結直腸癌患者血清中免疫相關因子的表達水平及臨床意義

郭小艷

(陜西省西安市第九醫院 腫瘤內科, 陜西 西安, 710054)

結直腸癌(CRC)是臨床最為常見的惡性病癥之一。2015年，中國CRC的發病率和病死率已位居惡性腫瘤的前5位，并呈現明顯上升趨勢[1-4]。CRC的發病機制目前尚未完全明確，然而多個研究[5-6]發現, CRC的發生發展與機體慢性炎癥反應及免疫功能紊亂或缺陷關系密切。炎癥因子是免疫細胞產生的調節機體免疫功能、在細胞間傳遞信息的活性物質。機體長期亞臨床炎癥或免疫功能紊亂導致機體內環境紊亂，進而誘發腫瘤[7]。本研究擬通過測定CRC患者外周血自然殺傷細胞(NK細胞)、CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-含量及血清腫瘤壞死因子-α(TNF-α)、干擾素-γ(IFN-γ)、白細胞介素(IL)-2、IL-22、IL-8等免疫相關因子水平，探究各指標在CRC臨床診斷、病理進程及預后判斷中的臨床意義。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選擇2015年5月—2018年8月本院腫瘤內科收治的80例CRC患者(腸癌組)、54例慢性腸炎患者(良性組)及36例健康志愿者(健康組)作為研究對象, 3組入選者均自愿簽署知情協議書。腸癌組男55例，女25例，年齡42～75歲，平均(58.58±5.61)歲; 良性組男37例，女17例，年齡45～72歲，平均(58.66±5.59)歲; 健康組男25例，女11例，年齡48～75歲，平均(58.41±5.66)歲。腸癌組患者均經病理學及影像學檢查確診，且未接受手術切除或其他輔助治療, TNM分期為Ⅰ期17例、Ⅱ期37例、Ⅲ期15例、Ⅳ期11例; 良性組患者則被確診為慢性腸炎; 健康組志愿者心、肝、脾、腎、肺等臟器無重大疾病，且無家族腫瘤史。3組入選者性別、年齡分布比較，差異無統計學意義(P>0.05), 可行組間對比分析。

1.2 研究方法

入選者均于清晨空腹條件下取肘靜脈血樣5 mL, 用于外周血NK細胞及T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-含量測定，并用于血清免疫相關因子TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8水平測定。外周血NK、CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-測定采用流式細胞儀[貝克曼庫爾特商貿(中國)有限公司，型號DxFLEX]; 血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8均采用酶聯免疫吸附法(ELISA)測定，所用試劑盒均購自上海基免實業有限公司，檢測過程均嚴格按照試劑盒說明書進行。

1.3 統計學處理

本研究數據采用SPSS 17.0統計學軟件進行處理。3組患者性別、年齡分布行均衡性檢驗; 3組外周血免疫細胞及血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8比較行單因素ANOVA分析; CRC病變程度與外周血免疫細胞及血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8相關性采用非參數Kruskal Wallis秩和檢驗分析。檢驗因子為α=0.05, 以P<0.05為差異有統計學意義。

2 結 果

2.1 3組受試者外周血NK細胞及T淋巴細胞亞群含量比較

3組受試者外周血NK細胞、CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-比較，差異具有統計學意義(P<0.05)。與健康組相比，良性組和腸癌組患者外周血CD8+、CD8+CD28-含量顯著上升，NK細胞、CD3+、CD4+含量顯著下降(P<0.05); 與良性組相比，腸癌組CD8+、CD8+CD28-含量顯著上升，NK細胞、CD3+、CD4+含量顯著下降(P<0.05)。見表1。

表1 3組外周血NK細胞及T淋巴細胞亞群含量比較 %

NK細胞: 自然殺傷細胞。與健康組比較, *P<0.05; 與良性組比較, #P<0.05。

2.2 3組受試者血清免疫相關因子水平比較

3組受試者血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、L-22、IL-8水平比較，差異具有統計學意義(P<0.05)。與健康組相比，良性組和腸癌組患者血清TNF-α、IL-22及IL-8水平均顯著上升，而血清IL-2和IFN-γ水平顯著下降(P<0.05); 與良性組相比，腸癌組TNF-α、IL-22及IL-8水平顯著上升，血清IL-2和IFN-γ水平顯著下降(P<0.05)。見表2。

表2 3組受試者血清免疫相關因子水平比較 pg/mL

TNF-α: 腫瘤壞死因子-α; IL-2: 白細胞介素-2; IFN-γ: 干擾素-γ; IL-22: 白細胞介素-22; IL-8: 白細胞介素-8。

與健康組比較, *P<0.05; 與良性組比較, #P<0.05。

2.3 CRC患者免疫相關指標與臨床分期的相關性分析

不同臨床分期CRC患者外周血NK細胞與T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD8+、CD8+CD28-含量及血清TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-22、IL-8比較，差異具有統計學意義(P<0.05), 從TNMⅠ期到TNMⅣ期，患者外周血CD8+、CD8+CD28-含量和血清TNF-α、IL-22、IL-8水平呈顯著升高趨勢, NK細胞、CD3+、CD4+含量和IL-2、IFN-γ水平呈顯著下降趨勢。見表3、4。

表3 不同臨床分期CRC患者外周血NK細胞及T淋巴細胞亞群含量比較 %

NK細胞: 自然殺傷細胞。與TNMⅠ期比較, *P<0.05; 與TNMⅡ期比較, #P<0.05; 與TNMⅢ期比較, △P<0.05。

表4 不同臨床分期CRC患者血清免疫相關因子水平比較 pg/mL

TNF-α: 腫瘤壞死因子-α; IL-2: 白細胞介素-2; IFN-γ: 干擾素-γ; IL-22: 白細胞介素-22; IL-8: 白細胞介素-8。

與TNMⅠ期比較, *P<0.05; 與TNMⅡ期比較, #P<0.05; 與TNMⅢ期比較, △P<0.05。

3 討 論

腫瘤的發生發展不僅與細胞內基因異常表達有關，而且與細胞所處微環境密切相關，腫瘤宿主免疫狀況則是微環境之一，被認為是惡性腫瘤發生的溫床，而T淋巴細胞則屬于腫瘤微環境的重要成員。腫瘤細胞逃避免疫監測可對T淋巴細胞的浸潤、活化及效應功能等產生強烈抑制作用，從而使患者產生免疫耐受，最終引發無效免疫應答及惡性腫瘤進展。

T細胞依據表面抗原的不同分為CD3+、CD4+、CD8+等，其中CD3+數量代表患者機體總免疫狀態; CD4+為輔助性T淋巴細胞，可協助B細胞分泌抗體，輔助機體完成抗腫瘤性免疫應答; CD8+則為抑制機體免疫功能的T淋巴細胞, CD4+/CD8+穩態則是反映機體免疫穩定的重要指標。CD8+T細胞依據是否表達CD28分為細胞毒T細胞和CD8+CD28-調節性T細胞，前者是重要殺傷細胞，后者是具有正負調節功能的免疫細胞。NK細胞是無需MHC即可發揮腫瘤殺傷作用的特殊細胞群體，其在抗腫瘤免疫應答中同樣具有重要作用。邱海波等[8]報道顯示, CRC患者外周血NK細胞、CD3+、CD4+、CD4+/CD8+含量均顯著低于健康對照人群; 張泉等[9]報道稱, CRC患者CD4+T細胞陽性率僅為32.65%, 顯著低于健康人群的90.00%和腺瘤患者的43.75%; 嚴健等[10]報道顯示，與健康對照者相比，肺癌、消化道腫瘤及其他腫瘤患者外周血T淋巴細胞亞群CD3+、CD4+、CD4+/CD8+含量顯著下降。這些結果均與本研究結果具有一定相似性，即與健康組相比，良性組和腸癌組患者外周血CD8+、CD8+CD28-含量顯著上升, NK細胞、CD3+、CD4+含量顯著下降; 與良性組相比，腸癌組CD8+、CD8+CD28-含量顯著上升, NK細胞、CD3+、CD4+含量顯著下降。隨著腫瘤的不斷惡化，外周血T淋巴細胞亞群的變化越明顯，表明CRC患者處于細胞免疫功能抑制狀態，機體對腫瘤細胞的識別、殺傷能力下降，導致機體免疫穩態失衡，從而造成腫瘤細胞加速生長，病情出現惡化。吳佳茗等[11]報道, CRC患者外周血CD3+細胞表面抗程序性死亡因子-1(PD-1)表達陽性率顯著高于健康志愿者，腫瘤組織中陽性率顯著高于癌旁正常組織，且越是分化程度低、發生淋巴轉移、Huke分期越高的患者外周血中表達陽性率越高。元龍等[12]報道, CRC患者腫瘤組織及外周血中CD4+細胞中PD-1和T細胞免疫球蛋白黏附蛋白結構域相關分析-3(Tim-3)比例明顯升高，認為該現象是CRC病情進展的機制之一。

TNF-α、IL-2、IFN-γ是由Th1細胞分泌的免疫相關分子。其中, TNF-α可與細胞膜上相應受體結合，從而引發機體炎癥及免疫調節反應，是目前為止發現的腫瘤殺傷力最強的活性因子，特定情況下，其可直接誘導腫瘤細胞凋亡，同時也可通過活化機體caspase信號通路，誘導腫瘤上皮細胞死亡，從而發揮抗腫瘤功效。腫瘤微環境中TNF-α過表達是諸多癌性病變的共同特征，其水平通常與患者預后密切相關。李緒彤等[13]報道, CRC癌變組織中TNF-αmRNA表達顯著高于癌旁正常組織，且其表達量與淋巴轉移、細胞分化及臨床分期均有顯著相關性。IL-8是Th2細胞克隆分泌，可抑制Th1細胞對IFN-γ和IL-2的合成和分泌，目前發現，其與支氣管原位癌、肺癌等多種惡性腫瘤的發生發展密切相關。IL-2主要由T細胞或T細胞系產生，控制T細胞增殖、凋亡，調控機體免疫反應。文坤明等[14]研究顯示, CRC淋巴轉移發生與血清IL-2水平呈明顯負相關。IFN-γ具有較強的免疫調節功能，能增強抗原遞呈細胞功能。腫瘤組織中, IFN可使細胞內mRNA表達水平升高，提高基因翻譯轉錄效率，誘導腫瘤相關抗原表達，從而增強機體對腫瘤細胞的免疫識別殺傷作用。范義湘等[15]報道顯示，IFN-γ可通過上調CRC患者細胞系CEA表達，增強腫瘤細胞對標記抗體的攝取。IL-22是主要由CD4+細胞中的Th22細胞分泌的細胞免疫因子，此外Th1、Th17細胞也可產生IL-22。李樹斌等[16]報道, CRC患者CD4+細胞中Th22含量顯著增加，且晚期患者高于早期患者，而患者血清IL-22含量具有相同變化趨勢; Jiang等[17]研究顯示，高水平IL-22可通過活化STAT3, 上調STAT3下游效應分子等過程，促進免疫缺陷型小鼠機體內大腸癌細胞生長; 此外, IL-22還可通過活化分裂原活化蛋白激酶(MAPK)通路，促進腫瘤發生發展[18]。

綜上所述，機體T淋巴細胞及免疫相關因子TNF-α、IL-2、IFN-γ、IL-22、IL-8在CRC的發生發展過程中扮演著重要角色，臨床可通過檢測外周血T淋巴細胞亞群含量及Th細胞分泌性免疫相關因子的變化，實現對CRC的預測、診斷及預后判斷，以便在腫瘤初期即可進行有效干預，降低腫瘤患者的臨床病死率。