基于健脾活血法探討參菝抗瘤液對人胃癌SGC-7901裸鼠異種移植瘤的抑制作用研究

劉蓮芳，許 純，潘迎英

（南京中醫藥大學附屬張家港市中醫醫院，江蘇 張家港 215600）

胃癌目前已成為全球最常見的惡性腫瘤之一，在初治的胃癌患者中，中國胃腸腫瘤外科聯盟數據報告2014—2016年早期胃癌占19%，進展期胃癌占71%，晚期胃癌占10%［1］。我國一項單中心統計結果顯示：ⅢC期患者5年生存率為25.7%，Ⅳ期胃癌患者5年生存率僅為12.4%［2］。手術目前仍是胃癌的唯一根治方式，其他西醫手段包括放化療、靶向治療、免疫治療。而中醫藥治療作為我國的特色治療，目前在進展期及晚期胃癌治療方面也顯示了一定的優勢。在實驗研究方面，近年來中醫藥在胃癌的細胞學水平和分子生物學水平作用已經得到廣泛的證實，其主要體現在：誘導細胞凋亡、阻滯信號傳導、抑制血管生成、誘導分化、端粒及端粒酶的穩定性、細胞毒作用、放化療保護、癌基因和抑癌基因表達等［3］。

參菝抗瘤液為我院曹林華院長的經驗方，曹林華為張家港市名中醫，長期從事中醫治療腫瘤的工作，抗腫瘤治療經驗豐富，特別是在胃癌方面，他提出的健脾活血法治療胃癌在臨床已經取得良好的療效，并設立基本方，制成院內制劑參菝抗瘤液，臨床廣泛應用于治療胃癌、腸癌。參菝抗瘤液在體內的抗腫瘤效應尚未進行過研究，故本課題建立人胃癌SGC-7901裸鼠異種移植腫瘤模型，觀察參菝抗瘤液對腫瘤的抑制作用及其機理。

1 材料與方法

1.1 動物 雄性BALB／c裸小鼠，平均體質量18～22 g，日齡：5周，上海靈暢生物科技有限公司提供，生產許可證：SCXK（滬）2013-0018，合格證編號：2013001831677，實驗動物使用許可證：SYXK（蘇）2017-0015，適用于屏障環境（SPF級，小鼠），每組8只，共40只。

1.2 藥物 參菝抗瘤液組成：太子參15 g，白術10 g，茯苓 10 g，陳皮 6 g，生半夏 15 g，生牡蠣 30 g，地龍 3 g，菝契 15 g，藤梨根 15 g，綠梅花 10 g，三棱10 g，莪術 10 g，野葡萄藤 15 g，山慈菇 10 g。 由我院中藥房煎煮成200 mL中藥飲液，并配制成10、50、100、200 mg／mL 的母液，-20℃保存備用。 氟尿嘧啶注射液由上海旭東海普藥業有限公司提供（批號：1711041）；0.9%氯化鈉配制備用，按 1 mg／kg使用。

1.3 試劑與儀器 YJ-875醫用凈化工作臺（蘇州凈化設備廠）；HANGPING FA2104S電子秤（上海手術器械廠）；Cmias-98A圖像處理分析儀及分析軟件（北京航天航空大學）。

1.4 分組與模型制備 取小鼠40只，接種16 d后，此時腫瘤生長至100～150 mm3，將動物隨機分為模型對照組、氟尿嘧啶組、參菝抗瘤液低劑量組（低劑量組）、參菝抗瘤液中劑量組（中劑量組）、參菝抗瘤液高劑量組（高劑量組），每組8只。

根據既往的文獻方法復制小鼠移植瘤模型：①復蘇人胃癌細胞SGC-7901瘤株，接種于3只小鼠腋窩皮下保種，10 d轉種1次，共2次；② 選取生長良好的胃癌組織，剪碎勻漿，制成細胞懸液，經0.2%臺盼藍染色后計數活細胞數＞95%，調整細胞濃度為1×107／mL；③ 每只小鼠右腋皮下接種0.2 mL細胞懸液。

1.5 給藥方法 模型對照組每天灌服0.2 mL／10 g體質量的生理鹽水；氟尿嘧啶組按照氟尿嘧啶1 mg／（kg·d）（容量為 0.2 mL／10g 體質量）腹腔注射；低、中、高劑量組分別按照參菝抗瘤液 6.25、12.5、25 mg／（kg·d）灌胃（容量同對照組），連用 15 d。

小鼠給藥劑量具體換算按照人與動物用藥量換算方式：人體表面積按照許文生氏公式［4］，即體表面積／m2＝0.006 1×身高 ／cm+0.012 8×體質量 ／kg-0.152 9

式中W為體重；K為常數，隨動物種類而不同，小鼠為9.1，本試驗中藥劑量共174 g，按人 50 kg、小鼠22 g進行計量換算，174 g小鼠等效劑量為12.6 mg／kg，取12.5 mg／kg·d，并設低、高劑量組分別為 6.25、25 mg／kg·d。

1.6 觀察指標 停藥24 h后處死所有小鼠，稱體重。將各組小鼠的皮下腫瘤完整剝取，并稱瘤重，計算相對腫瘤增殖率（T／C）及抑瘤率（IR）。游標卡尺測量腫瘤的長徑、短徑，計算腫瘤體積［4］：

其中a、b分別表示長徑、短徑

V0：分籠給藥時測量所得腫瘤體積；Vt：每次測量時的腫瘤體積

TRTV：治療組RTV；CRTV：模型對照組RTV

1.7 統計學方法 采用SPSS 19.0進行數據分析。計量資料屬正態分布的以（）表示，采用t檢驗；計數資料采用Kruskal-Wallis H檢驗。

2 結 果

本研究通過建立人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植腫瘤模型，評價了參菝抗瘤液的抗腫瘤活性。實驗結果表示：參菝抗瘤液 6.25、12.5、25 mg／kg 對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植腫瘤的T／C分別為 63.36%、52.67%、35.21%，IR分別為 37.5%、50.2%、65.5%；而相同條件下，氟尿嘧啶組T／C為37.73%，IR 為 63.8%，見表 1、圖 1～圖 5。

表1 各組對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植瘤生長的抑制比較

圖1 各組對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植瘤動物體質量的影響

3 討 論

圖2 各組對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植瘤瘤體積的影響

圖3 參菝抗瘤液對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植瘤瘤重的影響

圖4 裸鼠處死后暴露腫瘤照片

圖5 腫瘤照片

胃癌的主要治療手段為系統性治療，早期胃癌以手術為主，而對于失去手術根治或復發轉移的晚期胃癌患者，目前公認應采取以全身藥物治療為主的綜合治療手段，諸如姑息手術、放射治療、射頻消融、腹腔灌注及動脈介入栓塞灌注等局部治療手段。目前胃癌治療藥物主要包括化學藥物和分子靶向藥物，一線化療以毒性相對低、療效相當的兩藥聯合化療，以順鉑或奧沙利鉑為代表聯合5-FU或口服氟尿嘧啶類，該方案可使晚期胃癌患者中位無進展生存期（PFS）延長 5～6個月，總生存期（OS）接近10～13個月。二線治療多用多西他賽或紫杉醇或伊立替康單藥。三線治療僅涉及小樣本研究，化療獲益不明確，臨床實踐中，特別強調根據患者體力狀態、基礎疾病等綜合考慮。對于HER-2陽性的胃癌患者，化療基礎上聯合赫賽汀可顯著提高OS至14個月，減少26%的死亡風險。此外，靶向于血管內皮生長因子受體（VEGFR）的單克隆抗體及小分子TKI也在胃癌的二線或三線治療顯示出PFS及OS的獲益［5-10］，免疫檢查點抑制劑在晚期胃癌的三線治療中已有前瞻性研究結果支持，但目前獲益人群尚存在爭議［11］，但盡管如此，晚期胃癌患者預后仍然很差［12］。中醫藥療法作為我國傳統特色療法，其在臨床已取得良好的療效，目前研究主要是臨床實驗和應用、臨床研究等。隨著國家對中醫藥發展的高度重視，如何從中藥中提取有效抗腫瘤成分，也將成為新藥研制的熱點。

參菝抗瘤液方中太子參、白術、茯苓健脾益氣，陳皮、半夏健胃消食，生半夏、三棱、莪術、山慈茹消腫散結，野葡萄藤、菝葜活血祛瘀，天龍、牡蠣散結，全方共奏健脾理氣、活血散結的功效。為了能更進一步研究其中的抗腫瘤成分，尋找高效、低毒的抗腫瘤中藥，設計了本實驗研究。

3.1 動物模型選擇 首先，建立恰當的動物模型在抗腫瘤藥物的體內實驗研究中是不可或缺的［13-14］，既往文獻表明，理想的腫瘤模型應具備以下條件：① 指標客觀；② 快速且經濟；③ 有良好的預測性；④ 重復性好［15］。移植腫瘤模型包括同種移植性和異種移植性腫瘤模型，異種移植性腫瘤模型移植成活率高，并且可提供大量生長均勻的腫瘤模型，目前研究中運用的最多［16-17］。本研究選用動物為BALB／c裸鼠，該鼠為胸腺缺失、T細胞免疫缺陷、B細胞功能缺陷的小鼠，可明確用于腫瘤學發生機理的研究。

3.2 實驗方法 本研究采用的體內實驗比較接近臨床狀態，其所得的結果可較好反映臨床療效，較為可信［18-19］。本實驗從抑瘤率來看，顯示了參菝抗瘤液對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植腫瘤的生長有明確的抑制作用，但與氟尿嘧啶組比較無顯著差異，需排除實驗過程中操作流程、操作人員的因素，實驗的設計是否符合該裸鼠的活動規律等［20-22］。

3.3 參菝抗瘤液對裸鼠胃癌移植瘤的抑制作用效果評價 胃癌屬中醫 “癌病”“巖病”“癥瘕積聚”等范疇，中醫病因病機不外乎外感、內傷、起居等原因［23］。本研究基于“健脾益血、消腫散結”法治療胃癌，目的為臨床運用其進行治療提供客觀依據和理論支持。本實驗結果顯示：參菝抗瘤液低、中、高劑量組對人胃癌細胞SGC-7901裸鼠異種移植腫瘤的生長有抑制作用，并且隨著劑量的增加抑制作用增加，瘤重與模型對照組有顯著性差異，說明高劑量參菝抗瘤液具有抑瘤作用，證實了參菝抗瘤液的抗胃癌作用。當然，結果受各種因素影響，本實驗未經過重復性驗證，期望日后可進行重復性的實驗研究，并進一步設計實驗來研究該方中的抗腫瘤具體單體成分，并預先進行毒理實驗，以得出更為精準的數據。