腦梗死患者血漿lncRNA-MALAT1水平與頸總動脈內(nèi)膜中層厚度的相關(guān)性研究

田金英，李 衛(wèi)

(河南科技大學(xué)附屬三門峽市中心醫(yī)院，河南 三門峽472000)

腦梗死是臨床最常見的腦血管疾病之一，具有發(fā)病率高、死亡率高、致殘率高等特點[1]。我國每年新增腦梗死患者200萬例，每年約有50-140/10萬人死于腦梗死，給我國居民健康構(gòu)成巨大威脅[2]。隨著人們生活方式的改變和老齡化程度加深，腦梗死發(fā)病率和死亡率有逐漸上升趨勢，給患者家庭和社會帶來巨大的經(jīng)濟(jì)壓力[3]。頸總動脈內(nèi)膜中層厚度(common carotid intima-media thickness,CIMT)能客觀反映動脈粥樣硬化程度，動脈粥樣硬化是腦梗死發(fā)生的重要病理基礎(chǔ)[4]。探究與CIMT有關(guān)的血液生物標(biāo)志對進(jìn)一步揭示腦梗死的發(fā)病機理有重要的意義。近年來研究表明長鏈非編碼核苷酸(lncRNA)在心血管疾病發(fā)生過程中發(fā)揮著重要作用[5]。已有研究表明lncRNA肺腺癌轉(zhuǎn)移相關(guān)轉(zhuǎn)錄本1(metastasis-associated lung adenocarcinoma transcript 1，lncRNA MALAT1)參與促進(jìn)動脈血管粥樣硬化和炎癥斑塊形成過程[6]，提示lncRNA MALAT1在動脈粥樣硬化形成過程發(fā)揮著重要功能。但lncRNA MALAT1在腦梗死患者血漿中的表達(dá)情況及其與患者CIMT的關(guān)系尚未見報道。本研究旨在探究腦梗死患者血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平與CIMT的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料

1.1.1臨床資料 選擇本院2015年10月至2017年4月收治的腦梗死患者94例為研究對象，作為腦梗死組?；颊吣?9例，女45例，年齡46-75歲，平均年齡(51.37±12.64)歲；并根據(jù)是否存在小血管病變(Small vessel disease，SVD)及大動脈病變(Large artery disease，LAD)，將94例腦梗死患者分為無SVD及LAD組30例、單純SVD組28例、單純LAD組21例及SVD合并LAD組15例。另以本院同期體檢健康者80名為對照組，其中男45名，女35名，年齡45-78歲，平均年齡(52.61±13.27)歲，兩組受試者性別、年齡等一般資料差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)?；颊呷虢M時統(tǒng)計并記錄兩組受試者吸煙、高血脂等一般資料。

1.1.2納入排除標(biāo)準(zhǔn) 納入標(biāo)準(zhǔn)：①腦梗死患者符合《中國急性缺血性腦卒中診治指南2014》診斷標(biāo)準(zhǔn)[7]并經(jīng)CT、MRI確診；②首次確診且生命體征穩(wěn)定；③患者及家屬對本研究知情同意并自愿參與；④經(jīng)本院醫(yī)學(xué)倫理委員會批準(zhǔn)通過。排除標(biāo)準(zhǔn)：①合并嚴(yán)重感染及內(nèi)分泌系統(tǒng)疾病、肺源性心臟病患者；②合并惡性腫瘤者；③外傷或血管先天畸形導(dǎo)致腦梗死；④近期使用過免疫抑制劑、避孕藥、抗凝劑、抗癲癇藥等。

1.2 方法

1.2.1血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平檢測 取兩組受試者空腹靜脈血5 ml，置于EDTA-K2抗凝管中，混勻后靜置20 min，3000 rpm離心10 min，將上層血漿轉(zhuǎn)移至新的離心管中，選用總RNA提取試劑盒(索萊寶公司生產(chǎn))提取兩組受試者血漿中總RNA，操作步驟按照試劑盒說明書進(jìn)行。RNA提取后電泳檢測其純度及完整性。以定量反轉(zhuǎn)錄試劑盒(TaKaRa公司)將2 μg無降解高純度RNA反轉(zhuǎn)錄為cDNA。熒光定量檢測反應(yīng)體系加配參考SYBR Green PCR master mix試劑盒(寶生物公司)說明進(jìn)行，引物由上海生工生物有限公司合成，引物序列見表1。加配完成后放入熒光定量PCR儀(Bio-rad cfx manager，Bio-rad公司)進(jìn)行反應(yīng)。反應(yīng)程序結(jié)束后收集實驗數(shù)據(jù)，LncRNA MALAT1以GAPDH為內(nèi)參基因，采用2-ΔΔCt算法計算兩組受試者血漿LncRNA MALAT1相對表達(dá)水平。

表1 qRT-PCR引物序列

1.2.2血生化指標(biāo)檢測 取兩組受試者空腹靜脈血，采用西門子ADVIA CHENMISTRY XPT 全自動生化分析儀，檢測血液中總膽固醇(total cholesterol,TG)、甘油三酯(triglyceride,TC)、高密度脂蛋白膽固醇(high density lipoprotein cholesterol,HDLC)和低密度脂蛋白膽固醇(low density lipoprotein cholesterol,LDLC)水平。

1.2.3CIMT檢測 采用Sonos 5000彩色多普勒超聲儀(美國Philips公司)，探頭頻率7.0 MHz，檢測部位選擇雙側(cè)頸總動脈，兩位高年資超聲醫(yī)生同時作超聲診斷。受試者取平臥，沿頸部動脈血管走向作縱切掃查。雙頸總動脈測量，從管壁的內(nèi)膜表面經(jīng)中層到中層與外膜相移行處的距離稱為CIMT。取兩側(cè)CIMT的平均值為CIMT值。

1.3 統(tǒng)計學(xué)方法

2 結(jié)果

2.1 兩組受試者一般臨床資料比較兩組受試者性別、年齡、BMI、吸煙史、糖尿病史、高血脂比例等比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。見表2。

表2 兩組受試者一般臨床資料比較

2.2 兩組受試者血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平比較腦梗死組患者血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平顯著低于對照組(P<0.05)。見表3。

表3 兩組受試者血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平比較

2.3 兩組受試者CIMT比較腦梗死組患者CIMT顯著高于對照組(P<0.05)。見表4。

表4 兩組受試者CIMT比較

2.4 腦梗死患者不同腦血管病變類型血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平及CIMT比較與無SVD及LAD組相比，SVD合并LAD組、單純LAD組及單純SVD組血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平顯著降低、CIMT明顯增厚，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與單純SVD組相比，SVD合并LAD組、單純LAD組血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平顯著降低、CIMT明顯增厚，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)；與單純LAD組相比，SVD合并LAD組血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平顯著降低、CIMT明顯增厚，差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05)。見表5。

表5 腦梗死患者不同腦血管病變類型血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平及CIMT比較

注：與無SVD及LAD組比較，aP<0.05；與單純SVD組比較，bP<0.05；與單純LAD組比較，cP<0.05。

2.5 腦梗死患者血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平與CIMT相關(guān)性分析Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，腦梗死患者血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平與CIMT呈負(fù)相關(guān)(r=-0.576,P=0.000)。見圖1。

圖1 腦梗死患者血漿lncRNA MALAT1表水平與CIMT相關(guān)性分析

2.6 腦梗死患者血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平與血脂水平的關(guān)系根據(jù)lncRNA MALAT1表達(dá)水平平均值將患者分為lncRNA MALAT1低表達(dá)組52例和高表達(dá)組42例。腦梗死患者血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平與TC有關(guān)(P<0.05)，與TG、HDLC、LDLC無關(guān)(P>0.05)，見表6。

表6 腦梗死患者血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平與血脂水平的關(guān)系

2.7 多重線性回歸分析影響腦梗死患者CIMT的因素多重線性回歸分析結(jié)果顯示，LncRNA MALAT1表達(dá)水平、TC、BMI共3項因素進(jìn)入回歸方程。回歸方程的復(fù)相關(guān)系數(shù)R=0.814?；貧w方程顯著性檢驗：F=40.382，P<0.05，回歸方程線性關(guān)系顯著，見表7。

表7 影響腦梗死患者CIMT因素的多重線性回歸分析

3 討論

腦梗死又名缺血性腦卒中，是臨床常見的腦卒中之一，約占腦卒中的70%，同時也是全球致死率第2、致殘率第3的腦血管疾病[8]。研究表明腦梗死發(fā)生與遺傳、肥胖、吸煙、糖尿病、高血脂等因素有關(guān)，但與腦梗死存在直接關(guān)聯(lián)因素尚不清楚。研究者認(rèn)為動脈粥樣硬化是導(dǎo)致腦梗死的病理基礎(chǔ)，尤其是在50歲以上的人群中[9]。醫(yī)療技術(shù)的快速發(fā)展，使腦梗死的治療效果有顯著改善，但復(fù)雜發(fā)病機制導(dǎo)致治療后復(fù)發(fā)率較高，治療后7天的復(fù)發(fā)率約為8-12%，3個月隨訪復(fù)發(fā)率高達(dá)20%左右[10]。腦梗死的發(fā)生和治療后復(fù)發(fā)可能與多種基因表達(dá)調(diào)控有關(guān)，但是目前尚不清楚。因此，進(jìn)一步探究腦梗死發(fā)病機制，對提高治療效果有重要的意義。

lncRNA是一種細(xì)胞內(nèi)源長鏈非編碼RNA，其轉(zhuǎn)錄本長200 nt以上，無法通過編碼蛋白質(zhì)發(fā)揮作用，主要與靶基因mRNA或靶蛋白形成復(fù)合體發(fā)揮調(diào)控功能，也可與mRNA發(fā)生互補結(jié)合，影響靶基因的表達(dá)，在表觀遺傳、轉(zhuǎn)錄、翻譯等多種層面均可發(fā)揮調(diào)控作用[11]，提示lncRNA在機體生命活動調(diào)控中有豐富的調(diào)控功能。最近研究表明LncRNA Bvrt、Fendrr、ANRIL、MIAT、Mhrt在心血管發(fā)育調(diào)控、心肌梗死發(fā)生、腦梗死發(fā)生等過程發(fā)揮著重要作用[12]，提示LncRNA可能參與心腦血管疾病發(fā)生發(fā)展過程。Zhu等研究表明LncRNA MALAT1基因多態(tài)性與中國漢族人群腦梗死發(fā)生有關(guān)[13]，提示LncRNA MALAT1可能影響腦梗死的發(fā)生。Cremer等研究顯示lncRNA MALAT1與動脈血管粥樣硬化和斑塊形成有關(guān)[6]，提示lncRNA MALAT1可能參與動脈血管粥樣硬化和斑塊形成，影響腦梗死的發(fā)生。本研究結(jié)果顯示腦梗死組患者血漿中l(wèi)ncRNA MALAT1表達(dá)水平顯著低于對照組，提示腦梗死發(fā)生與lncRNA MALAT1表達(dá)水平有關(guān)；且腦梗死患者不同腦血管病變類型血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平高低依次為：無SVD及LAD組、單純SVD組、單純LAD組、SVD合并LAD組，進(jìn)一步提示腦梗死患者腦血管病變類型可能與lncRNA MALAT1表達(dá)水平有關(guān)。Phrommintikul等研究表明TC水平與動脈粥樣硬化有關(guān)[14]，提示TC水平升高可能導(dǎo)致動脈發(fā)生粥樣硬化，間接影響腦梗死發(fā)生。本研究結(jié)果顯示lncRNA MALAT1表達(dá)水平與腦梗死患者TC水平有關(guān)，與TG、HDLC、LDLC水平無關(guān)，提示lncRNA MALAT1表達(dá)水平可能影響腦梗死患者TC水平。Chen等研究表明lncRNA MALAT1通過與miR-125b、p38 MAPK/NFκB調(diào)控膿毒癥引起的心肌炎和心臟功能損傷[15]，本研究多重回歸分析結(jié)果顯示lncRNAMALAT1是影響腦梗死患者CIMT的因素之一，推測lncRNA MALAT1可能通過復(fù)雜的調(diào)控通路影響腦梗死患者CIMT，但具體調(diào)控通路目前尚不清楚。

動脈粥樣硬化發(fā)生發(fā)展是以全身動脈大血管內(nèi)膜脂質(zhì)和炎性細(xì)胞不斷累積的慢性過程。慢性炎癥的持續(xù)發(fā)生積累可引起CIMT增厚。CIMT增厚早于動脈血管斑塊形成，因此多數(shù)研究者認(rèn)為CIMT增厚可作為心腦血管粥樣硬化的早期診斷指標(biāo)，作為心腦血管疾病診斷的重要替代點[16]。臨床上多采用檢測CIMT增厚作為腦動脈粥樣硬化發(fā)生的危險因素之一。本研究結(jié)果顯示腦梗死組患者CIMT顯著大于對照組，提示CIMT增厚與腦梗死發(fā)生有關(guān)。研究表明頸動脈CIMT每增加0.1 mm，則腦梗死發(fā)生風(fēng)險增加1.09倍[17]，提示CIMT增厚可作為腦梗死發(fā)生的潛在生物標(biāo)志物之一。腦梗死患者臨床病理資料分析結(jié)果顯示CIMT增厚與lncRNAMALAT1表達(dá)水平有關(guān)。本研究結(jié)果顯示lncRNA MALAT1表達(dá)下調(diào)與腦梗死發(fā)生有關(guān)，且本研究中腦梗死患者不同腦血管病變類型CIMT厚薄并不相同，厚薄依次為：SVD合并LAD組、單純LAD組、單純SVD組、無SVD及LAD組，提示腦梗死患者腦血管病變類型可能與CIMT有關(guān)。已有研究顯示lncRNA NOS3-AS和APOA1-AS表達(dá)水平與CIMT成正相關(guān)[18]，提示lncRNA MALAT1可能與CIMT存在相關(guān)性。Pearson相關(guān)性分析結(jié)果顯示，lncRNA MALAT1表達(dá)水平與CIMT呈負(fù)相關(guān)，提示lncRNA MALAT1表達(dá)下調(diào)可能促進(jìn)CIMT增厚。多重線性回歸分析結(jié)果顯示，LncRNA MALAT1表達(dá)水平、TC、BMI是影響腦梗死患者CIMT的因素，提示lncRNA MALAT1表達(dá)下調(diào)、高TC、BMI可能是引起CIMT增厚的重要因素，進(jìn)一步共同促進(jìn)腦梗死的發(fā)生。但是CIMT增厚與LncRNA MALAT1表達(dá)水平、TC、BMI是否存在直接關(guān)系有待進(jìn)一步研究。

綜上所述，腦梗死患者血漿中l(wèi)ncRNA MALAT1表達(dá)下調(diào)，CIMT增厚，血漿lncRNA MALAT1表達(dá)水平與腦梗死患者CIMT呈負(fù)相關(guān)，lncRNA MALAT1、BMI、TC是影響腦梗死患者CIMT的重要相關(guān)因素。但lncRNA MALAT1表達(dá)水平與CIMT在調(diào)控機制上的關(guān)系有待進(jìn)一步研究。