1.5 ∶ 1,V/V)等度洗脫和氯仿重結晶分離純化得到化合物Ⅴ(8 mg)、化合物Ⅵ(15 mg)、化合物Ⅶ(62 mg)、化合物Ⅷ(200 mg);Fr.5(4.6 g)首先經Sephadex LH-20凝膠柱色譜(氯仿-甲醇,1 ∶ 1,V/V)等度洗脫除去大部分色素,然后再依次采用常壓硅膠柱色譜(石油醚-乙酸乙酯,20 ∶ 1、15 ∶ 1、10 ∶ 1、 5 ∶ 1、2 ∶ 1、1 ∶ 1,V/V)等度梯度洗脫和重結晶法(氯仿-甲醇,1 ∶ 1,V/V)得到化合物Ⅸ(19 mg)、化合物Ⅹ(31 mg)、化合物Ⅺ(40 mg)。

3 結構鑒定

共分離、鑒定出11個成分,其結構見圖1。

化合物Ⅰ:淡黃色油狀液體(氯仿),分子式:C16H20O3,熔點:165~167 ℃,電噴霧質譜(ESI-MS):m/z 261[M+H]+。1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ:7.05(1H,s,H-5),4.12(3H,t,J=7.4 Hz,H-12),3.01(2H,t,J=7.4 Hz,H-13),2.43(2H,s,H-14),2.37(3H,s,H-10),2.01(3H,s,H-16),1.23(3H,d,J=7.0 Hz,H-11)。13C-NMR(CDCl3,125 MHz)δ:209.9(C-1),43.3(C-2),34.1(C-3),125.8(C-4),144.4(C-5),134.1(C-6),138.2(C-7),132.7(C-8),153.2(C-9),21.3(C-10),16.8(C-11),28.4(C-12),63.0(C-13),13.7(C-14),171.3(C-15),21.8(C-16)。該化合物波譜數據與相關文獻[4]參考數據基本一致,故最終鑒定其為(2R)-acetyl pterosin B。

化合物Ⅱ:白色無定形粉末(氯仿),分子式:C16H32O2,熔點:58~60 ℃,ESI-MS:m/z 255[M-H]-。1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ:2.30(2H,t,J=7.1 Hz,H-2),1.59(2H,m,H-3),1.28~1.31(20H,m,H-4~13),1.26(2H,m,H-14),1.23(2H,m,H-15),0.87(3H,t,J=6.9 Hz,H-16)。13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:179.8(C-1),34.1(C-2),24.6(C-3),29.1(C-4,13),29.3(C-5,12),29.5~29.8(C-6~11),31.7(C-14),22.6(C-15),14.2(C-16)。該化合物波譜數據與相關文獻[5]參考數據基本一致,故最終鑒定其為十六烷酸。

化合物Ⅲ:無色針狀晶體(氯仿),分子式:C30H50,熔點:233~235 ℃,ESI-MS:m/z 411[M+H]+,10%硫酸乙醇反應顯紫紅色。1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ:4.77(2H,s,H-29),1.75(3H,s,H-30),0.98(3H,s,H-26),0.96(3H,s,H-27),0.85(3H,s,H-23),0.84(3H,s,H-25),0.80(3H,s,H-24),0.74(3H,s,H-28)。13C-NMR(CDCl3,125 MHz)δ:40.4(C-1),19.2(C-2),42.2(C-3),33.3(C-4,C-7),56.4(C-5),20.0(C-6),41.9(C-8),50.6(C-9),37.4(C-10),21.0(C-11),24.0(C-12),49.6(C-13),42.0(C-14),33.7(C-15),21.7(C-16),54.9(C-17),44.7(C-18),41.9(C-19),27.4(C-20),46.5(C-21),148.7(C-22),33.4(C-23),21.6(C-24),16.1(C-25),16.8(C-26),17.0(C-27),16.9(C-28),110.3(C-29),25.1(C-30)。該化合物波譜數據與相關文獻[6]參考數據基本一致,故最終鑒定其為何帕-22(29)-烯。

化合物Ⅳ:白色無定形粉末(氯仿),分子式:C30H52O,熔點:268~270 ℃,ESI-MS:m/z 427[M-H]-,10%硫酸乙醇反應顯紫紅色。1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ:3.73(1H,d,J=2.6 Hz,H-3),1.44(1H,t,J=5.1 Hz,H-18),0.99(3H,s,H-26),0.97(3H,s,H-28),0.92(3H,s,H-27),0.90(3H,s,H-24),0.89(3H,s,H-29),0.86(3H,s,H-25)。13C-NMR(CDCl3,125 MHz)δ:15.7(C-1),35.0(C-2),73.0(C-3),49.2(C-4),36.5(C-5),41.5(C-6),17.5(C-7),53.0(C-8),38.1(C-9),61.2(C-10),35.2(C-11),30.2(C-12),37.9(C-13),39.5(C-14),32.0(C-15),36.4(C-16),30.9(C-17),42.6(C-18),35.8(C-19),29.0(C-20),33.1(C-21),39.0(C-22),11.2(C-23),16.4(C-24),18.0(C-25),18.1(C-26),20.0(C-27),30.5(C-28),35.3(C-29),31.8(C-30)。該化合物波譜數據與相關文獻[7]參考數據基本一致,故最終鑒定其為表木栓醇。

化合物Ⅴ:白色無定形粉末(氯仿),分子式:C30H48O,熔點:179~181 ℃,ESI-MS:m/z 425[M+H]+,10%硫酸乙醇反應顯紫紅色。1H -NMR(CDCl3,500 MHz)δ:4.72(2H,s,H-29),1.55(3H,s,H-30),1.07(3H,s,H-26),1.01(3H,s,H-23),0.95(3H,s,H-27),0.92(3H,s,H-25),0.88(3H,s,H-28),0.75(3H,s,H-24)。13C-NMR(CDCl3,125 MHz)δ:39.4(C-1),34.5(C-2),218.0(C-3),47.0(C-4),55.1(C-5),19.8(C-6),33.5(C-7),40.5(C-8),50.3(C-9),36.8(C-10),21.1(C-11),25.0(C-12),37.0(C-13),43.0(C-14),27.3(C-15),35.6(C-16),43.1(C-17),48.0(C-18),47.5(C-19),151.3(C-20),29.7(C-21),40.9(C-22),26.5(C-23),21.0(C-24),15.8(C-25),15.5(C-26),15.1(C-27),18.0(C-28),109.0(C-29),19.5(C-30)。該化合物波譜數據與相關文獻[8]參考數據基本一致,故最終鑒定其為羽扇豆酮。

化合物Ⅵ:白色無定形粉末(氯仿),分子式:C30H48O,熔點:182~184 ℃,ESI-MS:m/z 448[M+Na]+,10%硫酸乙醇反應顯紫紅色。1H -NMR(CDCl3,500 MHz)δ:5.08(1H,s,H-19),1.12(3H,s,H-26),1.06(3H,s,H-28),1.02(3H,s,H-23),0.99(3H,s,H-29),0.96(3H,s,H-30),0.93(3H,s,H-25),0.83(3H,s,H-24),0.79(3H,s,H-27)。13C-NMR(CDCl3,125 MHz)δ:38.5(C-1),34.3(C-2),219.1(C-3),47.9(C-4),55.0(C-5),19.8(C-6),32.4(C-7),40.3(C-8),47.2(C-9),37.3(C-10),21.0(C-11),26.4(C-12),39.4(C-13),43.5(C-14),27.5(C-15),37.1(C-16),35.0(C-17),143.0(C-18),129.5(C-19),32.0(C-20),33.8(C-21),37.5(C-22),27.4(C-23),15.3(C-24),17.0(C-25),16.2(C-26),14.7(C-27),26.0(C-28),33.4(C-29),23.3(C-30)。該化合物波譜數據與相關文獻[9]參考數據基本一致,故最終鑒定其為齊墩果-18-烯-3-酮。

化合物Ⅶ:白色針狀結晶(氯仿),分子式:C29H48O,熔點:160~162 ℃,ESI-MS:m/z 411[M-H]-,10%硫酸乙醇反應顯紫紅色。1H -NMR(CDCl3,500 MHz)δ:5.12(1H,dd,J=8.5,15.3 Hz,H-22),5.00(1H,dd,J=8.5,15.4 Hz,H-23),3.49(1H,t-like,H-3)。13C-NMR(CDCl3,150 MHz)δ:37.1(C-1),31.5(C-2),71.6(C-3),42.5(C-4),140.9(C-5),122.0(C-6),40.3(C-7),31.9(C-8),50.0(C-9),36.1(C-10),20.9(C-11),39.4(C-12),42.1(C-13),56.8(C-14),22.7(C-15),28.6(C-16),56.3(C-17),12.1(C-18),21.0(C-19),40.3(C-20),19.0(C-21),138.1(C-22),129.4(C-23),51.3(C-24),29.0(C-25),19.1(C-26),20.6(C-27),24.3(C-28),11.8(C-29)。該化合物波譜數據與相關文獻[9-10]參考數據基本一致,故最終鑒定其為豆甾醇。

化合物Ⅷ:無色針狀結晶(氯仿),分子式:C29H50O,熔點:140~142 ℃,ESI-MS:m/z 413[M-H]-,10%硫酸乙醇反應顯紫紅色。與β-谷甾醇標準品薄層對照,在3種展開系統[石油醚-乙酸乙酯(10 ∶ 1,V/V)、石油醚-丙酮(10 ∶ 1,V/V)、氯仿-甲醇(15 ∶ 1,V/V)]中的比移值一致,且其與β-谷甾醇標準品混合后,熔點不下降,故最終鑒定其為β-谷甾醇。

化合物Ⅸ:白色針狀結晶(氯仿),分子式:C30H52O,熔點:227~229 ℃,ESI-MS:m/z 427[M-H]-,10%硫酸乙醇反應顯紫紅色。1H -NMR(CDCl3,500 MHz)δ:1.26(3H,s,H-30),1.15(3H,s,H-29),0.91(3H,s,H-26),0.91(3H,s,H-27),0.83(3H,s,H-23),0.80(3H,s,H-25),0.76(3H,s,H-24),0.73(3H,s,H-28)。13C-NMR(CDCl3,125 MHz)δ:40.1(C-1),18.6(C-2,C-6),42.5(C-3),33.3(C-4),56.0(C-5),33.1(C-7),42.3(C-8),50.3(C-9),37.3(C-10),19.6(C-11),24.5(C-12),49.9(C-13),42.5(C-14),34.1(C-15),22.0(C-16),54.4(C-17),44.0(C-18),41.2(C-19),24.5(C-20),51.1(C-21),74.0(C-22),28.6(C-23),21.5(C-24),15.9(C-25),17.0(C-26),17.0(C-27),16.0(C-28),42.5(C-29),29.9(C-30)。該化合物波譜數據與相關文獻[6]參考數據基本一致,故最終鑒定其為22-羥基何帕烷。

化合物Ⅹ:無色針狀晶體(氯仿),分子式:C28H44O,熔點:168~170 ℃,ESI-MS:m/z 395[M-H]-,10%硫酸乙醇反應顯紫紅色。1H-NMR(CDCl3,500 MHz)δ:5.47(1H,dd,J=2.1,5.8 Hz,H-6),5.30(1H,m,H-7),3.63(1H,m,H-3),1.00(3H,d,J=5.8 Hz,H-21),0.95(3H,s,H-19),0.90(3H,d,J=6.4 Hz,H-28),0.81(3H,d,J=5.9 Hz,H-27),0.65(3H,s,H-18)。13C-NMR(CDCl3,125 MHz)δ:38.1(C-1),32.1(C-2),70.3(C-3),40.9(C-4),140.1(C-5),119.9(C-6),116.5(C-7),141.0(C-8),46.2(C-9),37.0(C-10),21.3(C-11),38.8(C-12),41.4(C-13),54.6(C-14),23.1(C-15),28.0(C-16),55.6(C-17),12.1(C-18),17.5(C-19),40.5(C-20),21.3(C-21),135.5(C-22),132.1(C-23),39.3(C-24),33.0(C-25),19.8(C-26),19.6(C-27),16.3(C-28)。該化合物波譜數據與相關文獻[11]參考數據基本一致,故最終鑒定其為麥角甾醇。

化合物Ⅺ:白色針狀結晶(氯仿),分子式:C31H52O2,熔點:136~138 ℃,ESI-MS:m/z 457[M+H]+,10%硫酸乙醇反應顯紫紅色。1H -NMR(CDCl3,500 MHz)δ:5.38(1H,d,J=5.0 Hz,H-6),4.57(1H,m,H-3),1.00(3H,s,H-19),0.95(3H,d,J=6.2 Hz,H-21),0.83(9H,m,H-26,27,29),0.63(3H,s,H-18)。13C-NMR(CDCl3,125 MHz)δ:36.6(C-1),32.2(C-2),74.1(C-3),39.9(C-4),140.3(C-5),122.7(C-6),31.6(C-7),31.9(C-8),50.0(C-9),36.1(C-10),21.3(C-11),38.0(C-12),42.2(C-13),56.7(C-14),24.0(C-15),29.5(C-16),56.0(C-17),12.1(C-18),19.1(C-19),36.0(C-20),19.1(C-21),33.9(C-22),27.9(C-23),46.1(C-24),29.0(C-25),20.1(C-26),18.8(C-27),22.9(C-28),12.3(C-29),170.2(C-30),21.2(C-31)。該化合物波譜數據與相關文獻[12]參考數據基本一致,故最終鑒定其為β-谷甾醇乙酸酯。

4 討論

本研究從蜈蚣草全草95%乙醇提取物的石油醚部位中共分離得到11個化合物,經鑒定分別為(2R)-acetyl pterosin B(Ⅰ)、十六烷酸(Ⅱ)、何帕-22(29)-烯(Ⅲ)、表木栓醇(Ⅳ)、羽扇豆酮(Ⅴ)、齊墩果-18-烯-3-酮(Ⅵ)、豆甾醇(Ⅶ)、β-谷甾醇(Ⅷ)、22-羥基何帕烷(Ⅸ)、麥角甾醇(Ⅹ)、β-谷甾醇乙酸酯(Ⅺ)。化合物Ⅰ為倍半萜類成分,化合物Ⅱ為脂肪酸類成分,化合物Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ、Ⅵ、Ⅸ為三萜類成分,化合物Ⅶ、Ⅷ、Ⅹ、Ⅺ為甾體類成分;化合物Ⅰ~Ⅶ和Ⅸ~Ⅺ為首次從蜈蚣草中分離得到。本研究首次從蜈蚣草全草中分離鑒定出倍半萜類成分(Ⅰ)、何帕烷型三萜類成分(Ⅲ和Ⅸ)、齊墩果烷型三萜類成分(Ⅵ),在較大程度上豐富了其化學成分研究成果,可為深入研究其藥效物質基礎提供了一定的理論依據。

參考文獻

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(收稿日期:2018-09-13 修回日期:2019-02-20)

(編輯:余慶華)

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