兩頭尖藥材的紫外光譜鑒別研究

趙麗茹，李金花，路曉玉，曲 帥，趙利利，蔡廣知

（1.吉林省生物研究所，吉林 長春 130012；2.長春中醫藥大學，吉林 長春 130017）

兩頭尖藥材為毛茛科植物多被銀蓮花Anemone raddeana Regel的干燥根莖，性辛，熱；有毒。歸脾經。具有祛風濕，消癰腫的功效[1]。其主要化學成分有皂苷類、內酯類、揮發油和油脂類等[2]。研究表明其具有顯著的抗腫瘤、抑菌、抗炎鎮痛、鎮靜、抗鎮靜等作用[3]。臨床上被廣泛應用，如被患者熟知的中成藥活絡丹、再造丸，它們的主要成分就是兩頭尖藥材[3]。筆者研究團隊在兩頭尖藥材的質量研究方面做了許多工作，包括兩頭尖的HPLC指紋圖譜研究[4]，用HPLC-ELSD法測定了中藥兩頭尖中竹節香附素A[5]。其他文獻中關于兩頭尖藥材質量研究方面的報道很少。尤其在光譜鑒別方面，尚未見報道。本文首次采用紫外光譜法對兩頭尖藥材進行鑒別。

紫外指紋圖譜技術具有簡便、快速等特點，近年來被廣泛應用于中藥材的質量鑒別方面。紫外吸收光譜曲線的峰形、峰高、峰面積有一定的差異，可以將不同產地藥材的紫外光譜的指紋特性進行比較，從而對不同產地藥材進行分析鑒別。如陳先良等[6]對不同產地的杜仲進行了紫外光譜鑒別研究。此外通過比較紫外圖譜的差異，還能快速簡便的鑒別藥材的種類，鑒別不同藥材的炮制品等。如楊天偉等[7]對不同產地、種類牛肝菌進行了紫外光譜鑒別分析。紫外指紋圖譜在中藥鑒別等方面有了廣泛的應用，但在兩頭尖藥材鑒別方面的應用卻未見報道。本文利用紫外光譜技術對不同產地的兩頭尖藥材進行測定，圖譜比對，首次建立了兩頭尖藥材的紫外光譜指紋圖譜的共有模式，為更好的、更快速的評價兩頭尖藥材的質量提供了依據。

1 材料與儀器

1.1 試藥與試劑

甲醇（分析純）、正丁醇（分析純）、乙醇（分析純）。

1.2 儀器

TU-1810型紫外分光光度計（北京普析通用儀器有限責任公司）

AB-135-S 型電子天平（梅特勒-托利多儀器上海有限公司）

1.3 中藥兩頭尖藥材

兩頭尖藥材經長春中醫藥大學肖寄平教授鑒定均為毛莨科植物多被銀蓮花Anemones raddeanae Regel的干燥根莖，其產地詳情見表1。

表1 兩頭尖藥材產地

1.4 混淆品

包括3個混淆品：天葵子、九節菖蒲、香附。

2 實驗方法

2.1 樣品的處理

取兩頭尖藥材粉末（過80目篩）約2.5 g，置于帶蓋錐形瓶中，加入70%乙醇10倍量，超聲40 min后，過濾，即得。

2.2 光譜條件

掃描波長范圍：500 nm～190 nm

比色皿：石英比色皿

空白：甲醇溶液

2.3 提取條件優選

2.3.1 提取溶劑的選擇

2.3.1.1 提取溶劑類型的優化

本實驗分別取甲醇、乙醇、正丁醇三種溶劑，按照2.1項下方法處理，結果乙醇提取的溶液在190～500 nm波長范圍內有明顯的紫外吸收峰，而且吸收峰數量多于其它溶劑提取液，因此，用乙醇作為最佳提取溶劑。

2.3.1.2 提取溶劑濃度的優化

分別取100%、70%、50%三個濃度的乙醇溶液，按照2.1項下方法處理，結果50%乙醇提液，難以濾過，100%和70%乙醇提取液，紫外吸收峰的個數和吸收強度沒有明顯差別。結合節能等綜合因素考慮，選擇70%乙醇作為最終的提取溶劑。

2.3.1.3 提取溶劑劑量的優化

分別取10倍量、20倍量、30倍量70%乙醇，按照2.1項下方法處理，結果紫外圖譜差異不顯著。故選擇10倍量的提取劑量作為最佳選擇。

2.3.2 提取方法的選擇

選擇簡單回流、索氏提取、超聲提取，三種提取方式進行比較。結果三種提取方法的差別不太大，考慮操作的簡便性和時間成本，最終選擇超聲提取法。

2.3.3 提取時間的選擇

選擇20 min，40 min，60 min三個時間點來對超聲提取法的提取時間進行考察，結果顯示，提取20 min時藥材提取不夠充分，提取液的紫外吸收峰不明顯；超聲40 min和超聲60 min樣品提取效果相近，所以選擇超聲提取40min作為最佳提取時間。

2.4 方法學驗證[8]

取同—兩頭尖供試品溶液，按照選定的光譜條件，連續進樣5次，記錄紫外光譜譜圖中共有吸收峰的吸光度值，計算平均RSD值為1.034%（n=5）。由精密度試驗結果表明，本儀器的精密度良好。

2.4.2 穩定性考察

取兩頭尖供試品溶液，按選定的光譜條件分別在0，2，4，8，12，24h進行測定，記錄光譜圖，計算紫外光譜圖中共有吸收峰的RSD值為0.921%（n=6）。結果表明，樣品在12小時內穩定性良好。

2.4.3 重復性考察

取同—產地的的兩頭尖藥材五份，參照供試品溶液的制備方法，按照選定的光譜條件，連續測定5次，記錄光譜譜圖，計算紫外光譜圖中共有吸收峰的 RSD值為1.24%（n=5）。結果表明，本方法的重復性較好。

2.5 紫外光譜指紋圖譜的建立

2.5.1 兩頭尖藥材紫外的測定

取18批不同產地的兩頭尖樣品和3個混淆品，按照樣品溶液的制備方法進行處理，用紫外光譜儀測定，結果見圖1。

圖1 樣品的紫外光譜合圖

3 結果與討論

本文將18批不同產地的兩頭尖樣品和3個混淆品經過提取后，樣品溶液在500～190 nm的波長進行紫外光譜掃描測定。得出不同產地兩頭尖藥材和偽品的紫外光譜圖。正品藥材的紫外圖譜顯示，其主成分分別在238 nm、336 nm、344 nm左右有三個最大吸收峰。不同產地的正品兩頭尖藥材雖然產地不同，但是主要組成成分相似。只是不同圖譜的主要吸收峰的吸光度值略有差異。說明不同產地正品兩頭尖藥材的主成分大致相同，但是含量存在差異。而混淆品的紫外光譜圖表明，其圖譜形狀與正品圖譜明顯不同，由于其吸收波長跟正品的吸收波長差異明顯，說明通過紫外掃描圖的數據可以快速對樣品和混淆品進行鑒別。

本文采用紫外光譜法對兩頭尖藥材進行了鑒別研究。建立了正品兩頭尖藥材的紫外光譜指紋圖譜。通過方法學考察，本方法的精密度、重復性、穩定性都較好。可以作為鑒別兩頭尖藥材的可靠方法。