宮頸鱗癌組織中TPX2和Aurora-A蛋白的表達水平及預后意義

董潔，胡觀麗，況蕾，莊濤，張蓓，2

宮頸癌位居所有女性腫瘤致死原因第3位［1］。宮頸上皮內瘤變（CIN）被廣泛認為是宮頸癌的癌前病變，從CIN進展到宮頸癌的過程中涉及一系列分子表達及功能的異常變化［2］。TPX2（targeting protein for Xenopus kinesin-like protein 2）蛋白為微管相關蛋白，參與有絲分裂紡錘體形成和穩定性形成，Aurora-A（serine/threonine-protein kinase 6）主要功能為在細胞分裂的過程中調節G2/M轉變，在染色體穩定性方面起了重要作用［3］。TPX2和Aurora-A蛋白已被證明在多種惡性腫瘤中存在基因擴增或者過表達，并且與腫瘤的進展和預后密切相關［3］。然而，TPX2和Aurora-A在宮頸鱗癌組織中的蛋白表達水平與病人預后的關系仍有待于進一步研究。

1 資料與方法

1.1一般資料回顧性收集2011年6月至2013年6月于徐州市中心醫院行手術治療或宮頸活檢的宮頸鱗癌、CIN及慢性宮頸炎病人的宮頸組織。我們將納入的病人分為四組。宮頸鱗癌組：宮頸鱗癌85例，年齡范圍為22～78歲，平均年齡48.6歲；臨床分期按國際婦產科聯盟（FIGO）標準［4］，Ⅰ期50例，Ⅱ期25例，Ⅲ期10例；高分化6例，中分化59例，低分化20例。CINⅡ～Ⅲ組：病人（細胞學檢查為高級別鱗狀上皮內瘤變）30例，年齡范圍為27～76歲，平均年齡46.9歲。CINⅠ組：（細胞學檢查為低級別鱗狀上皮內瘤變）病人30例，年齡范圍為27～65歲，平均年齡45.6歲。慢性宮頸炎組：慢性宮頸炎20例，取自同期因子宮肌瘤行子宮切除手術的宮頸組織標本，年齡范圍為28～60，平均年齡46.25歲。

宮頸鱗癌病人納入標準：病理切片確診為宮頸鱗癌，病人的臨床特征資料完整，均進行治療后隨訪，主要包括門診、電話隨訪。排除標準：合并其他系統惡性腫瘤、來自于生殖系統其他器官腫瘤的轉移癌（包括原發性雙癌）、有院外治療史病人。本研究病人均簽署知情同意書，本研究符合《世界醫學協會赫爾辛基宣言》相關要求。

1.2免疫組織化學檢測免疫組織化學TPX2和Aurora-A一抗抗體購于Abcam公司。組織蠟塊按照4 μm厚度連續切片，采用濃度為3%的過氧化氫處理切片后，高溫環境進行抗原修復。取出小鼠抗人TPX2單抗，按照1∶100稀釋后4℃孵育過夜。37℃孵育二抗30 min后進行DAB顯色。陰性對照中采用PBS緩沖液替代一抗處理。Aurora-A蛋白表達檢測按照相同實驗方式進行。TPX2陽性染色為棕黃色著色于細胞核，Aurora-A陽性為細胞核及胞質內出現黃褐色顆粒。采用半定量法，隨機在顯微鏡下選取10個高倍視野，每個視野觀察100個細胞，計算每個視野陽性細胞數的百分比：＜5%為陰性表達，＞5%為陽性表達。

1.3隨訪本課題組對85例宮頸鱗癌病人均進行門診或電話隨訪，以病人開始治療的時間為隨訪起始時間，2018年6月30日為隨訪截止的日期?？偵嫫诙x為病人從隨訪開始至出現宮頸鱗癌致死的時間。由于意外或其他不相關的疾病導致死亡的病人定義為截尾事件進行處理。

1.4統計學方法采用SPSS 19.0軟件進行統計分析。觀測資料均為計數資料，以例數及百分率表示，采用整體+分割χ2檢驗進行組間比較。采用Spearman相關分析評估TPX2和Aurora-A蛋白水平的表達相關性。采用Kaplan-Meier建立生存分析模型，采用Log-rank檢驗比較兩組總生存率的差異。采用Cox比例風險回歸模型分析進行多因素分析。P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1TPX2和Aurora-A蛋白在宮頸鱗癌、CIN和慢性宮頸炎病人宮頸組織中的表達情況TPX2蛋白四組病人宮頸組織中的表達陽性率差異有統計學意義（P＜0.001）。組間兩兩比較結果顯示，宮頸鱗癌和CINⅡ～Ⅲ中TPX2蛋白表達陽性率高于CINⅠ和慢性宮頸炎（P＜0.05）；宮頸鱗癌與CINⅡ～Ⅲ、CINⅠ與慢性宮頸炎之間差異無統計學意義（P＞0.05）。Aurora-A蛋白在四組病人宮頸組織中的表達陽性率也差異有統計學意義（P＜0.001）。組間兩兩比較結果顯示，宮頸鱗癌和CINⅡ～Ⅲ中Aurora-A蛋白表達陽性率高于CINⅠ和慢性宮頸炎（P＜0.05）；宮頸鱗癌與CINⅡ～Ⅲ、CINⅠ與慢性宮頸炎之間差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

表1 TPX2和Aurora-A蛋白在宮頸鱗癌、CIN和慢性宮頸炎病人宮頸組織中的表達情況/例（%）

2.2宮頸鱗癌組織中TPX2和Aurora-A蛋白的表達相關性進一步利用Spearman相關分析，研究TPX2和Aurora-A蛋白水平在宮頸鱗癌組織中表達水平的相關性發現，TPX2和Aurora-A的蛋白表達水平呈正相關，且差異有統計學意義（r=0.229，P=0.035）。見表2。

表2 TPX2和Aurora-A蛋白在85例宮頸鱗癌組織中的表達相關性/例

2.3宮頸鱗癌組織中TPX2和Aurora-A蛋白的表達與病人生存時間的關系利用Kaplan-Meier生存分析方法，分別分析TPX2和Aurora-A蛋白的表達與宮頸鱗癌病人總生存期的關系。結果顯示，TPX2和Aurora-A蛋白陽性表達病人的平均生存時間顯著短于陰性表達病人（P＜0.05），見圖1。TPX2蛋白表達陽性和陰性病人的5年生存率分別為37.8%和77.7%，Aurora-A蛋白表達陽性和陰性病人的5年生存率分別為37.3%和83.5%。

多因素Cox回歸分析顯示FIGO分期、病理分級、肌層浸潤深度、淋巴結轉移及TPX2、Aurora-A蛋白表達與宮頸鱗癌病人預后有關（P＜0.05）。在校正了可能的混雜因素后，TPX2和Aurora-A蛋白可作為宮頸鱗癌病人預后的獨立危險因素［風險比（HR）=2.449，95%置信區間（CI）：1.056～5.676，P=0.037；HR=2.354，95%CI：1.182～4.688，P=0.015］。見表3。

表3 Cox多因素回歸分析宮頸鱗癌85例的預后影響因素

圖1 TPX2和Aurora-A蛋白表達與85例宮頸鱗癌病人預后的關系：A為TPX2蛋白，B為Aurora-A蛋白

3 討論

TPX2蛋白是一種微管相關蛋白，介導Xklp2的COOH-末端與微管的連接，在從G1/S期過渡到胞質分裂時顯著表達［5］。TPX2蛋白對細胞紡錘體的形成具有重要作用并且可以作為評估腫瘤細胞增殖能力的生物標志物［6］。研究表明，TPX2蛋白在多種腫瘤組織中呈現高表達，包括乳腺癌［7］、肺癌［8］以及前列腺癌［9］等。在細胞功能方面，TPX2可以促進腫瘤細胞的增殖，抑制細胞凋亡進而在多種腫瘤中發揮促癌基因的作用［10］。在宮頸鱗癌細胞中，干擾TPX2基因的表達可以抑制宮頸鱗癌細胞在體外的增殖，并且可以抑制宮頸鱗癌細胞在裸鼠體內的生長，說明TPX2在宮頸鱗癌中扮演著促癌基因的作用［11］。

Aurora-A是Aurora家族最重要的成員之一，主要功能是參與中心體的復制、分離與成熟，紡錘體微管的組裝與穩定，以及染色體的正常分離等［12］。Aurora-A蛋白的異常表達與較高的腫瘤發病率相關［12］。在促癌作用機制方面，Aurora-A蛋白可以通過誘導基因組不穩定性，增強癌細胞的增殖、存活、遷移和侵襲等能力，進而促進癌癥的進展［13］。在宮頸鱗癌中，研究表明Aurora-A可能參與人乳頭狀瘤病毒（HPV）誘導的宮頸鱗癌的發生，并且可能作為有效的分子靶標，治療HPV誘導的宮頸鱗癌［14］。

在本研究中，我們重點檢測了TPX2和Aurora-A蛋白在宮頸鱗癌組織中的表達，并且與CIN病人、慢性宮頸炎病人進行對比。我們發現，TPX2和Aurora-A蛋白在宮頸鱗癌和CINⅡ～Ⅲ組織中表達陽性率顯著高于CINⅠ和慢性宮頸炎病人。前期已有的研究表明，TPX2和Aurora-A蛋白在宮頸鱗癌和CIN組織中呈現出陽性表達［15-17］。我們的結果與之類似，更進一步明確發現，TPX2和Aurora-A蛋白在CINⅡ～Ⅲ中的表達陽性率開始顯著升高。我們的研究提示，TPX2和Aurora-A蛋白可能在CINⅠ進展為CINⅡ～Ⅲ的過程中，發揮著重要的促癌作用。此外此外我們還發現，TPX2和Aurora-A蛋白在宮頸鱗癌病人組織中表達顯著正相關。在分子機制上，TPX2可以作為Aurora-A的輔助因子，促進Aurora-A定位于紡錘體并發揮生物學功能；反之，Aurora-A也能促進TPX2功能的發揮［18］。因此，TPX2和Aurora-A蛋白在宮頸鱗癌發生和進展過程中，可能發揮著協同促癌的作用。

本研究還發現，腫瘤組織中TPX2和Aurora-A蛋白的陽性表達與宮頸鱗癌病人較短的總生存期相關。TPX2和Aurora-A蛋白表達陽性的宮頸鱗癌病人5年生存期顯著降低，提示TPX2和Aurora-A蛋白可能在宮頸鱗癌進展惡化的過程中發揮重要的作用。這與TPX2和Aurora-A蛋白在其它腫瘤中的預后意義類似。在消化道惡性腫瘤中，TPX2的陽性表達與病人較差的預后相關［19］；在非小細胞肺癌病人中，Aurora-A高水平表達也與病人的耐藥及總生存期相關［20］。本研究還利用多因素Cox回歸分析發現，TPX2和Aurora-A蛋白可作為宮頸鱗癌病人預后的獨立危險因素，提示TPX2和Aurora-A蛋白可以作為預后生物標志物，在宮頸鱗癌病人治療效果預測中起到一定的臨床意義。

本研究也存在一定的局限性。本研究僅關注宮頸鱗癌組織中TPX2和Aurora-A的蛋白表達，未能研究宮頸腺癌中TPX2和Aurora-A的蛋白表達水平及預后意義。

綜上所述，本研究顯示，TPX2和Aurora-A蛋白在宮頸鱗癌、CINⅡ～Ⅲ組織中高表達，TPX2和Aurora-A蛋白可能在宮頸鱗癌從癌前病變進展為浸潤癌的過程中發揮促癌的作用。同時，TPX2和Aurora-A蛋白陽性表達與宮頸鱗癌較差的預后相關，可以作為宮頸鱗癌病人預后的獨立危險因素。因此，TPX2和Aurora-A可能作為新的分子靶點，為宮頸鱗癌的治療和預后提供新的思路。