調心安神針法預處理對缺血再灌注性心律失常模型兔的心肌保護作用

王長春，王 銳*，李明妍，郭 麗，崔華峰，陳新勇，韓 晶，徐 敏，王碧君，趙蒙蒙

（1.山東中醫藥大學附屬醫院，濟南 250011；2.山東中醫藥大學針灸推拿學院，濟南 250014）

缺血再灌注性心律失常是缺血心肌再灌注后引起的損傷，與氧自由基、細胞間耦聯、鈣離子、自主神經及體液系統等多種因素相關[1]。前期研究證實，調心安神針法可以調節心肌細胞Cx43磷酸化水平及心肌血管緊張素Ⅱ受體、β腎上腺素能受體的表達，明顯縮短室性心律失常的持續時間[2-4]。本實驗通過左冠狀動脈前降支結扎的方法制作兔RA模型，觀察調心安神針法對其血清CK-MB、LDH、SOD的影響，探討該針法對RA兔的心肌保護作用。

1 材料與方法

1.1 動物分組與造模 40只健康家兔，體重1.5～2.0 kg左右，雌雄各半，由濟南西嶺角生物科技有限公司提供，合格證號：SCXK（魯）20150001。按照隨機數字表法分為假手術組、模型組、針刺組、胺碘酮組，每組10只。再灌注性心律失常模型復制參照Reffelmann的方法，耳緣靜脈注射20%烏拉坦（4 mL/kg）全身麻醉，將呼吸機導管連接氣管插管，給予機械通氣，呼吸頻率30次/min，吸呼比1：1.5，通氣流量根據肺膨脹大小調整。開胸，在左冠狀動脈前降支上、中1/3交界處穿線、結扎，立即監測心電圖Ⅱ導聯T波、ST段的變化。以左室前壁發紺及心電圖ST段抬高≥0.5 mV為缺血標志。結扎40 min后，松開硅膠管，恢復左前降支灌流60 min?；謴托募⊙鞴嘧⒑?，抬高的ST段相對降低（＞50%），并且缺血區域心外膜顏色恢復紅潤。連續記錄心電圖至手術完畢。假手術組：穿線，不結扎，靜置100 min。針刺組：在造模7天前開始給予調心安神針法預治療，1次/d，共7 d。針刺組和模型組第8天造模取材。胺碘酮組：于再灌注即刻泵入胺碘酮（3 mg/kg溶于生理鹽水5 mL中），5 min泵入完畢。所有實驗均遵循國家實驗動物護理和使用指南進行。

1.2 針刺方法 參照中國針灸學會實驗針灸研究會制訂的“動物針灸穴位圖譜”，針刺靈臺、神道、內關、百會。靈臺、神道穴位于背部胸椎6、7及5、6棘突間，均向上斜刺5 mm，用震顫法快速小幅度行針1 min后起針；內關穴位于前臂下1/6折點處內側，橈、尺骨間隙中，雙側內關分別直刺5 mm，行針1 min后接電針治療儀，疏密波，刺激強度以家兔上肢出現輕微顫動為度；百會穴位于第7腰椎與第1薦椎棘突間，向后平刺5 mm。

1.3 檢測指標及方法 試驗結束后，取頸動脈血離心，取上清液，- 20℃冰箱凍存，酶聯免疫法檢測CKMB、LDH、SOD。

1.4 統計學方法 數據采集后，采用SPSS 19.0統計軟件進行統計。結果用均數±標準差（±s）表示，組間比較采用單因素方差分析，并進行方差齊性檢驗，以P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

各組家兔血清CK-MB、LDH、SOD含量比較，見表1。

3 討論

近年來，隨著缺血/再灌注（I/R）的治療進展，RA因其與心源性猝死密切相關[5]而逐漸引起人們的重視。研究[6]發現，RA的發生和發展是一個多因素相互作用的級聯反應，能量代謝障礙和再灌注后產生過多的活性氧簇（ROS）是再灌注損傷發生的主要病理生理基礎；大量ROS損傷生物膜，并使線粒體結構和功能受損，導致鈣超載，心肌細胞內鈣超載引起的觸發活動和再灌注后ROS的爆發導致的折返激動是RA發生的主要機制[7]。RA還與再灌注時間有關，時間過短，心肌電穩定性強；時間過長，則損傷大，導致電活動也喪失，二者均不易發生RA[8]。

表1 各組家兔血清CK-MB、LDH、SOD含量比較（±s ，n = 10）

表1 各組家兔血清CK-MB、LDH、SOD含量比較（±s ，n = 10）

注：與假手術組比較，# P＜0.01；與針刺組比較，△P＜0.05；與模型組比較，▲P＜0.01

組 別CK-MB/（ng/mL）LDH/（ng/mL）SOD/（U/mL）假手術組 16.17±4.32 69.30±14.39 111.38±10.23模型組 79.87±6.65# 321.02±14.16# 26.38±7.41#胺碘酮組 43.23±4.16#△▲ 176.49±16.89#△▲ 69.80±9.18#△▲針刺組 48.63±4.68#▲ 191.34±13.49#▲ 59.26±9.61#▲

CK和LDH是心肌細胞胞質中存在的兩類酶，當細胞膜通透性增加時，這些物質能透過細胞膜釋放到冠狀動脈中[9]。心肌酶的釋放量是缺血心肌損害程度的重要標志[10]，而心肌酶漏出是心肌缺血再灌注損傷主要表現之一[11]。SOD廣泛存在于組織細胞內,可通過自身氧化還原反應將毒性極強的超氧化物自由基陰離子O2-而岐化成無毒的O2和H2O2，是消除自由基對機體損傷的關鍵酶[12]。本研究發現，RA模型兔血清CK-MB和LDH含量均明顯升高，SOD含量明顯降低。

胺碘酮為一種常用的高效抗心律失常藥物[13]，對心肌細胞膜的鈉、鈣和鉀通道有抑制作用，可降低竇房結、普肯耶纖維的自律性和傳導性，特別對急性心梗后發生的室速是最有效藥物之一[14]。此外，胺碘酮也有擴張冠狀動脈，減少心肌耗氧量，及清除氧自由基，保護心肌細胞免受氧化損傷作用。本實驗結果顯示，胺碘酮能顯著降低RA模型兔血清CK-MB、LDH含量，提高SOD含量。

心肌缺血預適應（IPC）[15]對心肌具有強大的內源性保護作用，能顯著減少在隨后較長時間缺血后所引起的高能磷酸化合物的耗竭和心肌梗死面積，有效地減少心肌缺血再灌注損傷。近年來，IPC誘導因素發展到針灸預適應，即通過針刺預處理達到缺血預適應樣的作用。本實驗證實，調心安神針刺法預處理可明顯降低RA模型兔CK-MB、LDH水平，提高SOD水平。這可能是通過提高SOD活性，減輕自由基對細胞的損傷，減輕心肌超微結構破壞，促進離子通道功能恢復等多種途徑，從而恢復心肌正常收縮及傳導功能，實現針刺對RA心肌的保護作用。