血清IL-28A和HMGB1在強直性脊柱炎中的表達及與疾病活動和療效的關(guān)系

李曉琴，段雨函

(恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院檢驗科，湖北 恩施 445000)

強直性脊柱炎(ankylosing spondylitis，AS)是一種以骶髂關(guān)節(jié)和脊柱附著點炎癥為主要癥狀的自身免疫性慢性疾病，可引起多器官損傷和殘疾，威脅人體健康，降低其生活質(zhì)量[1]。盡管近年來醫(yī)學(xué)技術(shù)發(fā)展迅速，但仍未確定其病因，且無根治方法；但就目前臨床診斷標準，大部分AS患者在確診時已進入穩(wěn)定期，失去治療最佳時機，因此尋找有效診斷指標，提高早期診斷率，延緩進展速度對AS患者十分重要[2]。白細胞介素-28A (interleukin-28A，IL-28A)是一種III型干擾素，在類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎、系統(tǒng)性紅斑狼瘡及系統(tǒng)性硬化癥等免疫性疾病發(fā)生發(fā)展中占有一定地位[3-4]。但對于IL-28A與AS的關(guān)系目前研究尚少。高遷移率族蛋白B1(high mobil ity group protein B1，HMGB1)是近年發(fā)現(xiàn)的一種重要炎癥因子，與急性肺炎、膿毒癥及關(guān)節(jié)炎等發(fā)病等密切相關(guān)[5-6]。本研究選取95例AS患者作為研究對象，探討IL-28A和HMGB1在強直性脊柱炎中的表達情況，并分析其與疾病活動及療效的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 臨床資料

選取2017年1月至2018年12月恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院收治的95例AS患者作為研究對象，納入標準：(1)符合1984年美國風(fēng)濕病學(xué)會修訂的AS紐約標準[7]；(2)入組前1月未給予任何治療者。排除標準：(1)合并炎癥性腸病、系統(tǒng)性紅斑狼瘡及類風(fēng)濕性關(guān)節(jié)炎等；(2)合并感染等其它活動性疾病者；(3)合并惡性腫瘤者；(4)依從性差者。將95例患者分為活動組(≥1.3)和穩(wěn)定組(<1.3)，分別為60例和35例?；顒咏M：男性50例，女性10例；年齡21～50歲，平均(41.74±8.92)歲；穩(wěn)定組：男性30例，女性5例；年齡20～50歲，平均(42.03±9.05)歲；活動組和穩(wěn)定組在性別及年齡等一般資料比較，差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。選取同期性別及年齡與其匹配的70例健康體檢者作為對照組。本研究所有研究對象均簽署知情同意書，并通過本院倫理委員會批準。

1.2 方法

1.2.1 治療方法 參考強直性脊柱炎的治療指南[8]，活動組患者給予塞來昔布膠囊(輝瑞制藥有限公司，規(guī)格：0.25 g×60片)和柳氮磺吡啶腸溶片(上海福達制藥有限公司，規(guī)格：0.2g×18粒)，后者起始劑量為1.0 g/d，每周增加0.5 g，最高為2.0 g/d，具體根據(jù)患者病情而定，維持此劑量治療3個月，并行病情評估。

1.2.2 檢測方法 采用SSTI II真空采血管抽取對照組和AS患者治療前后空腹靜脈血5 mL，4 000 r/min離心10 min，收集上清液保存于EP管中，并于-80 ℃冰箱保存，待所有標本集齊后一起檢測。采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)雙抗體夾心法檢測血清IL-28A和HMGB1水平，其試劑盒購自上海酶聯(lián)生物科技有限公司，具體操作步驟參考試劑盒說明書，儀器為瑞士tecan全自動酶標儀。

采用速率散射比濁法檢測CRP，儀器及試劑均為美國貝克曼公司產(chǎn)IMMAGE 800 型全自動特定蛋白分析系統(tǒng)及配套試劑，嚴格執(zhí)行本室SOP。

1.3 疾病活動度評分

ASDAS-CRP[9]是國際脊柱關(guān)節(jié)炎評價工作組針對AS癥狀提出的新的評價指標，須根據(jù)患者腰背痛、外周關(guān)節(jié)腫脹/疼痛、晨僵持續(xù)時間及患者總體評價及CRP計算獲得，ASDAS-CRP=0.073×外周關(guān)節(jié)腫脹/疼痛+0.121×腰背痛+0.058×晨僵持續(xù)時間+0.11×患者總體評價+0.579×Ln(CRP+1)。根據(jù)ASDAS-CRP值進行分類：(1)非活動期：<1.3；(2)1.3≤低度活動<2.1；(3)2.1≤中度活動<3.5；(4)高度活動：≥3.5。

1.4 統(tǒng)計學(xué)分析

2 結(jié)果

2.1 各組血清IL-28A和HMGB1水平比較

治療前活動組、穩(wěn)定組和對照組3組血清IL-28A和HMGB1水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表1。

2.2 血清IL-28A和HMGB1對AS的診斷效能

繪制ROC曲線(圖1)，與單項檢測比較，血清IL-28A和HMGB兩者聯(lián)合檢測明顯提高了AS特異度和敏感度。見表2。

表1 各組治療前血清IL-28A和HMGB1水平比較

表2 血清IL-28A和HMGB1對AS的診斷效能

2.3 血清IL-28A和HMGB1與AS疾病活動度的關(guān)系

經(jīng)ASDAS-CRP判定，活動組中，低度活動者、中度活動者和高度活動者分別為20例、35例和15例；治療前三者血清IL-28A和HMGB1水平比較，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表3。經(jīng)Pearson法分析得知，血清IL-28A和HMGB1與ASDAS-CRP值均呈正相關(guān)(P<0.05)，其r值分別為0.675和0.704。

表3 血清IL-28A和HMGB1與AS疾病活動度的關(guān)系

2.4 活動組血清IL-28A和HMGB1與AS療效的關(guān)系

與治療前比較，治療后活動組血清IL-28A和HMGB1均明顯降低，且差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表4。

表4 活動組血清IL-28A和HMGB1與AS療效的關(guān)系

3 討論

AS主要臨床特征是組織炎癥，但目前臨床缺少可量化其病變程度的可靠指標，多以CRP檢測和影像學(xué)檢測進行評估；前者與AS疾病活動度密切相關(guān)，在活動度及臨床療效評估上有一定價值，但對于部分低度活動期患者僅以局部組織炎癥為主，CRP變化不顯著；后者以核磁共振(MRI)效果最佳，可清晰判斷局部組織炎癥病變情況(肌腱端炎、滑膜炎、及骨髓水腫的有無、范圍及程度)，但對外周疾病活動度意義不大[10-11]。盡管近年各疾病分子機制研究火熱，但仍未發(fā)現(xiàn)一個既可反應(yīng)AS外周疾病活動狀態(tài)，又能提示組織炎癥病情情況的生物學(xué)指標。

IL-28A是由外周血單個核細胞和樹突狀細胞分泌的細胞因子，其基因結(jié)構(gòu)與IL-10類似，而氨基酸結(jié)構(gòu)則與干擾素(IFN)接近，Zhou等[12]將其命名為IFN-λ，與相應(yīng)受體結(jié)合發(fā)揮免疫調(diào)節(jié)作用，從而具有抗病毒及抗細胞增殖等功能。但關(guān)于其與自身免疫性疾病的關(guān)系尚不十分清楚。有學(xué)者發(fā)現(xiàn)，血清IL-28A與人過敏性哮喘病情惡化及嚴重程度密切相關(guān)；而在哮喘大鼠模式中也發(fā)現(xiàn)IL-28A通過調(diào)節(jié)肺樹突狀細胞功能，促進Th1細胞分化，從而抑制Th2介導(dǎo)的相關(guān)反應(yīng)，最終達到抑制氣道過敏的效果[13-14]。HMGB1是廣泛存在于真核細胞胞核內(nèi)的一種高度保守非組蛋白DNA結(jié)合蛋白，特別是在機體發(fā)生炎癥后，單核巨噬細胞和壞死細胞內(nèi)HMGB1增多，并通過蛋白質(zhì)非經(jīng)典途徑將其轉(zhuǎn)移至胞外，激活NF-B，啟動多種炎癥因子轉(zhuǎn)錄，從而促進多重炎癥反應(yīng)發(fā)生[15]。已有研究表明，HMGB1可反映多種其它類型關(guān)節(jié)炎的炎癥進展[16]。在本研究中，活動組和穩(wěn)定組血清IL-28A和HMGB1水平均明顯高于對照組，提示IL-28A和HMGB1在AS中高表達，表示其可能參與了AS的致病過程，可輔助診斷AS；為確認兩者在AS中的診斷價值，本研究繪制ROC曲線圖，發(fā)現(xiàn)單項檢測對AS均有一定診斷效能，而聯(lián)合檢測則可明顯提高其診斷效能，這與武樹朋等[17]研究基本一致，推薦臨床進行聯(lián)合檢測。本研究還發(fā)現(xiàn)活動組血清IL-28A和HMGB1水平明顯高于穩(wěn)定組，提示IL-28A和HMGB與AS疾病活動度密切相關(guān)。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)在活動組中，血清IL-28A和HMGB1水平從低度活度者到高度活度者依次升高，提示IL-28A和HMGB1與AS疾病活動嚴重程度相關(guān)。后經(jīng)Pearson法分析得知，血清IL-28A和HMGB1與ASDAS-CRP值呈正相關(guān)，與前述猜想基本吻合，這是因為HMGB1可刺激人單核/巨噬細胞系統(tǒng)，分泌大量IL-28A和CRP，而后者與HMGB1刺激濃度間有顯著劑量依賴性關(guān)系，最終達到維持并延長炎癥反應(yīng)的作用[18]。此外，本研究還發(fā)現(xiàn)治療后活動組血清IL-28A和HMGB水平明顯降低，說明其血清IL-28A與AS療效相關(guān)，有望成為評估AS的有效指標。

綜上，血清IL-28A和HMGB1在AS中高表達，與疾病活動度呈正相關(guān)，在AS診斷及療效評估上有一定價值。