木香順氣丸對脾虛胃潰瘍模型大鼠能量代謝和物質代謝的影響

劉 巖，劉志洋，王馨怡，孫光軒，段周通，李延璐

（長春科技學院，吉林 長春 130600）

胃潰瘍是臨床常見的消化系統疾病之一，其典型表現為饑餓不適、飽脹噯氣、泛酸或餐后定時的慢性中上腹疼痛，嚴重時可有黑便或嘔血。本病在中醫學中屬“胃脘痛”范疇，其主要病機是脾虛氣滯，以肝脾（胃）為主要病變臟腑，多由肝失疏泄，脾失健運，導致脾胃虛弱，氣機失調［1］。有研究表明，脾虛胃潰瘍的發生和自愈過程常伴隨能量代謝和物質代謝的異常［2］。

木香順氣丸是臨床上治療胃潰瘍的常用藥，主要由木香、砂 仁、醋 香 附、檳 榔、甘 草、陳 皮、厚 樸、枳 殼（炒）、蒼術（炒）、青皮（炒）、生姜等構成。具有行氣化濕，健脾和胃之功，用于濕濁阻滯氣機、胸膈痞悶、脘腹脹痛、嘔吐惡心、噯氣納呆［3］。目前，已有大量的臨床研究表明木香順氣丸對胃潰瘍有很好的療效，尤其是脾虛氣滯型［4-8］，但相關實驗研究的報道較少。本文以大黃法復制脾虛模型，再以醋酸法復制胃潰瘍模型［9］，考察木香順氣丸對脾虛胃潰瘍大鼠能量代謝和物質代謝的影響。

1 材料

1.1 動物 清潔級Wistar 大鼠，體質量180～220 g，6～8周齡，由遼寧長生生物技術有限公司提供，動物生產許可證號SCXK（遼）2010-0001。

1.2 試藥 大黃購于亳州亳藥堂藥業有限公司，質量標準符合2015 年版《中國藥典》要求。木香順氣丸購自山東孔圣堂制藥有限公司，批號 170407；西咪替丁片購自上海信誼天平有限公司，批號160838。Na+-K+-ATP 酶、琥珀酸脫氫酶（SDH）、細 胞 色 素C 氧 化 酶（COX）、丙 二 醛（MDA）、超氧化物歧化酶（SOD）、α-酮戊二酸脫氫酶（α-OGDC）及糖原磷酸化酶（GP）試劑盒均購自南京建成生物有限公司。

1.3 儀器 酶標儀（美國Thermo 公司）；電子分析天平［賽多利斯科學儀器（北京）有限公司］；低速臺式離心機（長沙湘儀離心機儀器有限公司）；可調式移液器和超純水機（德國Eppendorf 公司）；紫外分光光度計（上海UNICO公司）。

2 方法

2.1 造模藥物制備 稱取定量大黃加入10 倍量水，浸泡60 min，快速加熱至沸騰，煎煮10 min，傾出藥液，提取2次，合并2 次藥液，濾過、濃縮后制成2 大黃水提液（生藥量2 g／mL），4 ℃儲存備用。

2.2 分組、給藥 清潔級Wistar 大鼠，雌雄各半，體質量180～220 g，隨機分為5 組，分別為空白組、模型組、陽性藥組（0.09 g／kg 西咪替丁）及木香順氣低、高劑量組（2.49、4.98 g／kg），每組10 只。各組大鼠適應5 d 后開始給藥，除空白對照組外，其余4 組建立脾虛胃潰瘍模型。采用大黃苦寒瀉下法建立脾虛動物模型，每日灌胃給予2 g／mL的大黃水煎液，給藥容積為10 mL／kg，2 次／d，連續灌胃給藥14 d。脾虛造模成功后，采用醋酸涂抹法建立胃潰瘍模型。大鼠乙醚麻醉后剖腹，拉出全胃于胃底部用自制胃夾將塑料管固定于上，向管內注入冰醋酸0.1 mL，使其與腺胃部前壁漿膜接觸60 s，撤去胃夾，用生理鹽水清洗局部，逐層縫合，并再次進行消毒。涂抹術后24 h，按體質量分別灌胃給藥，西咪替丁組0.09 g／kg，木香順氣低劑量組2.49 g／kg，木香順氣高劑量組4.98 g／kg，模型組給予等容積生理鹽水，給藥容積為15 mL／kg，各組1 次／d，連續給藥10 d。

2.3 樣本收集 治療結束第2 天，將大鼠以1%戊巴比妥鈉（0.4 mL／100 g）腹腔注射麻醉，迅速剖開腹部，結扎胃的幽門部和賁門部，切斷食道及十二指腸，摘下全胃。切取腺胃部取組織，加生理鹽水，按胃組織∶生理鹽水=1∶9制備組織勻漿液，-80 ℃保存待用。從門靜脈注射4℃的生理鹽水，清除殘留血液，取出肝臟。切取部分右側中葉肝組織稱重，加生理鹽水，按肝臟∶生理鹽水=1∶9制備肝勻漿液，-80 ℃保存待用。

2.4 HE 染色 用4%多聚甲醛固定胃組織，梯度乙醇脫水，常規石蠟包埋切片，HE 染色，光鏡下進行組織形態學觀察。

2.5 生化指標檢測 Na+-K+-ATP 酶、SDH、COX、MDA、α-OGDC、SOD 及GP 水平測定，按照各個試劑盒使用操作，繪制標準曲線，進行統計分析。

2.6 統計學分析 采用SPSS 20.0 軟件進行處理，數據以（±s）表示，采用單因素方差分析（ANOVA）方法。以P＜0.05 表示差異有統計學意義。

3 結果

3.1 體征指標 造模結束后，造模大鼠出現體質量下降、便溏泄瀉、聚集蜷臥、皮毛晦暗、少動、反應遲緩。參考衛生部藥政司《中藥治療脾虛證的臨床研究指導原則》《實用中醫癥候動物模型學》以及文獻中介紹的中醫對脾虛的判斷標準，結果表明大黃造大鼠脾虛模型成功。

3.2 木香順氣丸對大鼠胃組織病理學形態的影響 空白組大鼠胃黏膜表面細胞完整，各層細胞排列規則且結構正常，無潰瘍性損害，未見萎縮、脫落或缺損；模型組大鼠胃黏膜有較嚴重損傷，有明顯組織細胞壞死和破損、脫落，黏膜下可見大量炎性細胞浸潤；陽性藥組大鼠胃黏膜破損情況有極大改善；木香順氣丸組大鼠胃竇部黏膜皺壁上皮排列整齊，雖有破損和部分脫落，但破損情況較模型組改善，無明顯炎細胞浸潤。見圖1。

3.3 木香順氣丸對大鼠肝組織Na+-K+-ATP 酶、COX 水平的影響 與空白組比較，模型組大鼠肝組織Na+-K+-ATP、COX 水平顯著降低（P＜0.01）；與模型組比較，陽性藥組能顯著升高Na+-K+-ATP 酶水平（P＜0.05），木香順氣丸高劑量組能顯著升高Na+-K+-ATP 酶、COX 水平（P＜0.05，P＜0.01）。見圖2。

3.4 木香順氣丸對大鼠肝組織α-OGDC、GP、SDH 水平的影響 與空白組比較，模型組大鼠肝組織α-OGDC、GP 水平顯著升高（P＜0.01），SDH 水平差異無統計學意義；與模型組比較，木香順氣丸高劑量組能顯著降低大鼠肝組織α-OGDC、GP 水平（P＜0.05，P＜0.01）。見圖3。

3.5 木香順氣丸對大鼠胃組織SOD、MDA 水平的影響 與空白組比較，模型組SOD 水平顯著降低，MDA 水平顯著上升（P＜0.05）；與模型組比較，木香順氣丸組能顯著提高SOD 水平，抑制MDA 水平（P＜0.05，P＜0.01）。見圖4。

4 討論

Na+-K+-ATP 酶維持細胞的離子梯度差，不僅使細胞膜內外離子水平處于平衡狀態，也調節細胞的體積和驅動某些細胞中糖和氨基酸的運送。Na+-K+-ATP 酶與ATP 的分解關系密切，酶活性的升高伴隨有ATP 消耗的增加［10］。細胞色素C 氧化酶（COX），即呼吸鏈復合物Ⅳ，位于呼吸鏈的末端，催化細胞色素的氧化，同時驅動ATP 的合成，是線粒體的標志酶，其酶活性的發揮對于維持線粒體結構和功能以及細胞能量的產生有非常重要的意義［11］。本研究結果顯示，脾虛胃潰瘍模型大鼠Na+-K+-ATP 酶、COX水平顯著降低，說明脾虛胃潰瘍大鼠出現能量代謝障礙，木香順氣丸能顯著升高脾虛胃潰瘍大鼠Na+-K+-ATP 酶、COX 水平，表明木香順氣丸能促進脾虛胃潰瘍大鼠能量代謝。

α-酮戊二酸脫氫酶（α-OGDC）是三羧酸循環第三個關鍵酶和重要調節點。能催化α-酮戊二酸氧化脫羧生成ACoA。在琥珀酸脫氫酶催化下，琥珀酸脫氫生成延胡索酸［12］。琥珀酸脫氫酶（SDH），是線粒體內膜的結合酶，是連接氧化磷酸化與電子傳遞的樞紐之一，為線粒體的一種標志酶。作為參與三羧酸循環的關鍵酶，琥珀酸脫氫酶是反映線粒體功能的標志酶之一［13］。本研究結果顯示，脾虛胃潰瘍模型大鼠α-OGDC 水平顯著升高，木香順氣丸能顯著降低脾虛胃潰瘍大鼠α-OGDC 水平，表明木香順氣丸可調節脾虛胃潰瘍大鼠物質代謝的紊亂。

糖原磷酸化酶（GP）催化糖原分解生成葡糖-1-磷酸，是糖原分解過程中的重要調節點［14］。肝糖原的合成與分解參與并維持著血糖濃度的相對穩定。當體內糖來源豐富和細胞中能量充足時，即合成糖原將糖儲存起來。當糖的供應不足或能量需求增加時，儲存的糖原即可分解為葡萄糖進入血液。研究結果顯示，脾虛胃潰瘍模型大鼠GP 水平顯著升高，木香順氣丸能顯著降低脾虛胃潰瘍大鼠GP 水平，表明脾虛胃潰瘍大鼠糖原分解加快，而木香順氣丸能調節脾虛胃潰瘍大鼠糖原代謝的紊亂。

圖1 木香順氣丸對大鼠胃組織病理學形態的影響（×200）

圖2 木香順氣丸對大鼠肝組織Na+-K+-ATP 酶、COX 水平的影響

超氧化物歧化酶（SOD）是生物體內重要的抗氧化酶，具有特殊的生理活性，是生物體內清除自由基的首要物質［15］。許多病理過程，包括胃潰瘍的形成，與氧自由基所致的細胞損傷密切相關。丙二醛（MDA）即血漿中脂質過氧化物的代謝產物，MDA 水平可反映機體內脂質過氧化物的程度，間接地反映出機體細胞受氧自由基攻擊的嚴重程度［16］。本研究結果顯示，脾虛胃潰瘍模型大鼠SOD 水平顯著降低，MDA 水平有升高趨勢；木香順氣丸能顯著升高脾虛胃潰瘍大鼠SOD 水平，降低MDA 水平。結果表明，木香順氣丸可通過抑制體內脂質過氧化和減少氧自由基對胃黏膜的損傷發揮抗潰瘍作用。

圖3 木香順氣丸對大鼠肝組織α-OGDC、GP、SDH 水平的影響

圖4 木香順氣丸對大鼠胃組織SOD、MDA 水平的影響

本實驗采用西咪替丁作為陽性對照藥，主要用于與木香順氣丸藥效學對比評價。在作用機制研究中顯示，西咪替丁可以通過提高Na+-K+-ATP 酶活力發揮作用。但是西咪替丁對于本實驗中其他的靶點作用相對不明顯，這也為藥物治療脾虛胃潰瘍模型作用機制有關陽性藥的選擇提供一定的依據。

綜上所述，木香順氣丸治療胃潰瘍與其調節能量代謝和物質代謝紊亂以及清除氧自由基機制有關。