TP-ELISA、TRUST以及兩種方法聯合檢測在梅毒感染診斷中的價值

(濮陽市紅十字中心血站，河南 濮陽 457000)

梅毒是由梅毒螺旋體(Treponema pallidum,TP)感染所引起的慢性性傳播疾病，其傳染力強，危害性大，臨床癥狀千變萬化，早期侵犯皮膚與生殖器，進一步會隨淋巴系統、血液循環向全身擴散，造成全身各臟器損傷，甚至威脅生命安全。如能早期發現、正規治療對患者預后具有積極意義 。目前臨床上對于梅毒螺旋體感染的檢測常采用梅毒螺旋體酶聯免疫吸附試驗(Treponema pallidum enzyme-linked immunosorbent assay,TP-ELISA)、甲苯胺紅不加熱血清試驗(Toluidine red unheated serological test，TRUST)、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(Treponema pallidum particle assay，TPPA)等方法進行[1]。其中TPPA 法檢測梅毒具有靈敏度、特異度均較高的優點，普遍將其作為梅毒診斷的“金標準”，但該方法費用昂貴，操作繁瑣，專業要求較高，在基層篩查中難以廣泛使用。TP-ELISA、TRUST兩種方法因其實用、方便、快捷等優點而被廣泛使用，但其存在假陽性、假陰性等現象，檢測準確性尚未明確[2]。本次研究以219例疑似梅毒患者血清作為研究對象，以TPPA法檢測結果作為標準，評價TP-ELISA法、TRUST法以及兩種方法聯合檢測對梅毒的診斷價值，為梅毒的早期診斷提供參考依據。報告如下。

1 資料與方法

1.1 樣本來源

血清樣本來自2017年1月～2017年12月在濮陽市紅十字中心血站就診初步診斷為疑似梅毒的219例患者，患者中男133例，女86例；年齡24～53歲，平均(32.7±6.9)歲。

1.2 方法

1.2.1 檢測方法 所有患者血清均使用TP-ELISA、TPPA、TRUST等方法進行檢測。TP-ELISA將微孔板用特異性原包裹后再檢測血清中的抗TP-IgM、抗TP-IgG抗體，采用酶標儀儀器(美國Molecular Devices，型號：SpectraMax M5)450 nm讀取吸光度(A值)，A值小于臨界值為陰性，A值大于臨界值為陽性；試劑盒由上海實業科華公司生產。TPPA將菌株純化后進行抗原抗體反應，檢測血清中的抗體，采用稀釋液在U形板上將每份血清樣本作倍比稀釋，加致敏粒子孔≥1∶80凝集為陽性，試劑盒由日本富士株式會社生產。TRUST在血清凝集后對非特異性抗體檢測，試劑盒由上海榮盛藥業有限公司提供。所有操作均嚴格按照說明書要求進行。

1.2.2 觀察指標 以TPPA法檢測結果作為標準，對比TRUST法、TP-ELISA法和兩種方法聯合檢測所得靈敏度和特異度。靈敏度是指檢查(或篩檢)方法將實際有病的人正確判斷為患者的能力，靈敏度=(試驗陽性的患者數/患者數)*100%，假陰性率=1-靈敏度；特異度是指檢查(或篩檢)方法將實際無病的人正確判斷為非患者的能力，特異度=(試驗陰性的非患者數/非患者數)*100%，假陽性率=1-特異度；約登指數=靈敏度+特異度-1。

1.3 統計學方法

研究數據分析采用SPSS19.0統計軟件進行，計數資料用%表示，組間比較用χ2檢驗，以P<0.05為差別有統計學意義。

2 結果

2.1 TP-ELISA和TRUST兩種方法對疑似梅毒診斷結果比較

以TPPA法診斷結果作為金標準，219例疑似梅毒患者中130例診斷為梅毒。TP-ELISA法檢測199例符合診斷，其中陽性114例符合診斷，陰性85例符合診斷；TRUST法檢測175例符合診斷，其中陽性92例符合診斷，陰性83例符合診斷；TP-ELISA+ TRUST聯合檢測209例符合診斷，其中陽性123例符合診斷，陰性86例符合診斷。TP-ELISA+ TRUST組對疑似梅毒診斷準確率高于TP-ELISA組和TRUST組，差異有統計學意義(χ2=27.90，P<0.05)。見表1。

表1 TP-ELISA 和TRUST兩種方法與TPPA法檢測梅毒螺旋體結果比較 n(%)

2.2 TP-ELISA和TRUST兩種方法對梅毒診斷價值比較

結果顯示，TP-ELISA法和TRUST法對梅毒感染診斷的靈敏度分別為87.69%和70.77%，特異度分別為95.51%和93.26%，約登指數分別為0.8320和0.6403。而TP-ELISA+TRUST聯合檢測的靈敏度、特異度、約登指數均較高，分別為94.62%、96.63%、0.9125。見表2。

表2 TP-ELISA和TRUST兩種方法對梅毒診斷價值的比較

3 討論

由于梅毒的唯一宿主是人類機體，其病程較為漫長，癥狀復雜，人體感染后會出現兩種抗體，其中一類是非特異性抗體，梅毒螺旋體在破壞機體組織過程中產生的一種抗原性心磷脂，使得機體產生反應素，但該類抗體不會直接針對梅毒螺旋體，無特異性；另一類則為抗梅毒螺旋體的特異性抗體，常侵犯機體各組織、器官，增加診斷難度[3]。臨床研究指出，機體感染梅毒后IgM抗體與IgG抗體分別在2周、4周后形成，非特異性抗體物質的反應素則晚于特異性抗體，在5～7周后形成[4]。

TP-ELSIA法也被稱為雙抗原夾心法，是一種臨床較為普遍使用的特異性檢測技術，通過檢測梅毒螺旋體特異性IgM抗體和IgG抗體進行診斷，其操作簡單、快捷、全自動化檢測等特征，且價格較低，儀器操作規范，資料便于保存，適合樣本量大的體檢、流行病學調查[5]。TRUST作為非特異性抗體試驗，抗原為心磷脂加入活性炭組成復合物，通過檢測血清中抗心磷脂抗體滴度進行診斷，具有操作簡單、價格低等優點，但其檢測結果與其他疾病會出現同樣的非特異性反應，易于形成假陽性結果[6]。

本次研究219例初診疑似梅毒患者中130例通過TPPA試驗結合臨床癥狀最終確診。研究結果顯示TP-ELISA法和TRUST法對疑似梅毒診斷準確率分別為90.87%和79.91%，兩種方法單獨診斷雖然特異度均較高，但靈敏度卻相對較低，漏診率較高，但如果將兩種方法聯合使用對梅毒感染診斷準確率可達到95.43%，而且可明顯提高診斷的靈敏度以及降低漏診率，約登指數達到0.9125，具有較高診斷價值。提示在臨床工作中 ，TP-ELISA法和TRUST法雖然操作簡單、快捷，但梅毒鑒別診斷較為復雜，單一檢測容易受其它因素影響，出現假陽性和假陰性結果，從而影響進一步治療，但將兩種方法聯合檢測可以以較低的成本獲得更好檢查效果。

綜上所述，TP-ELISA、TRUST兩種方法診斷梅毒感染快捷、實用、操作簡單，但單獨使用靈敏度相對較低，漏診率較高，將兩種方法聯合使用可顯著提高靈敏度，增強發現病人的能力，減少漏診的發生，對梅毒感染診斷價值較高，值得在臨床廣泛應用。