常用急性免疫性肝損傷動物模型研究進展

于春萍　李若飛　付子杰　蘭丁璇

【摘? 要】肝臟作為主要代謝器官在機體中發揮重要作用。而肝病的發生率一直居高不下，病毒性肝炎在肝病中占據重要的地位，因此選取合適的肝損傷模型，對病毒性肝病的發病機制的研究、篩選較為有效的保肝藥物、探索其保肝原理以為臨床治療病毒性肝炎提供醫學基礎具有十分重要的意義。

【關鍵詞】急性免疫性肝損傷;動物模型;刀豆蛋白;脂多糖;卡介苗

【中圖分類號】R575????? 【文獻標識碼】A????? 【文章編號】1004-7484（2020）09-0062-01

1.刀豆蛋白A（Con A）

Con A是一種植物血凝素，具有很強的促有絲分裂作用，可作為一種T細胞絲裂原。ConA具有很強的嗜肝性，在體內經代謝后，產物仍具有活性并且可入侵免疫系統，從而導致免疫系統特異性殺傷肝臟細胞導致肝臟細胞壞死。此后，藥物修飾蛋白從細胞中溢出，枯否細胞、巨噬細胞及 B 細胞等抗原提示細胞對其進行吞噬，分解為小分子多肽。多肽分子溢出并存留于細胞表面，T細胞分化群（CD4+T）細胞對其進行識別，T細胞被激活，分泌并釋放多種細胞因子，在較短的時間內產生大量中性粒細胞 、巨噬細胞 、T細胞等炎癥性細胞，浸潤小鼠肝臟細胞，進而導致肝臟損傷。李紅^[1-2]等人采用給C57/BL小鼠尾靜脈注射劑量為12mg/kg的Con A處理8小時后造模成功;單瑩瑩^[3-4]等人給ICR小鼠尾靜脈注射40mg/kg的Con A，8小時后處死造模成功。造模成功的小鼠可見精神萎靡，活動減少，蜷臥，抱團，豎毛等身體特征，另外（丙氨酸氨基轉移酶）ALT、（天門冬氨酸氨基轉移酶）AST等肝功能指標升高，IL- 10、IL- 2、IL- 12、TNF-α、C- 干擾素等炎癥因子水平升高，與正常組存在顯著性差異;從肝臟的病理學觀察可見小鼠肝臟淤血腫大，呈現暗紅色，肝組織可見少量炎性細胞浸潤;脾臟淤血腫大。Con A引起的動物肝損傷模型與人類病毒性肝炎引發的免疫性肝損傷的病理生理過程相似，此模型有助于我們對病毒性肝炎的病理過程及藥物治療等進行研究。Con A有較強的劑量依賴性，隨著劑量的加大，肝損傷的程度也越嚴重。另外，Con A肝毒性專性高，能夠特異性的損傷肝臟細胞，并未發現對脾、心等肝外器官的損傷。并且刀豆蛋白誘導的小鼠免疫性肝損傷因為不需要預先致敏還具有操作簡單迅速的特點。

2.卡介苗和脂多糖

①脂多糖引發小鼠急性肝損傷模型建立

脂多糖（LPS）產生于革蘭氏陰性菌，進入血液循環后，先天免疫系統被激活，導致大量的炎癥因子釋放。程訸等人用腹腔注射LPS（8、15、20 mg/kg）證明LPS可成劑量依賴性導致小鼠急性肝損傷，導致小鼠肝臟產生炎性腫大，肝臟中央靜脈周圍易受損部位出現大量炎癥細胞，對肝細胞造成損傷從而引起血清中谷氨酸轉移酶（ALT）、天冬氨酸轉移酶（AST）水平上升。張曉慧^[3]等人采用小鼠禁食不禁水24 h后腹腔注射LPS （10 mg/kg） 構建肝損傷模型。在腹腔注射LPS 4 h， 摘眼球取血，進行一系列肝功能及病理學檢測，結果顯示肝功能水平明顯升高，肝小葉周圍中央靜脈去由于最易受到損傷而表現出細胞凋亡壞死， 肝細胞索正常形態遭受破壞， 導致大量肝細胞壞死， 胞核固縮并向周圍擴散或完全溶解破碎， 細胞發生空泡樣變及被炎癥細胞浸潤，同時表現出抗氧化能力明顯降低，TNF-α、IL-1β、IL-6、iNOS等炎性因子明顯升高，上述結果顯示此方法對小鼠急性肝損傷造模成功。脂多糖造成的急性肝損傷模型重復性好，簡單易行，可直接作用或間接作用的造成肝細胞損傷，且其誘導的肝臟細胞壞死在重癥病毒性肝炎的發生發展進程起到重要作用。

②BCG注入小鼠體內首先激活敏性T淋巴細胞，并且大量集中于肝臟;隨后注射LPS后進一步使致敏的巨噬細胞激活，促使致敏的肝臟細胞釋放大量細胞的導致小鼠急性免疫性肝損傷的因子，如一氧化氮、腫瘤壞死因子、白細胞介素、白三烯等。邱英峰^[4]等人采用給SD大鼠腹腔注射BCG劑量5 .0×10 ⁷ 菌數鼠 +LPS劑量30μg/kg可達到很好的造模效果。陳偉平等人給予小鼠BCG 5mg/2ml， 12 d后， 注射LPS 7.5g/0.2ml以誘導免疫性肝損傷模型， 禁食12 h后取血處死，達到很好的造模效果。肝臟損時，血清中ALT 、AST的含量明顯升高、肝組織中丙二醛 （MDA）明顯升高 、還原型谷胱甘肽 （GSH） 水平明顯降低。肝組織病理切片可見產生大量中、重度炎性細胞^[5]。卡介苗和脂多糖的聯合使用得到的大鼠模型相較于卡介苗以及脂多糖的單獨使用效果明顯，模型簡便易行持續時間相對來說時間久。

討論：

目前急性肝損傷的造模方法已有多種類型，但是急性免疫性肝損傷的造模方法相對于其他化學性肝損傷數量較少，仍存在諸多不足，并且致病機制復雜尚未完全闡明，所以尋找合適的造模方法具有十分重要的意義。本文總結了常用并且較為成熟的急性免疫性肝損傷的造模方法，以為后續的科學研究提供方便。

參考文獻

[1]單瑩瑩，王佳燁，王曉麗，于佳卉，王春梅，李賀，孫紅霞，張成義，陳建光，孫靖輝.Con A建立小鼠急性免疫性肝損傷模型研究[J].北華大學學報（自然科學版），2019，20（01）：55-58.

[2]李紅，于慧杰，盛國光.刀豆蛋白A誘導的C57BL/6J小鼠急性免疫性肝損傷模型的研究[J].中西醫結合肝病雜志，2016，26（02）：93-95+131.

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[4]邱英鋒，繆曉輝，王俊學，張瑞祺，蔡雄，倪武.卡介苗加脂多糖建立大鼠急性免疫性肝損傷模型的研究[J].實驗動物科學與管理，2004（03）：15-19.

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