常用化學性急性肝損傷動物模型研究進展

李若飛　于春萍　蘭丁璇　付子杰

【摘? 要】目前肝病的發生率高并在逐年上升，肝病的病理機制和治療方案始終是國內外研究熱點問題。研究肝病時選擇一種較為合適的肝病模型是極為重要的，本文對目前研究中常用的化學性急性肝損傷動物模型的發病機制、造模方法、模型特點以及檢測方法等進行綜述，為急性肝損傷的研究提供便捷。

【關鍵詞】化學性肝損傷;動物模型

【中圖分類號】R285.5? ????【文獻標識碼】A? ????【文章編號】1004-7484（2020）09-0232-02

1、四氯化碳（CCl₄）

近年來對CCl₄所致肝損傷的研究一致認為，其發病機制主要是自由基代謝產物的形成以及其引發的鏈式過氧化反應^[1]。CCl₄進入體內后，在細胞色素酶的催化下產生自由基，這些自由基與細胞膜上的磷脂等大分子物質共價結合，產生脂質過氧化反應，進而破壞細胞膜的結構和功能。這些自由基還會使細胞膜和線粒體膜上鈣泵活性受到抑制，細胞內外鈣失衡，從而造成肝損傷。給小鼠單次腹腔注射0.1%CCl₄溶液10 ml/kg，16小時后可誘導急性肝損傷發生^[2]。四氯化碳是目前最常用的肝損傷模型制備的化學性藥物，能有效造成肝細胞損害，成模率高，且在進行多次實驗時模型能夠能夠很好地重現，但CCl₄毒性較大，揮發性很強，可經皮膚、口鼻等多途徑傳播，危險性高。當肝細胞受損時，血清中的谷丙轉氨酶（ALT）、谷草轉氨酶（AST）的含量將會大大升高，而發生脂質過氧化反應會使體內超氧化物歧化酶（SOD）含量下降，丙二醛（MDA）水平升高。以上指標在發生肝損傷時變化靈敏，可作為造模是否成功的依據，另，也可通過觀察肝組織病理形態學變化及一些分子生物學方法來判斷肝受損情況等。以下介紹的幾種化學性肝損傷模型的建立亦可用以上檢測方法。

2、D-氨基半乳糖（D-GaIN）

D-氨基半乳糖（D-GaIN）可損害肝細胞質膜，形成細胞內復合物，消耗尿苷三磷酸，使肝細胞出現炎癥壞死。D- GalN 也可使肝細胞內鈣失衡，線粒體功能被抑制，加速產生氧自由基，使肝損傷加劇^[3]。目前造模方法多樣，有學者對小鼠一次性腹腔注射 500mg/kg GalN，處理24小時后造成急性肝損傷模型。脂多糖聯合D - 氨基半乳糖具有更強的肝毒性，肝細胞壞死后，肝臟對內毒素的解毒能力降低，從而使肝損傷加重。有學者給SD大鼠腹腔注射20 μg/kg LPS 聯合400 mg/kg D - GalN ，12h后造模成功。D-GalN造模穩定性好，肝毒性專性高，且對實驗人員無危害。但該模型具有不可逆性，并且D-GalN價格較為昂貴，限制了其應用。

3、對乙酰氨基酚（AP）

AP又稱為撲熱息痛，是常用的解熱鎮痛藥，可當其過量應用時，體內代謝產生的NAPQI不能被完全清除，NAPQI可與生物大分子共價結合，使一些具有巰基的蛋白質被氧化和芳基化，從而使它們的生理功能下降或改變。 AP在代謝過程中同樣會在酶的催化作用下產生自由基，發生鈣失衡產生肝毒性。吳洋東等人給小鼠注射AP（200mg/kg）40h后造成急性肝損傷模型。過量AP可有效導致肝損傷，且不損害其他組織和器官，是造模常用的化學性藥物。

4、硫代乙酰胺（TAA）

TAA進入體內后，可在細胞色素酶的作用下被代謝氧化，由此產生的氧化物可進一步代謝為一系列中間產物，結合肝臟大分子物質，使肝細胞不能發揮正常功能，從而導致炎癥和壞死。有研究表明，一次性腹腔注射TAA（100mg/Kg），16小時后可造成急性肝損傷。TAA多用于急性肝損傷模型，該模型的重復性好，造模方法較為成熟，可行性高，肝功能指標變化敏感顯著，較為常用。

5、α- 萘基異硫氰酸酯（ANIT）

ANIT可使肝細胞壞死，阻塞膽管，使膽汁淤積，膽紅素升高，導致動物急性黃疸型肝損傷。沈軼瑤等人在SD大鼠禁食18h后一次灌胃100mg/KgANIT造成急性肝損傷;黃正明等一次性給予大鼠腹腔注射15%ANIT（50 mL/kg）成模。ANIT可致動物急性黃疸型肝損傷，是研究退黃藥物的理想模型。

6、二甲基亞硝胺（DMN）

DMN具有肝毒性、基因毒性和免疫毒性，可使肝竇內皮細胞（ SECs ）、肝星狀細胞（ HSCs）、肝實質細胞等受到不同程度的損害，出現肝內皮損傷致出血性壞死，組織破裂。研究表明，一次性給予靜脈注射DMN（15μL/kg）后造成小鼠急性肝損傷。DMN肝毒性強，用藥后常會引起肝纖維化等更加嚴重的肝病發生，故少用于造成急性肝損傷模型。DMN是尋找和開發治療肝纖維化的藥物所用的理想模型，但其揮發性強，對實驗人員有一定的毒性危險性。

7、異煙肼（INH）

異煙肼（INH）導致急性肝損傷可能是因為其代謝產物與細胞內的大分子物質共價結合結合使肝細胞受損。大劑量應用異煙肼時，其代謝后產生的肼不能被有效清除，從而誘導自由基產生以及脂質過氧化反應，造成肝損傷。有學者給予小鼠80mg/Kg異煙肼，18h后造模成功。異煙肼聯合利福平大劑量應用同樣可以造成急性肝損傷。異煙肼是臨床上治療結核的一線用藥，大劑量服用可致肝損傷，是較為常用的急性肝損傷造模的方法之一。

討論

目前造成化學性肝損傷模型的研究已經取得很大的進展，對肝病研究也起到了巨大的推動作用，可我們還應看到，許多造模方法尚有不足之處，且肝損傷病理機制還未完全闡明，選擇較為合適的造模方法，還需更深入地研究。

參考文獻

[1]徐曉輝，袁江玲，徐磊等.常用急性肝損傷5種動物模型的病理組織學特點比較[J].疾病預防控制通報.2018，33（1）：12-15，95.

[2]黃娜娜，孫蓉.適宜于中藥抗急性肝損傷活性發現與藥效評價的動物模型應用概況[J].中國藥物警戒.2015，（11）：669-673.

[3]金明，高峰，金梅花等.祁州漏蘆對D-氨基半乳糖所致小鼠急性肝損傷的保護作用[J].食品研究與開發.2016，37（2）：1-3.