慈姑組培苗規范化生產技術規程

林志城 高美萍 江文

慈姑 （Sagittaria sagittifoliaL.） 是澤瀉科（Alismataceae）慈姑屬宿根性水生草本植物，原產中國。慈姑營養價值高，富含淀粉、蛋白質、多種維生素和鉀、磷、鋅等元素，對人體機能有調節促進作用；此外，還具有很高的藥用價值，中醫認為慈姑性味甘平、生津潤肺、補中益氣，因此慈姑不但營養價值豐富，還能夠敗火消炎，輔助治療癆傷咳喘。慈姑為穗狀花序，雌雄異花，且雄花雄蕊多數，結實后只能形成瘦果，采用種子繁殖自然條件下很難發芽，成苗困難且當年只結細小球莖。為此，長期以來，農民在種植生產上均采用球莖自留自繁自種，導致原有的慈姑品種種性退化，易受病蟲侵害，球莖小，產量低，品質差，嚴重阻礙慈姑產業健康持續發展。

組培苗因其種質純正，生長整齊健壯、管理方便、易獲優質高產、可有效解決種源帶病及品種退化問題，在生產上日益得到廣泛應用。然而由于各生產單位慈姑組培苗的生產技術不同，生產管理不一，產品標準不規范，造成產品良莠不齊，給種植戶帶來損失的事件屢有發生。通過制定慈姑組培苗生產技術規程，規范慈姑組培苗生產技術、工藝及過程，可達到提高效益的目的，同時使慈姑組培苗生產技術及產品質量有標準可依，以確保供給種植戶使用的組培苗品種純正、遺傳性穩定、品質優良，使種植戶獲得增產增收。本標準的制定，將從源頭上為確保繁育的慈姑組培苗實現優質、安全和穩定可控提供技術支撐，對發展慈姑規范化大規模種植、促進廣西慈姑產業持續發展具有現實的指導意義。

1 范圍

本標準規定了慈姑組培苗生產的術語和定義、生產設備和化學試劑、消毒滅菌操作、培養室環境控制、生產操作、組培苗變異篩選及控制、組培苗質量要求、生產管理規章制度等技術要求。

本標準適用于廣西境內慈姑組培苗的生產。

2 規范性引用文件

下列文件對于本文件的應用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，僅所注日期的版本適用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改單）適用于本文件。

NY/T 2306花卉種苗組培快繁技術規程

DB45/T 1655芋頭組培苗生產技術規程

表1 慈姑組培苗生產常用植物生長調節劑濃度及配制方法

3 術語和定義

下列術語與定義適用于本文件。

3.1 頂芽

著生在球莖上部的芽。

3.2 外植體

球莖頂芽和匍匐莖的頂端生長點。

3.3 變異株

在組培生產過程中受到種源純度、培養基、培養條件等因素的影響，組培材料或生產出的組培苗植株以及移栽到大田生長的植株遺傳特性發生明顯變化，其形態特征如葉色、葉形、球莖大小、形狀、植株高矮等也顯著區別于原品種植株。

4 生產設備和化學試劑

生產設備、化學試劑及滅菌操作均按NY/T 2306執行。

5 培養室環境條件的控制

5.1 溫度

培養室溫度應控制在 （26±2）℃，可根據培養材料所需的最適溫度進行調節。廣西夏季氣溫高，須有空調系統控溫，保持室內環境穩定。

5.2 濕度

培養室保持70%～80%的相對濕度，廣西春夏季空氣濕度大，培養室應放置除濕機。

5.3 光照

一般培養室光照強度控制在 1 500～3 000 lx， 以每天 12～16 h為宜；須根據培養材料需光特性調節光照強度及光照時間；工廠化生產時可考慮利用自然光照以降低成本。

6 生產操作

6.1 培養基配制與保存

根據培養材料品種類型及生長發育特性，選擇相應的基本培養基種類和植物生長調節劑種類、濃度、配比。慈姑組織培養常用MS基本培養基，成分參考NY/T 5022-2006《無公害食品香蕉生產技術規程》。制作培養基前需要先配制母液，應用去離子水配制；根據生產情況，可以配制成單一化合物母液或幾種化合物的混合母液。植物生長調節物質的母液配制濃度為0.1～1.0 mg/mL，配制方法參見表1。母液配制好后貼上標簽，注明名稱、配制日期，存放4℃的冰箱中，存放時間不宜過長，一般不超過2個月，發現有不明沉淀、渾濁或變色則停止使用。

根據要配制的培養基的量，分別量（稱）取母液、蒸餾水、固化劑和蔗糖等，混合、攪拌加蒸餾水溶解，充分攪拌后，用0.1 mol/L的 HCl或 0.1 mol/L的NaOH 調節pH 值至 5.6±0.2，后用蒸餾水定容。加熱溶解后趁熱按每瓶（袋）33～40 mL 的量分裝至250 mL的培養瓶或100 mm×120 mm聚丙烯培養袋中并封好瓶（袋裝消毒盒）蓋，經 121℃20 min高壓蒸汽消毒，于室溫凝固，注明培養基編號及消毒日期，存放3～5 d，選擇無菌污染的培養基接種。

6.2 外植體采集與處理

宜選擇生長健壯、無病蟲害、具有優良品種性狀的球莖頂芽作為外植體。

①頂芽外植體 將采集的球莖頂芽或匍匐莖用自來水沖洗2～3遍，剪取所需幼芽莖段（2～3 cm），略晾干。在超凈臺上，將預處理的慈姑球莖頂芽截取直徑 3～5 mm、長 10～20 mm 莖尖段放入燒杯中，用75%酒精處理輕搖 1～2 min，倒出酒精，用無菌水沖洗外植體2～3遍；再用2%次氯酸鈉浸泡 10～15 min，然后用無菌水沖洗3～5遍后瀝干，封存于經滅菌的培養瓶內供接種用。

②匍匐莖莖尖外植體 在超凈臺上，將預處理的慈姑匍匐莖截取直徑 3～5 mm、長 5～10 mm莖尖段放入燒杯中，倒入75%酒精，輕輕搖晃10～30 s，倒出酒精，用無菌水沖洗外植體3～5遍；再用2%次氯酸鈉浸泡8～10 min，然后用無菌水沖洗3～5遍后瀝干封存于經滅菌的培養瓶內供接種用。

慈姑組培繼代苗

6.3 接種和增殖培養

取經消毒處理的外植體，在無菌墊紙上切取0.3～0.5 mm的莖尖組織。

初代培養（萌發培養）：將切取的外植體，接種在1/2 MS+6-BA 0.5～1.0 mg/L+NAA 0.01～0.05 mg/L+蔗糖30 g/L的萌發培養基上，溫度為（26±2）℃，光照1 000～2 000 lx， 每日光照 16 h，7～10 d后，選擇無污染且已萌發的外植體再進行分化培養。

繼代培養：將初代培養所得叢生芽分切成帶有2～3個芽點的小塊轉接MS+6-BA 2.0～3.5 mg/L+NAA 0.1～0.5 mg/L+蔗糖30 g/L的繼代培養基上，溫度為（26±2）℃，光照 1 500～3 000 lx，每日光照12 h。根據培養材料的發育及長勢，適當調整繼代培養基中植物生長調節劑的用量和比例，使增殖系數控制在2.0～5.0。宜以28 d為一個繼代周期。

6.4 組培苗的生根培養和煉苗

選擇繼代培養材料中葉色正常、生長健壯的繼代苗，接種在生根培養基上進行生根培養。將分化苗接種在MS+6-BA 0.5～1.0 mg/L+NAA 0.5～1.0 mg/L+蔗糖30 g/L的培養基上生根。放置在溫度（26±2）℃，光強 2 000 lx的光照培養室內，培養10～15 d，苗高5～8 cm，莖粗壯，根系發達，即可轉移到煉苗大棚培養。慈姑組培苗在光照培養室內培養后，必須轉移在常溫自然散射光較強的煉苗大棚，煉苗15～30 d后可種植。

7 慈姑組培苗變異篩選及控制

增殖系數控制在2.0～5.0。繼代材料不應選用老化的芽或植株；繼代次數控制在8代以內。培養基組培繼代增殖和生根培養的培養基中，植物激素的濃度應控制為 6-BA≤3.5 mg/L，NAA≤2.5 mg/L。組培苗生產過程中及時淘汰變異株，如失綠、葉片畸形扭曲、分蘗葉片細弱呈叢生狀、匍匐莖明顯過長、植株矮小、生根數少等的植株。

8 慈姑組培苗質量標準

慈姑組培苗種源來自品種純正、遺傳性狀穩定、優質高產的無污染母本園或母株。宜選用通過省級以上的農作物品種委員會審定的品種。慈姑生根組培苗無污染，植株生長形態正常無變異。合格慈姑組培苗的質量要求見表2。

表2 慈姑組培苗分級指標

9 生產記錄及檔案建立

應建立生產記錄檔案，生產記錄應包括：母液及培養基配制、培養基高壓蒸汽滅菌、員工接種、組培材料繼代和生根入出庫、品種材料生產檔案和產品銷售情況。

慈姑組培生根苗