豬瘟免疫抗體及病原檢測情況

摘要：臨床上豬瘟病毒病在豬群中傳播感染與豬體內免疫抗體水平有一定關系。為進一步探討豬瘟免疫抗體和病原之間的關系，此次研究選擇使用ELISA檢測技術和RT-PCR檢測技術，分別對某規模化養殖場隨機采集的57頭母豬新鮮血清樣品和扁桃體樣品進行了豬瘟抗體水平檢測和病毒檢測，檢測結果顯示豬瘟抗體陽性率為74.07%，離散度為41.79%，平均抗體阻斷率為54.38%，表明該養殖場的豬瘟抗體陽性率剛達到國家規定的相關標準，抗體離散度顯著升高。臨床上豬體內豬瘟病毒抗體水平和豬瘟病毒之間傳播存在一定聯系，但不論豬群豬瘟疫苗免疫是否合格，均會存在豬瘟感染的可能，某些野毒株會導致豬群內產生大量患病豬，在今后養殖中，要為養殖戶制定更加詳細、針對化的防控方案，以提高免疫效果，降低疫病發生可能。

關鍵詞：豬瘟病毒;免疫抗體;病原檢測

中圖分類號：S858.28 文獻標識碼：B doi：10.3969/j.issn.2096-3637.2019.08.007

0 引言

豬瘟是由豬瘟病毒感染引起的一種急性熱性高度接觸性病毒性傳染性疾病，豬是該種病毒的唯一傳播宿主。不同年齡和品種的豬均可以感染該種病毒。患病豬和帶毒豬是養殖場的主要傳染源，患病豬和健康豬直接接觸能實現病毒的快速傳播蔓延。患病豬能直接通過口腔、鼻腔、分泌物和尿液糞便排毒。近年，我國動物防疫高度重視豬瘟疫苗免疫接種，在很大程度上控制豬瘟疫病的流行和傳播。但近年，隨著疫苗免疫接種普及度不斷增加，豬瘟發病呈現新的流行特點，慢性豬瘟、非典型性豬瘟在生豬養殖主產區域時有發生，呈現地方流行或散發流行，豬瘟仍然是規模化養殖場需要重點防控的病毒性疾病。為進一步掌握豬瘟免疫抗體和病毒檢測情況，選擇了一個曾經發生過豬瘟的規模化養豬場，隨即采集了該養殖場57頭母豬的血清樣品和扁桃體樣品進行豬瘟抗體水平檢測和病毒檢測，希望通過本次研究為規模化養豬場控制豬瘟疫病提供科學依據，現將具體研究內容介紹如下。

1 材料與方法

1.1 材料

選擇山東省某規模化養殖場養殖的57頭母豬，并保證57頭母豬進行了豬瘟疫苗免疫，免疫期在1個月以上，采集57頭母豬的新鮮血清樣品和扁桃體樣品。本次抗體水平檢測與病毒檢測所選擇的試劑盒均來自于省級動物實驗室。在整個試驗中，主要會應用到96孔酶標儀、冰箱、高速冷凍離心機、梯度PCR儀器、電泳儀、紫外線凝膠成像儀[1]。

1.2 方法

首先，豬瘟抗體水平檢測。豬瘟抗體水平檢測采用ELISA檢測技術，選擇使用豬瘟抗體檢測試劑盒，按照使用說明書的相關步驟進行操作。如果抗體阻斷率不小于40%，表示抗體呈陽性;阻斷率不大于30%，表示抗體呈陰性。阻斷率為30%～40%，應該在檢測結束后對該動物進行再次檢測。豬群中豬瘟抗體阻斷率超過40%達到100%，或者超過50%達到85%，離散度小于25%，表示所選擇的母豬群豬瘟抗體水平較高，免疫效果較好。離散度如果為25%～40%表示免疫效果一般。其次，豬瘟病毒檢測。豬瘟病毒檢測選擇使用RT-PCR檢測技術，試驗操作過程按照試劑盒的使用說明書進行。整個反應過程包括94℃預變性4min，相同的溫度下變形45s，56℃環境退火45s，72℃環境下延伸1min，35個循環。72℃再延伸10min。整個試驗操作結束后，將反應物選擇使用1%的瓊脂糖凝膠進行電泳處理，最后選擇使用紫外線凝膠成像儀對檢測結果進行分析[2]。

2 結果

2.1 豬瘟抗體檢測

隨機采集曾經發生過豬瘟的某規模化養殖場的57頭母豬的新鮮血清樣品，選擇使用相應的檢測技術，對豬瘟抗體水平進行了有效檢測檢測，結果顯示豬瘟抗體陽性率為74.07%，離散度為41.79%，平均抗體阻斷率為54.38%。按照國家豬瘟強制免疫抗體陽性率的相關要求，母豬群的抗體陽性率應該維持在70%以上，這樣才能判定整個群體免疫合格。根據檢測結果可知，該養殖場的抗體免疫合格率剛達到合格標準，抗體離散度相對較高。

2.2 豬瘟病毒檢測

采用RT-PCR檢測技術對某養殖場的57頭母豬血液樣品和扁桃體樣品進行豬瘟病毒檢測，如果在272bp目的條帶出現一條特異性的條帶，則表示該頭母豬存在豬瘟病毒感染情況[3]，根據檢測結果顯示有3頭母豬已經感染了豬瘟病毒，豬瘟病毒陽性率為5.26%。因此，該養殖場的母豬雖然外表不存在任何發病情況，但存在豬瘟病毒隱性感染情況。由此也證明，隨著疫苗免疫接種頻率的增加，豬瘟呈現新的流行趨勢，呈現慢性發病或隱性發病，需要進一步加強監測，采取有效措施，切實防控豬瘟疫情的傳播蔓延。

2.3 豬瘟抗體水平與豬瘟病毒物流行傳播之間的關系

通過采取ELISA檢測技術和RT-PCR檢測技術，分別對某規模化養殖場隨機采集的57頭母豬新鮮血清樣品和扁桃體樣品進行豬瘟抗體水平檢測和病毒檢測，進一步分析了兩者之間的關系。結果表明，當母豬群體中豬瘟抗體阻斷率不大于30%時，豬瘟病毒的陽性率為14.3%;豬瘟的抗體阻斷率為30%～90%時，豬瘟病毒的陽性感染率僅為2%;豬瘟抗體阻斷率大于90%，豬瘟病毒陽性率會超過60%。由此可知，在生豬養殖中，無論豬群是否進行嚴格合格的疫苗免疫接種，豬群都可能感染豬瘟病毒。

3 討論

近年，隨著國家和地方對豬瘟免疫重視程度不斷提升，豬瘟疫情流行呈現新的流行特點，常呈現非典型經過，發病率降低，很多豬呈現帶毒情況。在生豬養殖中，種豬帶毒是導致豬瘟在豬群中傳播蔓延的主要原因。在生豬養殖中做好豬瘟疫苗免疫接種，不管是對當下還是將來防控豬瘟疫情都具有十分重要的現實意義。但隨著免疫接種頻率越來越高、接種越來越廣、防疫密度越來越強，在免疫次數增加和免疫劑量增加的情況下，豬瘟疫情仍未得到有效的控制，在很多地方常呈現地方流行和散發流行。近年，不少規模化養殖場的豬群免疫力呈現逐年下降的趨勢。本次研究所選擇的養殖場在2015年發生過一次豬瘟疫情，并進行嚴格的封鎖、隔離撲殺和凈化處理，并對養殖戶進行了宣傳教育，引導養殖戶定期對豬群進行疫苗免疫接種。但試驗結果顯示，該規模化養殖場母豬豬瘟抗體水平較低，抗體離散度相對較高，豬群個體之間的抗體水平存在很大差異性。

在生豬養殖中，為有效防范豬瘟疫情造成嚴重威脅，要指導發生過豬瘟疫情的養殖場進行嚴格的凈化處理。對豬群凈化是以種豬凈化為主，這是防控豬瘟疫情傳播蔓延的有效手段。目前豬群凈化方法主要包括抗體水平檢測和病原檢測2種。抗體水平檢測就是通過對豬群的抗體水平進行有效檢測，對首次檢測不合格的豬群進行強化免疫接種，免疫接種4周后采集該豬群的新鮮血清進行再次檢測，對于第2次檢測仍然不合格的豬將其淘汰處理。大量研究結果表明，對豬群中的毒株進行有效的淘汰和凈化處理，可以顯著提高養殖場母豬的繁殖能力和仔豬的成活率。而病原檢測主要選擇血清檢測方法，將攜帶有病毒的豬群檢測出來直接淘汰處理，并對檢測為陰性的豬群進行免疫強化。豬瘟病原檢測的方法多種多樣，主要包括熒光檢測法、RT-PCR檢測法。另外，大量研究結果表明處于隱性感染的母豬或持續感染豬瘟病毒會干擾母豬集體疫苗免疫效果，影響疫苗對動物機體的保護力。

4 結束語

母豬感染豬瘟病毒引起抗體水平變化是一個十分復雜的過程，需要進一步加強研究，深入探究抗體水平和病原感染之間的關系，以進一步制定針對性的防控措施，降低豬瘟疫病傳播流行概率，提高養殖效益。

參考文獻

[1]周秋平，黃紹明，黃章生，等.應用ELISA試驗檢測豬瘟免疫抗體[J].中國獸醫雜志，2006（10）：28.

[2]王興輝，蒙炳超，龔才偉，等.黔南州某種豬場豬瘟免疫凈化探索[J].中國畜禽種業，2017，13（8）：94-95.

[3]龔冬仙，周燈榮.規模豬場豬瘟免疫抗體的監測結果與啟示[J].浙江畜牧獸醫，2002（3）：27.

作者簡介：王篤華（1979-），女，山東諸城人，本科，獸醫師，研究方向：動物疚病診療。