胃癌組織中microRNA-144-3p水平及與臨床病理特點和預后的關系

（義烏市中心醫院 病理科，浙江 義烏322000）

胃癌是胃黏膜上皮發生的惡性腫瘤，預后較差，對患者的生命健康造成嚴重威脅。近年來，隨著胃癌診療技術的不斷提高，胃癌的預后改善明顯，但胃癌早期診斷率比較低，使部分胃癌患者未能得到及時診治，導致胃癌的生存率不容樂觀[1]。探索影響胃癌發生、發展的標志物，并對其進行調控和干預，對早期防治胃癌和改善患者預后具有重要意義。MicroRNA（miRNA）在動植物中廣泛存在，可與mRNA特異性結合發揮轉錄后調控作用；miRNA在惡性腫瘤的發生、發展中具有重要作用[2-3]。miR-144-3p為miRNA的一種，在多種惡性腫瘤中呈低表達，其與惡性腫瘤細胞的增殖、凋亡、遷移及侵襲等關系密切[4-5]。本文對胃癌組織中miR-144-3p水平進行研究，探討其與臨床病理特點和預后的關系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

選取2011年1月—2013年12月在義烏市中心醫院進行手術切除的100例胃癌患者的胃癌組織及其癌旁組織標本。其中，男性59例，女性41例；年齡（63.24±5.26）歲；臨床分期：Ⅰ期32例，Ⅱ期24例，Ⅲ其33例，Ⅳ期11例；有淋巴結轉移49例，無淋巴結轉移51例；低分化28例，中分化38例，高分化34例。納入標準：①經病理證實為胃癌；②手術前未進行放化療及其他治療；③患者簽署知情同意書。排除標準：①合并其他惡性腫瘤；②重要臟器功能不全；③圍手術期死亡；④術后無法接受隨訪及中途退出；⑤臨床資料及隨訪資料不全。本研究通過醫院倫理委員會批準。

1.2 方法

胃癌組織和癌旁組織中miR-144-3p水平測定：取患者胃癌組織及癌旁組織標本（距離腫瘤組織邊緣≥5 cm），置于冰上用生理鹽水沖洗干凈，取部分組織標本在冰上研磨提取總RNA，測定總RNA的完整性和濃度。取總RNA 1μg逆轉錄為cDNA，采用實時熒光定量聚合酶鏈反應（quantitative real-time polymerase chain reaction, qRT-PCR）測定組織中miR-144-3p水平。以U6為內參照，qTR-PCR反應條件：56℃預變性2 min，95℃變性 10 min，95℃退火 15 s，60℃延伸 60 s，共42個循環，用2-ΔΔCT法計算miR-144-3p相對表達量。Hsa-miR-144-3p正向引物：5'-ACACTCCAGCTG GGTACAGTATAGATGATGTA-3'，長度32 bp；反向引物 ：5'-CTCAACTGGTGTCGTGGA-3'，長度 18 bp。U6反向引物：5'-CTGCTTCGGCAGCACA-3'，長度16 bp；反向引物：5'-TGGTGTCGTGGAGTCG-3'，長度16 bp。miR-144-3p引物及PCR試劑盒購自美國ABI公司。

1.3 隨訪

胃癌患者術后通過電話或門診隨訪，隨訪時間從手術時間開始至術后死亡時間或截止時間，截至時間為2018年12月31日。

1.4 統計學方法

數據分析采用SPSS 20.0統計軟件。計量資料以均數±標準差（±s）表示，比較用t檢驗；Kaplan-Meier法繪制生存曲線，比較用Log-rank χ2檢驗；影響因素的分析采用Cox比例風險模型，P＜0.05為差異有統計學意義。

2 結果

2.1 胃癌組織和癌旁組織中miR-144-3p水平比較

胃癌組織與癌旁組織中miR-144-3p分別為（0.53±0.12）和（1.00±0.11），經t檢驗，差異有統計學意義（t=28.872，P=0.000）；胃癌組織中miR-144-3p水平低于癌旁組織。見圖1。

2.2 胃癌組織中miR-144-3p水平與胃癌臨床病理特點的關系

不同臨床分期、淋巴結轉移及分化程度胃癌組織中miR-144-3p水平比較，經t檢驗，差異均有統計學意義（P＜0.05）；Ⅲ和Ⅳ期、有淋巴結轉移、中和低分化胃癌組織中miR-144-3p水平低于Ⅰ和Ⅱ期、無淋巴結轉移及高分化胃癌組織（P＜0.05）。不同年齡和性別胃癌患者miR-144-3p水平比較，經t檢驗，差異無統計學意義（P＞0.05）。見表1。

2.3 胃癌組織中miR-144-3p水平與胃癌預后的關系

100例患者術后隨訪5年，以miR-144-3p在胃癌組織中水平的中位數為界，分為低表達46例和高表達54例。miR-144-3p高表達者5年總生存率和無病生存率分別高于低表達者（77.8% VS 52.2%）（68.5%VS 45.7%）。miR-144-3p高表達者與低表達者5年總生存率和無病生存率比較，經χ2檢驗，差異有統計學意義（χ2=7.257和5.332，P=0.007和0.021）。見圖2、3。

2.4 影響胃癌預后因素的Cox比例風險模型分析

以胃癌組織miR-144-3p表達、年齡、性別、臨床分期、淋巴結轉移及分化程度為自變量進行胃癌預后的Cox多因素分析，結果顯示：miR-144-3p低表達、臨床分期、淋巴結轉移及分化程度為影響胃癌預后的獨立危險因素（P＜0.05）。見表2。

圖2 胃癌組織中miR-144-3p高低表達患者生存曲線

圖3 胃癌組織中miR-144-3p高低表達患者5年無病生存率

表2 影響胃癌預后因素的多因素Cox風險模型參數

3 討論

胃癌作為消化系統常見的惡性腫瘤，早期癥狀缺乏特異性，致使大多數患者確診時已為中晚期，嚴重影響患者的預后。隨著外科手術水平和放化療技術的不斷提高，胃癌的預后得到一定改善，但仍具有易轉移、高復發及預后差等惡性生物學特點[6-7]。因此，探索胃癌的早期診斷和預后標志物具有重要意義。

miRNA是在真核生物體內廣泛存在的一種微小RNA，與細胞增殖、分化、生長、凋亡及應激等多種生命活動關系密切，在維持機體生理平衡中具有重要作用[8]。miRNA雖然只占人類基因庫的2%，但可調控體內約30%基因表達，在不同組織和器官中的表達存在大量差異[9]。miRNA在惡性腫瘤的發生、發展中也具有重要作用，miRNA表達異常可引起靶基因表達異常，從而導致惡性腫瘤的發生、發展[10]。多種miRNA在胃癌的發生、發展及診治和預后中具有重要價值。如SHI等[11]研究發現，miR-373通過下調波形蛋白抑制胃癌轉移。WANG等[12]研究發現，miR-21抑制劑通過PTEN/PI3K/mTOR途徑調節胃癌細胞的生物學功能。ZHAO等[13]研究發現，miR-194和miR-29在胃癌診斷和預后中具有重要價值。DONG等[14]發現，miR-133a可直接靶向USP39抑制細胞增殖，并可預測胃癌的預后。

miR-144-3p具有多種生理和病理功能，在脂代謝尤其膽固醇逆行轉運中具有重要作用[15]。miR-144-3p在多種惡性腫瘤中表達異常，在多種惡性腫瘤的發生、發展及診斷和預后預測中具有重要價值[16]。如miR-144-3p可通過下調ARID1A促進腎透明細胞癌細胞增殖、轉移及舒尼替尼耐藥[17]；上調人肺癌細胞系H292中miR-144-3p引起細胞凋亡[18]；miR-144-3p通過絲裂原活化蛋白激酶信號通路靶向富含脯氨酸蛋白11的表達，誘導胰腺癌細胞的細胞周期阻滯和凋亡[19]；miR-144-3p在上皮性卵巢癌組織中低表達，與上皮性卵巢癌的直徑、病理分期、分化程度及淋巴結轉移關系密切。miR-144-3p可能參與上皮性卵巢癌的發生、發展過程，有望成為上皮性卵巢癌治療和預后的新靶點[20]。miR-144-3p在宮頸癌組織中低表達，與宮頸癌的臨床分期、分化程度及淋巴結轉移關系密切，miR-144-3p低表達可促進宮頸癌的發生、發展[21]。

miR-144-3p與胃癌的關系也受到大家關注，如LI等[22]研究發現，miR-144-3p通過靶向前白血病轉錄因子3，抑制上皮-間質轉化來抑制胃癌細胞的增殖、遷移及侵襲。呂弢等[23]研究發現，miR-144-3p靶向調控ABCG2信號通路影響胃癌細胞侵襲和遷移。但目前關于miR-144-3p和胃癌的研究主要集中在細胞水平。本文對胃癌組織中miR-144-3p水平研究發現，胃癌組織中miR-144-3p水平降低，miR-144-3p水平與胃癌的臨床分期、淋巴結轉移及分化程度關系密切。miR-144-3p低表達者的5年累積生存率和無病生存率較低，miR-144-3p低表達是影響胃癌預后的獨立危險因素，表明miR-144-3p可能在胃癌的發生、發展中具有重要作用，與胃癌患者的臨床病理特點和預后關系密切。

綜上所述，胃癌組織中miR-144-3p水平降低，miR-144-3p在胃癌的診斷和預后評價中具有一定的價值。