珍珠菜提取物的抗缺氧作用

張嵱彬 楊艷 王麗 廖秀 楊娟 傅舒安 王道平 楊小生，

(1貴州醫科大學省部共建藥用植物功效與利用國家重點實驗室，貴州 貴陽 550025；2貴州省中國科學院天然產物化學重點實驗室)

珍珠菜(Lysimachia clethroides Duby)為報春花科植物虎尾珍珠菜的根或全草，又叫扯根菜、山酸湯稈、通筋草、酸罐罐等。具有活血調經、利水消腫等功效?？芍委煁D女月經不調、小兒疳積、跌打損傷等〔1〕。目前對珍珠菜的藥理學研究主要集中在抗腫瘤〔2〕和抗白血病〔3〕方面，而關于珍珠菜提取物耐缺氧的研究卻未見報道。本研究建立常壓缺氧模型、亞硝酸鈉中毒模型和急性腦缺血性缺氧模型，旨在探究珍珠菜提取物的耐缺氧作用。

1 材料與方法

1.1儀器、試藥與動物 RT-6000酶標儀(美國，雷杜)，XFB-200高速中藥粉碎機(長沙市雨花區中誠制藥機械廠)，Centrifuge-5427 R 低溫高速離心機(德國艾本德股份有限公司)，N-1200B旋轉蒸發儀(上海愛朗儀器有限公司)，SHZ-CD循環水式多用真空泵(鞏義市予華儀器有限責任公司)，JA2003電子天平(上海浦春計量儀器有限公司)，101-2A電熱鼓風干燥箱(天津市泰斯特儀器公司)，SB25-12DTD超聲波清洗機(寧波新芝生物科技股份有限公司)。

珍珠菜采自貴州省榕江縣，經鑒定為珍珠菜全草；鈉石灰(成都金山化學試劑有限公司)；亞硝酸鈉(重慶百倍精細化工廠)；超氧化物歧化酶(SOD)和谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)試劑盒(南京建成生物工程研究所，生產批號：20180302)，紅景天膠囊(北京同仁堂，批準文號：國食健字G20100243)；昆明種小鼠90只，雌雄各半，體重18～22 g〔合格證號：SCXK(軍)2012-0011由重慶騰鑫生物技術有限公司提供，SPF級〕。

1.2動物分組 將90只小鼠隨機分為空白組、紅景天組和珍珠菜組，雌雄各半，每組30只，每組分別進行常壓缺氧實驗、亞硝酸鈉中毒實驗和急性腦缺血性缺氧實驗。

1.3試劑制備 將珍珠菜陰干粉碎，過篩，經70%甲醇回流提取3次，合并過濾液，濃縮，得浸膏。將浸膏烘干，按照1 ml原藥液含生藥1 g的方法〔4〕，珍珠菜浸膏的得率為14.70%，經計算得出應加水將珍珠菜浸膏配置成0.735 g/ml的溶液，備用。

1.4給藥劑量 紅景天膠囊的成人劑量為40 mg/(kg·d)，折合成動物的給藥劑量，經計算得出紅景天組給藥劑量為0.063 g/(ml·d)，珍珠菜組給藥劑量為0.735 g/(ml·d)，灌胃體積均為10 g/(ml·d)?？瞻捉M給予等量生理鹽水〔5〕。

1.5常壓缺氧實驗 末次灌胃給藥后，將小鼠放入250 ml廣口瓶內，瓶內放置鈉石灰10 g，上置濾紙，橡膠塞表面涂抹凡士林，塞緊瓶蓋，使裝置密閉，記錄小鼠在密閉空間內的存活時間。實驗結束后取出小鼠心臟和大腦，洗凈血液，稱重，勻漿，按照試劑盒方法測定心肌和大腦中SOD和GSH-Px活力〔6,7〕。

1.6亞硝酸鈉中毒實驗 于末次灌胃給藥1 h后，小鼠腹腔注射1 ml/(10 mg·kg)亞硝酸鈉，記錄小鼠從亞硝酸鈉注射完畢到死亡的時間，實驗結束后取出小鼠心臟和大腦，洗凈血液，稱重，勻漿，按照試劑盒方法測定心肌和大腦中SOD和GSH-Px的活力〔6，7〕。

1.7急性腦缺血性缺氧實驗 于末次灌胃給藥1 h后，各組均在雙耳連線處快速斷頭，記錄小鼠斷頭后至張口呼吸次數和喘息停止時間(以小鼠張口呼吸停止且舌頭外露為標準停止計時)。實驗結束后取出小鼠心臟和大腦，洗凈血液，稱重，勻漿，按照試劑盒方法測定心肌和大腦中SOD和GSH-Px的活力〔6,7〕。

1.8統計學方法 采用SPSS17.0軟件進行單因素方差分析、LSD-t檢驗。

2 結 果

2.1常壓缺氧實驗結果 紅景天組和珍珠菜組生存時間〔(42.30±2.71)、(35.91±2.51)min〕明顯長于空白組〔(26.50±4.72)min,P<0.05,P<0.01〕，珍珠菜組存活時間延長了35.51%。珍珠菜組心肌中SOD和GSH-Px活性明顯高于空白組，腦組織GSH-Px活力明顯高于空白組(P<0.05)，見表1。

2.2亞硝酸鈉中毒實驗結果 紅景天組和珍珠菜組生存時間〔(11.00±1.50)、(8.89±1.45)min〕明顯長于空白組〔(7.40±0.84)min,P<0.05,P<0.01〕，珍珠菜組存活時間延長了20.14%。珍珠菜組心肌和腦組織中SOD和GSH-Px活性均明顯高于空白組(P<0.05或P<0.01)。見表2。

2.3急性腦缺血性缺氧實驗結果 紅景天組和珍珠菜組生存時間〔(23.49±3.13)、(31.40±3.42)min〕明顯長于空白組〔(20.22±1.67)min,P<0.05,P<0.01〕，珍珠菜組存活時間延長了55.29%。珍珠菜組心肌和腦組織中SOD和GSH-Px活性均明顯高于空白組(P<0.05或P<0.01)。見表3。

表1 珍珠菜提取物在常壓缺氧下對小鼠心肌、腦組織中SOD和GSH-Px的影響

與空白組比較：1)P<0.05,2)P<0.01；下表同

表2 珍珠菜提取物對亞硝酸鈉中毒所致小鼠心肌、腦組織中SOD和GSH-Px的影響

表3 珍珠菜提取物對急性腦缺血性缺氧所致小鼠心肌、腦組織中SOD和GSH-Px的影響

3 討 論

珍珠菜屬植物中的主要化學成分為三萜及其皂苷類、黃酮及其皂苷類、甾醇類、苯并內酯及有機酸類〔8,9〕。研究表明，黃酮類化合物有較好的抗氧化活性和清除自由基能力，從而對缺氧引起的機體氧化損傷具有保護作用〔10〕。缺氧是臨床上常見的病理過程，可導致多種疾病發生，引起機體代謝、功能甚至結構異常，嚴重或長期缺氧可導致機體心腦等重要器官死亡。小鼠在密閉環境中受到缺氧的損害，主要反映在心臟和腦部。本實驗結果表明，珍珠菜粗提物能夠使小鼠缺氧存活時間延長，有助于改善機體的缺氧損傷。

在機體缺氧的情況下，SOD和GSH-Px 很容易被誘導產生，其活性可作為機體抗氧化能力的標準。珍珠菜粗提物能夠清除過量的氧自由基，催化超氧陰離子自由基歧化生成氧和過氧化氫，修復受損細胞，可減少缺氧對心肌組織和腦組織造成的損傷。SOD值越大，保護細胞免受損傷的能力越強；GSH-Px酶活力越大，保護細胞膜結構和功能完整的能力越強〔11〕。

綜上所述，珍珠菜提取物能顯著延長常壓缺氧小鼠和急性腦缺血性缺氧小鼠的存活時間，提高機體抗氧化能力，增強小鼠缺氧耐受力，延長缺氧耐受時間，降低自由基對心肌和腦組織的損傷。