青島孕晚期婦女B族鏈球菌定植、藥敏及血清型分析

宋海燕，鄭 旭，由曉顏，劉豐海*

(1.青島大學醫學部 臨床檢驗診斷學，山東 青島266021；2.青島市市立醫院 檢驗科，山東 青島266011)

B族鏈球菌是一種β溶血的革蘭陽性球菌，常定植于婦女的直腸和泌尿生殖道，攜帶者多無臨床表現[1]。西方國家研究顯示，孕婦GBS的定植率為10%-35%[2]，比非妊娠婦女高出20倍[1]。孕婦攜帶GBS可導致尿路感染、早產和胎膜早破等疾病；新生兒GBS感染通常由垂直傳播引起，主要表現為肺炎、膿毒癥和腦膜炎。根據特異性莢膜多糖抗原將GBS分為10種血清型，即Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ-Ⅸ[1]，其中Ⅲ型含神經氨酸酶和脂磷壁酸最多，毒力最強。美國CDC[3]于2010年修訂了《圍產期B族鏈球菌疾病預防指南》，建議對所有妊娠35-37周婦女采集陰道下1/3及直腸標本，進行GBS篩查以判斷是否實施產前抗生素預防性治療。國內GBS流行病學研究起步較晚，尚缺乏統一的GBS篩查與防治策略。因此，了解本地區GBS的定植率、抗生素藥敏譜和血清型分布，以為臨床治療和預防GBS感染提供實驗室依據。

1 材料與方法

1.1 GBS菌株來源

收集2017年12月-2018年12月在我院門診就診的妊娠35-37周孕婦的陰道和直腸拭子，接種于血平皿，于37℃培養18-24 h，獲得GBS分離株54株。

1.2 儀器和試劑

VITEC 2 Compact全自動細菌鑒定儀(法國生物梅里埃公司)，哥倫比亞血平皿和血M-H瓊脂平皿(鄭州安圖生物工程股份有限公司)，藥敏紙片(英國OXOID公司)，血清分型試劑(日本Denka Seiken公司)。

1.3 GBS培養與鑒定

首先選擇血平皿上菌落較白，呈圓形，中等大小，周圍有乳光，多伴有β溶血環的可疑菌落，進行革蘭染色并在顯微鏡下觀察，發現革蘭陽性球菌再行CAMP實驗，最后采用VITEK 2 Compact鑒定儀對CAMP實驗陽性菌株進行鑒定。

1.4 GBS血清型鑒定

應用膠乳凝集法測定GBS的6種血清分型(Ia、Ib、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ和Ⅴ型)，操作步驟和結果判讀按照試劑說明書。若菌株與6種分型血清均不發生凝集，定義為未分型(non-typeable,NT)。

1.5 GBS藥物敏感性試驗

采用VITEC 2 Compact全自動細菌鑒定儀對54株細菌做藥物敏感性試驗。參照CLSI 2017標準對藥敏結果進行判定。質控菌株為肺炎鏈球菌ATCC 49619，質控菌株來源于本實驗室保存。

1.6 紅霉素誘導克林霉素耐藥試驗(D試驗)

采用雙紙片擴散法對紅霉素耐藥和克林霉素敏感或中介的菌株進行D試驗。將紅霉素(15 μg)和克林霉素(2 μg)貼在相鄰的位置，間距12-15 mm，35℃ 5-10% CO2孵育18-24 h，發現紅霉素耐藥，且鄰近紅霉素側克林霉素抑菌圈截平呈“D型”抑菌環，判定為誘導克林霉素耐藥試驗陽性，并將該分離株報告為“克林霉素耐藥”。

1.7 統計分析

采用WHONET 5.6 軟件分析藥敏結果。

2 結果

2.1 GBS的定植率

對2017年12月-2018年12月在我院門診就診的1265例孕晚期婦女進行GBS篩查，檢出GBS陽性孕婦54例，定植率為4.3%。

2.2 GBS菌株血清型分布

54株B族鏈球菌，共檢測到5種血清型，主要是血清Ⅲ型(44.4%)和Ⅰb型(31.5%)，其次為Ⅴ型(9.3%)、Ⅰa型(3.7%)、Ⅱ型(3.7%)和NT型(7.4%)，見表 1。

表1 GBS的血清型分布

2.3 GBS的藥物敏感性分布

54株GBS對青霉素、氨芐青霉素、利奈唑胺、萬古霉素均敏感，對紅霉素、克林霉素、左氧氟沙星和四環素的耐藥率較高分別為66.7%、75.9%、74.1%和53.7%，見圖1。以上54株GBS中，28株對紅霉素和克林霉素同時產生耐藥；8株對紅霉素耐藥而克林霉素敏感或中介，對這8株菌進行D試驗，發現D試驗陽性7株，陽性率為87.5%。

圖1 54株GBS菌株藥敏結果

3 討論

GBS是歐美國家圍產期新生兒侵襲感染的首要原因，可引起新生兒死亡或殘疾。新生兒感染主要由母嬰垂直傳播引起，國外一項前瞻性研究發現，約30%的孕婦感染GBS，其中30%-85%發生垂直傳播，由此導致的新生兒平均感染率達50%[1]。20世紀90年代，西方國家通過制定GBS預防指南，明顯降低了新生兒GBS的感染率和病死率，但我國尚未對GBS感染問題制定合理有效的預防措施。

GBS流行分布存在地域或民族差異，一篇meta分析[2]顯示，全球孕婦GBS總體定植率為18%，東亞地區為11%。我們發現青島孕晚期婦女GBS的定植率為4.3%，低于東亞地區的平均水平。國內GBS檢出率一般為3%-15%，如：南京[4]地區GBS定值率為4.17%，東莞[5]為8.2%，溫州[6]高達14.01%。本地區GBS定植率與南京地區相仿，處于偏低水平。

本研究中共檢出5種血清型(Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ型)，以Ⅲ型和Ⅰb型最常見，分別占44.4%和31.5%，有別于國內其他研究，臺灣[7]地區為Ⅵ型(35%)和Ⅲ型(25%)；東莞[5]以Ⅲ型(54.9%)和Ⅰa型(17.6%)為主。本地區的優勢血清型與國外報道也有較大差異，歐洲[8]主要是Ⅲ型(31.9%)、Ⅰa型(18.8%)和Ⅴ型(16.7%)；日本[9]以Ⅵ型(24.6%)和Ⅷ型(35.6%)為主。以此可見，GBS菌型譜分布具有明顯的區域差異性。引起新生兒侵襲性感染和孕婦不良妊娠結局常見的血清型是Ⅰa、Ⅰb、Ⅱ、Ⅲ和Ⅴ型，其中Ⅲ型最常見，在新生兒GBS感染總發病率中占61.5%[2]，該型也是本地區流行的主要血清型，應提高足夠重視。

指南[3]推薦青霉素作為產前抗生素預防的一線藥物，但在日本和韓國已發現對青霉素敏感性降低的GBS菌株，本研究中所有菌株對青霉素和氨芐青霉素均100%敏感，說明β內酰胺類抗生素仍可作為產前抗生素干預的首選藥物。指南[3]同時指出，對青霉素過敏者可選用紅霉素和克林霉素作為替代藥物，然而本試驗中GBS對紅霉素和克林霉素耐藥率均較高，分別為66.7%和75.9%，高于上海[10](53.4%和50.2%)、東莞[5](64.9%和52.4%)和臺灣[7]地區(48.9%和51.4%)。此外，本研究中D試驗陽性率為87.5%，高于國內其他報道[10]，可能與GBS的表面蛋白、耐藥基因、分子分型及區域差異相關。因此，不建議本地區將大環內酯類抗生素作為二線藥物用于治療母嬰GBS感染。

本研究還發現，該地區GBS對左氧氟沙星的耐藥率高達74.1%，顯著高于東莞、上海[5,10]等地。GBS對喹諾酮類藥物較高水平耐藥主要由parC和gyrA基因聯合突變引起，提示我們應加強GBS的耐藥檢測，防止耐藥基因的累積或爆發。

總之，青島育齡婦女GBS定植率較低，血清型主要為Ⅲ型和Ⅰb型。但是，本地區GBS對大環內酯類和喹諾酮類抗生素均表現出較高水平的耐藥率，所以在抗GBS感染中，仍推薦首選β內酰胺類藥物，對青霉素過敏者可選用萬古霉素。本研究對預防母嬰GBS感染具有重要意義，也為國內GBS大規模流行病學研究和GBS疫苗研發提供理論依據。