核桃楸中檞皮素的提取

□ 牛春艷 李涔洋 宋艷芳 于佳樂 吉林農業科技學院食品工程學院

核桃楸為核桃加工中的廢棄物，其占核桃重量的近50%。本文以綠色、環保、資源節約為出發點，采用微波-酶法對核桃楸進行加工處理，從核桃楸中提取檞皮素化合物。不僅為核桃的進一步利用和開發提供了寶貴的依據，也對核桃加工廢棄物再利用問題進行解決和研究，使得大批量的核桃楸變廢為寶，為進一步的高效利用提供一定可靠的理論依據，具有一定的經濟效益和社會意義[1-4]。

1 試驗材料與方法

1.1 試驗材料與試劑

材料：核桃楸。

試劑：無水乙醇、亞硝酸鈉、氫氧化鈉、硝酸鋁（以上均為分析純）。檞皮素標準品（北京中偉質檢生物科技有限公司）。

1.2 試驗儀器與設備

TDL-4離心機（浙江佑寧儀器廠）、UV-721分光光度計（青島環球儀器有限公司）、Cary 60紫外光譜儀（安捷倫（科技）有限公司）、FLB-180A萬能粉碎機（常州柏羽藥化設備公司）、DHG-9240A恒溫干燥箱（宏遠實驗儀器有限公司）、BSA124S-CW電子分析天平（浙江廣發科技有限公司）、inyi08S-3超聲微波合成反應儀（山東海能科研儀器有限公司）。

1.3 核桃楸中總檞皮素的提取

1.3.1 工藝流程

核桃楸→清洗→烘干→粉碎→過篩→超聲波-微波輔助萃取→過濾→純化→分離→檞皮素

1.3.2 操作要點

（1）原料預處理：選取無霉斑、無腐爛、無變質的核桃楸，進行清洗，整理，平鋪放于干燥溫度90～100 ℃的干燥箱內烘干，待完全干燥后經粉碎機粉碎，過20目篩，得到核桃楸粉末，以留備用。

（2）提取：準確稱取2.00 g預處理后的核桃楸粉末，加入適量的乙醇溶液，按設定的不同條件進行提取。

（3）離心：將微波提取后的溶液，過濾后用離心機進行離心，并取出上清液。

（4）定容：將上清液在100 mL容量瓶進行定容，獲得總檞皮素提取液。

1.4 核桃楸總檞皮素得率的測定

1.4.1 檞皮素標準曲線的制作

分別取檞皮素標準液（0.25 mg/mL）2.00、4.00、6.00、8.00、10.00 mL于5個25.00 mL的容量瓶中，加入1.50 mL的NaNO2溶液充分搖勻，靜置 6 min，加入 1.50 mL 的 Al（NO3）3溶液進行搖勻，放置6 min后，加入10.00 mL的NaOH溶液搖勻，最后用濃度為30%的乙醇溶液定容，放置15～20 min后，在波長為510 nm處測吸光度，繪制標準曲線。

1.4.2 總檞皮素得率的計算

取核桃楸總檞皮素提液1 mL置于100 mL容量瓶中，乙醇定容。用標準曲線回歸方程得到檞皮素類化合物的質量濃度，其計算公式為：

式中：W—檞皮素類物質得率（%）；C—檞皮素類物質質量濃度（mg/mL）；N—稀釋倍數；V—提取液體積（mL）；m—核桃楸干粉量（g）。

1.5 正交試驗分析

以提取率作為參考指標，根據單因素試驗的結果，選取最優的提取時間、提取功率、料液比、乙醇濃度作為正交試驗因素，做L9(34)正交試驗。通過方差齊性分析確定其最佳工藝條件。

2 結果與討論

2.1 檞皮素標準曲線的制定

以紫外分光光度計進行掃描，510 nm處測得吸光度值，以空白為參比，橫坐標X為檞皮素濃度，縱坐標為Y吸光度值，繪制檞皮素標準曲線線經過計算得回歸方程為y=6.26x-0.1106 R2=0.997。其中x表示1,8-二羥基檞皮素濃度mg/mL；y表示在510 nm處測得吸光度值。結果顯示：在所測定1,8-二羥基檞皮素的濃度范圍與吸光度值所呈現良好的線性關系。

2.2 正交試驗確定最佳工藝條件

2.2.1 正交試驗因素與水平設計

本文在單因素試驗結果的基礎上，按L9(34)正交試驗表（見表1）提取核桃楸中總檞皮素，經分離、稀釋后，測定最大吸收處的吸光度值，從而求得得率。

2.2.2 正交試驗結果分析

結果表明，影響檞皮素提取率的因素次序分別是，提取時間＞料液比＞提取功率＞乙醇濃度。由極差分析可知，A2B1C3D2為最優提取工藝，但是在正交九組數據中沒有出現，在正交試驗結果表分析表（見表2）中可以看出A2B2C3D1的提取率最高，因此，需要對A2B2C3D1和正交表中得出的A2B1C3D2做驗證試驗，每組試驗做3次，取平均值。試驗結果見表3。

表1 正交試驗因素水平表

表2 正交試驗結果分析表

表3 驗證試驗結果分析表

由表3可知，試驗號為A2B2C3D1的提取率為5.9 5%，試驗號為A2B1C3D2的提取率為6.1%，因此檞皮素最佳提取條件為試驗A2B1C3D2，即提取時間為3 min、提取功率為500 W、料液比為1∶25（g/mL），乙醇濃度為45%。