阿替洛爾片溶出度測定方法的改進

劉志杰，李東輝，王 鑫

（北京市海淀區食品藥品安全監控中心，北京 100094）

阿替洛爾在生物藥劑學分類系統（BCS）中屬Ⅲ類，即高溶解性、低滲透性藥物。2015年版《中國藥典（二部）》中阿替洛爾片的溶出度測定方法為紫外分光光度（UV）法，但在實際檢驗工作中發現，有些產品含量測定結果不高，而溶出度測定值卻超過120%。在溶出度測定中，雖然自動取樣系統和濾膜多采用惰性材料，但在實際操作中發現某些產品仍存在濾膜吸附現象[1-2]，致使結果變低。該現象一般可通過增加初濾液體積解決。本研究中建立了高效液相色譜（HPLC）法測定阿替洛爾片的溶出度，并與UV法進行了比較，且對原方法的不合理高值進行了探討。現報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器

XS205DU型電子天平（瑞士梅特勒-托利多公司）；1260型高效液相色譜儀，包括二極管陣列檢測器（DAD，美國 Agilent公司）；TU-1901型紫外分光光度計（北京普析通用責任有限公司）；RC-8MD型智能溶出儀（天津市天大天發科技有限公司）。

1.2 試藥

阿替洛爾對照品（中國食品藥品檢定研究院，批號為 100117-201105，純度 99.8%）；阿替洛爾片（A 廠，批號分別為 161202，180104，180301，規格為 12.5 mg；B 廠，批號為 20161230，規格為 25 mg）；甲醇、磷酸、辛烷磺酸鈉均為色譜純，其他試劑均為分析純，水為純化水。

2 方法與結果

2.1 色譜條件[3-4]

色譜柱:Waters Symmetry C18柱（150 mm ×4.6 mm，5 μm）；流動相:磷酸鹽緩沖液（取磷酸二氫鉀 6.8 g，辛烷磺酸鈉 1.3 g，加水溶解并稀釋至 1000 mL，用磷酸調 pH 至 3.0）-甲醇（70 ∶30，V／V）；檢測波長:226 nm；柱溫:30 ℃；流速:1.0 mL ／min；進樣量:20 μL。

2.2 溶液制備

對照品溶液:稱取阿替洛爾對照品9.94 mg，精密稱定，置 100 mL容量瓶中，用溶出介質[（9→1000）鹽酸溶液]溶解并定容，作對照品貯備液，精密量取2 mL，用溶出介質溶解并定容至20 mL，濾過，取續濾液，作對照品溶液。

供試品溶液:按2015年版《中國藥典（二部）》阿替洛爾片項下方法制備溶出液。

2.3 方法學考察

系統適用性試驗:取2.2項下2種溶液，按2.1項下色譜條件進樣測定，在此色譜條件下的色譜圖見圖1。結果，待測成分峰峰形對稱，對稱因子為1.07；待測成分峰與其他峰可達到基線分離，分離度大于2.0，理論板數按阿替洛爾峰計不低于7000。

圖1 高效液相色譜圖

專屬性試驗:分別取2個廠家的樣品，依法制備供試品溶液20 μL，按2.1項下色譜條件進樣測定。結果主成分與各有關物質能完全分離，分離度大于2.0。利用DAD進行峰純度分析，阿替洛爾峰純度因子大于980，表明符合定量要求。

線性關系考察:分別取2.2項下對照品溶液10，15，20，25，30 μL 進樣（每個進樣量梯度連續進樣 3 次，取平均值）測定，以進樣量（，μg）為橫坐標、峰面積（Y）為縱坐標進行線性回歸，得回歸方程Y=1934.3X+0.6，R2=0.9999（n=5）。結果表明，阿替洛爾進樣量在0.0994 ～0.2982 μg范圍內與峰面積線性關系良好。

精密度試驗:取同一供試品溶液20 μL，按2.1項下色譜條件連續進樣5次，測定峰面積。結果的RSD為0.50%（n=5），表明儀器精密度良好。

穩定性試驗:取同一供試品溶液，室溫下分別于放置 0，2，4，6，8 h 時進樣 20 μL，測定。結果阿替洛爾峰面積基本保持不變，RSD為0.82%（n=5），表明室溫下供試品溶液放置8 h內穩定。

重復性試驗:取溶出樣品溶液，室溫下分別于放置0，2，4，6,8 h 時進樣，測定，結果阿替洛爾峰面積基本保持不變，RSD為0.78%（n=5），表明室溫下供試品溶液在8 h內穩定。

回收試驗:阿替洛爾片溶出度的法定限度[3]為標示量的70%，故選擇回收率的體積分數梯度分別為50%，70%，100%。按阿替洛爾片處方配置空白輔料，精密稱定9份，置500 mL容量瓶中，分別精密加入質量濃度為0.5012 g／L 的阿替洛爾對照品溶液 5，7，10 mL，各3份，用溶出介質溶解并定容，按2.1項下色譜條件進樣測定，計算回收率。結果見表1。

表1 回收率試驗結果（n=9）

2.4 樣品溶出度測定

取樣品（批號為161202）6片，按2015年版《中國藥典（二部）》溶出條件制備溶出液，按2.1項下色譜條件進樣20 μL分析，根據標準曲線計算溶出度。同時，采用UV法測定樣品溶出度。結果見表2。

表2 2種方法測定阿替洛爾片溶出度結果比較（%）

3 討論

2015年版《中國藥典（二部）》中阿替洛爾片的溶出度檢測采用UV法。按法定方法測定阿替洛爾片的含量為97.9%，而溶出百分含量卻超出120%，結果不合理。因該制劑的適應面局限，本中心共抽到2個廠家4批次樣品，所有批次的溶出度均出現不同程度的不合理高值。按本研究中方法進行測定，溶出度值均顯著降低。

對對照品溶液進行全波長掃描，阿替洛爾在226 nm與275 nm波長處有最大吸收，且226 nm波長處的吸光度約為275 nm波長處的8倍，故UV法測定阿替洛爾片含量時均選用226 nm波長。提取溶出樣品中雜質的光譜圖，此雜質在226 nm波長處具有很強的末端吸收。對于沒有分離功能的UV法，無法排除雜質的干擾，測定值常虛高，無法反映溶出樣品本身效果，存在較大的質控風險。比較發現，對于UV法測定溶出度值較高的溶出樣品，其液相色譜的雜質峰面積也相應較大。

為進一步探討阿替洛爾片溶出樣品中的雜質，以溶出介質配制相同質量濃度的樣品溶液，按本研究方法測定，并未檢出此雜質。這說明該雜質并非是藥物輔料或溶出介質引入，而是溶出過程中新產生的物質。與穩定性試驗不同的是，溶出過程是在37℃下進行，溶出樣品在自動收集系統中與管路充分接觸，這些都增加了新物質產生的可能性。有文獻報道，阿替洛爾原料與某些輔料或輔料中的雜質存在相容性問題[5-6]，溶出過程的特殊環境是否啟動了某些化學反應還有待進一步研究。綜上所述，本研究中建立的阿替洛爾片溶出度測定方法，簡單，快速，準確，專屬性強，可有效控制阿替洛爾片的溶出效果。