HPLC測定山蠟梅葉及其制劑中6,7-二甲氧基香豆素含量

金賢武　黃平

【摘 要】目的：建立山蠟梅葉及其制劑中6，7-二甲氧基香豆素的HPLC含量測定方法。方法：采用Luna -C18色譜柱，以甲醇-0.1%乙酸水溶液（25：75）為流動相，等度洗脫，流速1.0mL·min-1，柱溫35℃，檢測波長340nm。結果：6，7-二甲氧基香豆素檢測濃度在4.176～208.8μg·mL-1內與峰面積呈良好的線性關系;平均加樣回收率、精密度、重復性、穩定性良好。結論：本試驗所建立的方法準確可靠、重復性好，可為山蠟梅葉及其制劑的質量控制提供科學的依據。

【關鍵詞】山蠟梅葉及其制劑;HPLC;含量測定;質量控制

中圖分類號： S685.99 文獻標識碼： A文章編號： 2095-2457（2019）27-0212-001

DOI：10.19694/j.cnki.issn2095-2457.2019.27.095

山蠟梅（Chimonanthus nitens Oliv.），又名毛山茶，是江西的道地藥材[1]。具有祛風解表、清涼排毒之功效[2]，其制劑臨床上常用于治療上呼吸道感染、小兒外感發熱等疾病，民間也常用于泡茶以治感冒[3]。近年來，香豆素、黃酮及生物堿類成分不斷從山蠟梅葉中被分離出[4]。本實驗以6，7-二甲氧基香豆素為指標成分，建立了山蠟梅葉及其制劑6，7-二甲氧基香豆素的含量測定方法，為山蠟梅葉及其制劑的質量控制標準的提升奠定了基礎。

1 儀器與試劑

1.1 儀器

Agilent Technologies1200液相色譜儀（上海甄準生物科技有限公司）;CPA225D型十萬分之一電子天平（德國賽多利斯）;KQ-500DE型數控超聲波清洗器（昆山市超聲儀器有限公司）。

1.2 藥品與試劑

對照品：6，7-二甲氧基香豆素（批號111740-200702）購自中國藥品生物制品檢定所，山蠟梅葉（江西佑美制藥有限公司，批號：20170905、20170904、20171116、zy0011712034、zy0011710026、zy0011710025），山蠟梅葉顆粒（江西佑美制藥有限公司，批號：180302、1701011、1803022）;甲醇為色譜純（Merck公司）;醋酸為分析純。

2 方法與結果

2.1 色譜條件

Luna -C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）;流動相甲醇-0.1%醋酸水溶液（25：75）;流速1.0mL·min-1，柱溫35℃，檢測波長為340nm;進樣量10μL。

2.2 溶液的制備

2.2.1 對照品溶液的制備

精密稱取6，7-二甲氧基香豆素10.44mg至50mL量瓶中，加甲醇至刻度，制成質量濃度為208.8μg·mL-1混合對照品溶液。

2.2.2 供試品溶液的制備

取山蠟梅葉及其制劑各約1.0g，置25mL量瓶中，加入甲醇10mL，稱重，超聲處理30min，冷卻，稱重，補失減重，即得。

2.3 系統適用性試驗

精密量取“2.2.1”h和“2.2.2”項下對照品溶液、供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件進樣測定，記錄色譜。見圖1。

2.4 線性關系考察

分別精密吸取“2.2.1”項下對照品0.2、0.5、.1.0、2.0、5.0、10.0mL至10mL容量瓶中，加甲醇定容至刻度。分別精密吸取10μL注入HPLC分析，以峰面積Y對進樣濃度X進行回歸方程計算，得回歸方程：Y=34.04X+3.01（r=0.9999）。表明6，7-二甲氧基香豆素在質量濃度4.176～208.8μg·mL-1范圍內與峰面積呈良好的線性關系。

2.5 精密度試驗

精密吸取“2.2.1”項下對照品，按（下轉第205頁）（上接第212頁）“2.1”項下色譜條件連續進樣6次。結果6，7-二甲氧基香豆素的RSD為1.17%。表明儀器精密度良好。

2.6 穩定性試驗

取同一批號（zy0011711030）供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分別在0、2、4、6、8、12、24h進樣分析。結果6 ，7-二甲氧基香豆素的RSD為1.63%。表明樣品24h內穩定。

2.7 重復性試驗

取同一批號（zy0011711030）樣品，按“2.2.1”項下方法平行制備6份供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分析。結果6，7-二甲氧基香豆素的RSD為1.81%。表明方法重復性良好。

2.8 加樣回收試驗

取已知含量（zy0011711030）樣品6份，每份約1.0 g，按約1：1的比例加入對照品，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分析，計算回收率，結果平均加樣回收率為99.16%，RSD為1.75%。

樣品含量測定

取不同批次樣品約1.0g，每個批次平行3份，按“2.2.1”項下方法制備供試品溶液，按“2.1”項下色譜條件分析，以外標法計算含量，結果見上表1。

3 總結

目前對山蠟梅葉及其制劑的質量控制研究報道較少，質量標準項下含量測定主要以黃酮類成分為指標成分[5]，為全面反映制劑的內在質量，本研究選擇了具有明確藥理作用的香豆素類化合物6，7-二甲氧基香豆素為指標成分，建立了山蠟梅葉及其制劑中6，7-二甲氧基香豆素含量的測定方法，為進一步完善山蠟梅葉及其制劑的質量控制標準提供了依據。

【參考文獻】

[1]李詒光，盧建中，陳杰，等.江西道地藥材山蠟梅葉質量標準的研究[J].中草藥，2010，41（5）：836-838.

[2]張尊敬，劉忠達.山臘梅的成分及藥理作用研究近況[J].浙江中醫雜志，2009，44（11）：849-850.

[3]李莎莎，舒任庚.山臘梅化學成分及藥理作用的研究進展[J].華西藥學雜志，2009，24（2）：198-200.

[4]黃贊興，舒任庚.山蠟梅葉化學成分研究[J].中藥材，2017，40（12）：2856-2858.

[5]聶韡，房海靈，黃麗莉.山蠟梅葉中3種黃酮類成分含量動態變化研究[J].江西農業大學學報，2013，35（2）：357-360.