野棉花醇提物鎮痛、抗炎、止瀉及安全性實驗研究

趙春梅 黃加文 肖茹月 楊和金 王自梁 楊鷗

摘要：目的 觀察野棉花醇提物的鎮痛、抗炎、止瀉作用及急性毒性研究。方法 采用小鼠醋酸扭體法、小鼠二甲苯耳廓腫脹、小鼠腸推進實驗，以及急性毒性試驗。結果 野棉花醇提物能減少醋酸所致的小鼠扭體反應次數，降低二甲苯所致小鼠耳廓腫脹度，可顯著抑制墨汁在小鼠小腸的推進運動。野棉花醇提物24h內小鼠灌胃給藥最小致死量為16.00 g/kg.bw（相當于生藥101.91 g/kg.bw），死亡率為10%;最大耐受量為13.60 g/kg.bw（相當于生藥86.62 g/kg.bw），死亡率為0%。結論 提示野棉花醇提物具有明顯的鎮痛、抗炎、止瀉作用，且具有一定毒性。

關鍵詞：野棉花醇提物;止痛劑;抗炎;抗腹瀉

中圖分類號：R285.5?? 文獻標志碼：A?? 文章編號：1007-2349（2019）09-0063-03

【Abstract】Objective：To observe the analgesic，anti-inflammatory，antidiarrheal effects and acute toxicity of wild cotton alcohol extracts. Methods：Mouse acetic acid writhing method，mouse xylene auricle swelling，mouse intestinal propulsion experiment and acute toxicity test were conducted. Results：The wild cotton extract could reduce the number of writhing reactions induced by acetic acid in mice，reduce the degree of swelling of mouse ear caused by xylene and significantly inhibit the advancement of ink in the small intestine of mice. The minimum lethal dose of mice fed with wild cotton extract within 24h was 16.00 g/kg. bw（equivalent to 101.91 g/kg. bw of crude drug）and the mortality rate was 10%. The maximum tolerated dose was 13.60 g/kg. bw（equivalent to 86.62 g/kg. bw of crude drug）and the mortality rate is 0%. Conclusion：It is suggested that the wild cotton alcohol extract has obvious analgesic，anti-inflammatory and antidiarrheal effects and also has certain toxicity.

【Key words】wild cotton alcohol extract，analgesic，anti-inflammatory，anti-diarrhea

野棉花（學名：Anemone vitifolia Buch.-Ham.）是毛茛科植物野棉花的根，銀蓮花屬多年生草本植物。分布于中國云南、四川西南部、西藏東南部和南部[1]。緬甸北部、不丹、尼泊爾、印度北部也有分布。生長于山地草坡、溝邊或疏林中。野棉花具有清濕熱，解毒殺蟲，理氣散瘀的功效。對野棉花的藥理作用研究極少，因此，本文對野棉花的乙醇提取物進行了藥理研究，探討其在鎮痛、抗炎、止瀉方面的藥理作用，為將來開發應用野棉花提供實驗依據，現將實驗結果報道如下。

1 實驗材料

1.1 藥物 野棉花醇提取物，由云南省藥物研究所提供，70%乙醇提取3次，減壓回收，干燥。提取率為15.7%。使用時用純水配制。藥效試驗給藥劑量以急性毒性試驗結果為依據確定。阿司匹林腸溶片，100mg/片，Bayer Schering Pharma生產，批號：BJ10778;云南白藥，云南白藥集團股份有限公司，批號：ZAA1323;冰醋酸，天津市天達凈化材料精細化工廠，批號：020112;二甲苯，廣東省化學試劑工程技術研究開發中心，批號：20090831。

1.2 動物 SPF級昆明種小鼠，雌雄各半，體重18～22 g，由廣東省醫學實驗動物中心提供。許可證號：SCXK（粵）2013-0002。小鼠分性別飼養于空調實驗室內，室溫（25±2）℃，相對濕度40%～70%，喂顆粒標準飼料，自由飲水和攝食。

1.3 統計方法 實驗結果以（x±s）（n）表示，n是每組動物數目。試驗數據采用SPSS 16.0統計軟件進行“Independent-Samples T Test”檢驗。

2 方法

2.1 鎮痛試驗 選用KM小鼠48只，雌雄各半，隨機分為4組，組別及劑量如表1，按照表1劑量ig給藥，每日1次，連續8 d。末次給藥后45 min，ip0.6%冰醋酸0.1 mL/10 g/只，記錄15 min內的扭體反應（小鼠出現腹部內凹、軀干與后肢伸張，臀部抬起反應為準）次數，并計算其抑制率。實驗結果見表1。

野棉花醇提物4.00 g/kg，8.00 g/kg 2組均能不同程度抑制醋酸所致小鼠扭體性疼痛，抑制率分別為：41.52%、63.50%，與空白對照組相比較具著性差異，顯示出鎮痛作用。

2.2 抗炎試驗 選用KM小鼠48只，按體重隨機分為4組，每組雌雄各6只，分組及給藥情況見表2。各組均預先每日灌胃給藥1次，連續9 d，對照組灌服等容量純水，各組灌胃容積均為20 mL/kg體重。末次給藥后30 min，各組小鼠于右耳兩面均勻涂抹二甲苯0.05 mL，左耳不涂為對照。致炎后1 h脫頸椎處死動物，用直徑6 mm的打孔器將雙耳同部位等面積切下，取耳片稱重，以兩耳片重量之差作為腫脹度。實驗結果見表2。

野棉花醇提物4.00 g/kg，8.00 g/kg兩個劑量均能不同程度抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，2組抑制率分別為：32.37%、35.30%，尤以8.00 g/kg劑量組作用明顯，與空白對照組相比較具有顯著性差異。顯示出抗炎作用。

2.3 腸推進作用研究 選用KM小鼠48只，小鼠按體重隨機分為4組：正常對照組、復方地芬諾酯片組、野棉花醇提物低、高劑量組。禁食12 h后，按劑量灌胃給藥1次，給藥30 min后，以0.2 mL/只給藥量灌服墨汁（5%的炭末溶于0.5%的羧甲基纖維素鈉）20 min后脫頸椎處死小鼠，打開腹腔，分離腸系膜，剪取自幽門至回盲部的小腸，測量小腸長度、推進距離（幽門到墨汁推進前沿距離）。結果見表3。

野棉花醇提物4.00 g/kg，8.00 g/kg兩個劑量均能顯著抑制墨汁在小鼠小腸的推進運動，2組抑制率分別為：83.42%、94.03%，4.0 g/kg，8.0 g/kg劑量組與空白對照組相比較差異顯著（P<0.001，P<0.001）。顯示出腸推進抑制作用。

2.4 小鼠急性毒性實驗

2.4.1 正式實驗 根據預實驗的結果，將KM小鼠60只隨機分為3組，即溶媒對照組和野棉花16.00 g/kg、13.60 g/kg.bw 2個劑量組，每組20只，雌雄各10只。動物禁食不禁水約6 h 2 min～6 h 45 min后，按40 mL/kg體重一次灌胃給予相應供試品，觀察其急性毒性反應和死亡情況，以后每天觀察1次，連續14 d;于給藥第4、7、14 d稱量體重;觀察結束處死動物，大體解剖觀察各動物臟器、器官的體積、顏色、質地等有無明顯異常。

2.4.2 結果與分析

2.4.2.1 毒性反應 小鼠灌胃給予供試品野棉花醇提物后，在4 h內出現毒性反應，主要表現為運動減少、俯臥等，死亡動物出現驚厥、抽搐、角弓反張等反應。至第2 d恢復。給藥組動物的毒性反應見表4。

2.4.2.2 死亡情況 觀察期內16.00 g/kg.bw雌性小鼠死亡1只，雄性小鼠死亡1只，死亡率為10%;13.60 g/kg.bw劑量組無小鼠死亡，死亡率為0%。

2.4.2.3 體重 試驗期間，給藥后第3、7、14 d，16.00 g/kg.bw劑量組雌、雄小鼠體重增長緩慢，與溶媒對照組比較具有顯著性差異;給藥后第3、7、14 d，13.60 g/kg.bw劑量組雄性小鼠體重增長緩慢，與溶媒對照組比較具有顯著性差異;給藥后第7、14 d，13.60 g/kg.bw劑量組雌性小鼠體重增長緩慢，與溶媒對照組比較具有顯著性差異。結果見表5。

2.4.2.4 解剖觀察 觀察14 d結束后脫頸椎處死的動物進行大體解剖觀察，肉眼觀察心、肝、脾、肺、腎、腎上腺、胸腺、卵巢、子宮、精囊、前列腺、睪丸、胃、腸及胸腔、腹腔，各組織和器官的體積、顏色、質地等，野棉花醇提物各劑量組、溶媒對照組各小鼠器官均無肉眼所見異常。

2.4.3 評價與結論 在本實驗條件下，對野棉花醇提物不同劑量進行24h內小鼠單次灌胃給藥急性毒性試驗，可見動物于4 h內出現毒性反應，主要表現為運動減少、俯臥等，死亡動物出現俯臥等反應。至第2 d恢復。試驗結束對存活動物進行大體解剖觀察，各組動物臟器、器官的體積、顏色、質地等均未見明顯異常。野棉花醇提物24 h內小鼠灌胃給藥最小致死量為16.00 g/kg.bw（相當于生藥101.91 g/kg.bw），死亡率為10%;最大耐受量為13.60 g/kg.bw（相當于生藥86.62 g/kg.bw），死亡率為0%。

3 討論

野棉花是云南民間常用藥。文獻記載野棉花具有清濕熱，解毒殺蟲，理氣散瘀的功效。主治泄瀉、痢疾、黃疸、瘧疾、蛔蟲病、蟯蟲病、小兒疳積、腳氣腫痛、風濕骨痛、跌打損傷、癰疽腫毒、蜈蚣咬傷，野棉花藥理作用的活性成分及其作用機制研究較少。為了探討和開發野棉花的藥用價值，筆者對其進行了鎮痛、抗炎、止瀉藥理作用的實驗研究。急性毒性實驗顯示，野棉花醇提物24 h內小鼠灌胃給藥最小致死量為16.00 g/kg.bw（相當于生藥101.91 g/kg.bw），死亡率為10%;最大耐受量為13.60 g/kg.bw（相當于生藥86.62 g/kg.bw），死亡率為0%。表明其具有一定毒性。野棉花能抑制醋酸所致小鼠扭體性疼痛，能抑制二甲苯所致小鼠耳廓腫脹，可顯著抑制墨汁在小鼠小腸的推進運動，說明野棉花具有腸推進抑制作用，具有鎮痛作用和抗炎作用。實驗結果為野棉花將來產品研發和臨床應用提供了科學依據。

參考文獻：

[1]國家中醫藥管理局《中華本草》編委會.中華本草[M].上海：上海科學技術出版社，1999.

（收稿日期：2019-06-05）