白背毛木耳母種培養基碳源氮源研究

(漳州職業技術學院食品工程學院，福建 漳州 363000) (福建省漳州市農業科學研究所食用菌研究室，福建 漳州 363005)

毛木耳(AuriculariacorneaEhrenb)隸屬于擔子菌門(Basidiomycota)蘑菇綱(Agaricomycetes)木耳目(Auriculariales)木耳科(Auriculariaceae)木耳屬(Auricularia)[1,2]，素有“樹上海蜇皮”之美稱[3,4]，口感爽脆，味道鮮美，富含纖維素、蛋白質、氨基酸和真菌多糖，營養豐富，深受消費者喜歡。福建省漳州市一直以來都是國內白背毛木耳的主產區[5]，該地白背毛木耳年出口量占全國的90%左右，是福建省主要的出口創匯食用菌品種。菌種是種好菇的關鍵，菌種質量直接影響毛木耳產品的質量和產量。在毛木耳生產中，母種一般使用普通的PDA培養基。但毛木耳菌絲在PDA培養中基生長較慢，在培養基背面易產生黑色素，易老化，影響菌種質量。為此，筆者通過添加不同的碳源和不同氮源，分別探討了不同的母種培養基對菌絲長勢、菌絲濃密度、菌落邊緣的整齊度、氣生菌絲量的多少、菌絲顏色的影響，以篩選適宜毛木耳生長的最佳碳源、氮源，進一步確定生產中毛木耳最適宜的母種培養基配方。

1 材料與方法

1.1 供試菌株

供試菌株為‘漳耳43-28’，由福建省漳州市農業科學研究所食用菌室提供。

1.2 試驗方法

常規方法制備母種培養基，具體初篩和復篩配方分別如1.2.1、1.2.2所述。每個處理采用1個三角瓶，每瓶盛裝200mL培養基。培養皿用報紙包好，121℃滅菌20min。采用90mm的培養皿制作平板培養基。倒平板冷卻，每個培養皿倒入15mL培養基，每個處理4次重復，接種量為直徑為8mm的圓形菌種塊，菌種塊置于培養皿中央，25℃恒溫箱培養。

1.2.1 初篩配方

以生產上常用的母種培養基原料為試材，初篩配方共設計9個，以PDA培養基為對照。

碳源試驗配方4個：在基礎培養基(馬鈴薯200g/L，瓊脂20g/L，水1L)分別添加20g/L的葡萄糖(PDA)、20g/L蔗糖(PSA)、20g/L果糖、20g/L乳糖，即得配方1～4。

氮源試驗配方5個：在基礎培養基(馬鈴薯200g/L，瓊脂20g/L，水1L)分別添加20g/L蛋白胨、20g/L 牛肉膏、20g/L胰蛋白胨、20g/L硝酸銨、20g/L尿素，即得配方5～9。

1.2.2 復篩配方

根據初篩配方試驗篩選的碳源、氮源，再進一步設計5個復篩配方，以初篩表現最好的培養基PSA(配方15)以及培養基PDA(配方16)為對照。碳源配方設計葡萄糖、蔗糖不同的添加濃度，配方10～12分別為1/4葡萄糖+3/4蔗糖、1/2葡萄糖+1/2蔗糖、3/4葡萄糖+1/4蔗糖。氮源以蛋白胨為配方設計，配方13～14分別為蔗糖20g/L+蛋白胨10g/L、葡萄糖20 g/L+蛋白胨10g/L。

1.3 數據處理與統計分析

測量菌落半徑，求3次重復平均值，得到菌絲日平均生長速度：

菌絲日平均生長速度(mm/d)=菌落平均半徑(mm)/生長時間(d)。

同時觀察菌絲長勢，觀察菌絲濃密度、菌落邊緣的整齊度、氣生菌絲量的多少、菌絲顏色。

試驗數據采用EXCEL和DPS 15.10高級版軟件進行統計分析，采用最小顯著差數法(LSD)進行方差分析[6,7]。

2 結果與分析

2.1 培養基中碳源的篩選

從表1可以看出，毛木耳菌絲在這4種碳源培養基中均能生長，但在不同碳源培養基的表現有差異。菌絲生長勢強、菌絲濃密的配方，菌絲生長速度不一定快。從菌絲濃密度來看，葡萄糖、果糖作為碳源，菌絲生長情況較相似，表現為菌絲長勢強，潔白濃密，健壯有力，菌落邊緣整齊，氣生菌絲量正常。而蔗糖作為碳源的培養基，氣生菌絲量較少，菌絲較稀，但菌落邊緣整齊，菌落完整。乳糖作為碳源，菌絲生長相對較弱，菌絲稀疏。從菌絲生長速度來看，生長速度最快的為蔗糖，最慢的為乳糖。蔗糖的菌絲生長速度為4.56mm/d，比對照提高4.83%。乳糖生長速度為4.09mm/d，比對照低5.98%。方差分析結果顯示，添加葡萄糖和果糖之間差異不顯著，而與添加其他2種糖類的差異顯著，蔗糖與乳糖之間差異也顯著。

表1 不同碳源毛木耳菌絲生長情況

注：菌絲長勢“+”到“+++ ”，表示長勢稀疏到濃密。表2同。

2.2 培養基中氮源的篩選

從表2可以看出，毛木耳菌絲在5種氮源培養基中的生長表現差異較大。總體來說，毛木耳對氮源的利用能力一般，表現最好的氮源是蛋白胨，其培養基中菌絲長勢相對較強，菌絲白，菌落邊緣不整齊，菌絲棉絮狀，氣生菌絲多，生長速度為3.64mm/d。其次是硝酸銨，菌絲表現長勢一般，菌落邊緣整齊，生長速度為3.38mm/d。排第三的是胰蛋白胨，與蛋白胨較相似，但菌落邊緣整齊，菌絲較密，菌絲生長速度為2.91mm/d。牛肉膏作為氮源，表現也較差，菌絲長勢一般，生長速度為2.82mm/d。在尿素作為氮源的培養基中，菌絲均不生長，說明毛木耳菌絲不能利用。相比于有碳源培養基，毛木耳在無碳源培養基中的菌絲長勢、菌絲生長速度等都差很多。方差分析結果顯示，添加蛋白胨與添加其他氮源的差異顯著，添加牛肉膏、胰蛋白胨之間差異不顯著。

表2 不同氮源下毛木耳菌絲的生長情況

注：菌絲長勢“+”到“++ ”，表示長勢稀疏到濃密，“-”表示菌絲未生長。

2.3 復篩試驗

在初篩試驗中，從碳源來看，就菌絲長勢而言，最好的是果糖、葡萄糖，菌絲潔白濃密，但接種塊易老化，長滿皿半個月后，接種塊菌絲開始吐黃水。菌絲生長速度最快的是蔗糖，而且不易老化，同樣是滿皿半個月，不會出現吐黃水現象，但菌絲濃密度不如葡萄糖，較稀。從氮源來看，加入蛋白胨并沒有提高菌絲生長速度，但添加蛋白胨之后菌絲較濃密，菌絲量多，與添加葡萄糖對比，也不易老化。

基于此，本研究設計5個優化的培養基配方(配方10～14)處理進行復篩，以PSA、PDA培養基為對照。從表3可以看出，不同復篩配方的培養基對白背毛木耳菌絲生長速度以及長勢有一定影響。添加了蛋白胨的培養基，菌絲長勢良好，菌絲更加濃密潔白，健壯，但菌絲生長速度明顯變慢，在PDA、PSA培養基中添加蛋白胨，菌絲生長速度分別為4.29mm/d、4.30mm/d，比PDA、PSA分別降低1.83%、4.02%。

在復合的碳源培養基中，菌絲表現較好，且隨著葡萄糖添加量的增加，菌絲越濃密，氣生菌絲多。雖然各個處理差異較小，不顯著。但從菌絲生長速度、菌絲長勢、成本等方面綜合考慮，在生產上碳源的選擇建議采用1/4葡萄糖+3/4蔗糖的配方。

表3 不同復篩配方下毛木耳菌絲的生長情況

3 討論

1)不同碳源氮源對‘漳耳43-28’菌絲生長的影響主要表現在生長速度和長勢2個方面。供試的4種碳源都可以作為白背毛木耳菌絲生長的碳源，但對菌絲生長速度和長勢表現有所不同。以葡萄糖、果糖為碳源的培養基，菌絲濃密潔白，長勢強，說明葡萄糖、果糖作為單糖，容易被菌絲分解、吸收利用[8]。但生長速度一般，均為4.35mm/d，而以蔗糖為碳源的培養基，菌絲日均生長速度最快，達到4.56mm/d，菌落完整，但菌絲較稀。說明菌絲生長濃密程度呈現與生長速度不同的結果[9,10]。

2)以蛋白胨、牛肉膏、胰蛋白胨、硝酸銨、尿素作為氮源時，白背毛木耳菌絲的生長速度和長勢存在差異。表現最好的為蛋白胨，日均生長速度最快(3.64mm/d)，菌落完整、菌絲較白，但氣生菌絲呈棉絮狀。試驗中發現在以尿素作為氮源的培養基上，菌絲基本不生長，說明菌絲幾乎不能利用尿素。這可能是因為尿素在分解過程中產生了未知的有害物質影響了菌絲生長，或者是試驗中尿素2%的添加量太高，尿素在滅菌過程中分解成氨氣，氨氣大量聚集，抑制菌絲生長[11]。相比于碳源配方，氮源配方的菌絲的長勢、菌絲生長速度等都差很多。這可能是因為白背毛木耳菌絲生長階段需要的碳素營養較多，說明菌絲生長階段產生同化碳源物質的酶系或酶的活力強于同化氮源的酶。

3)在復篩試驗中，在PDA、PSA的培養基添加蛋白胨，菌絲生長速度受到抑制，但可以增強菌絲長勢，促進菌絲分支。復合碳源中，各處理間表現差異較小，但綜合菌絲生長速度、菌絲長勢、成本等方面，在生產上碳源的選擇建議采用1/4葡萄糖+3/4蔗糖的配方，即馬鈴薯200g/L、葡萄糖5g/L、蔗糖15g/L、瓊脂20g/L。