超聲造影聯合細胞學Galectin-3檢測對Bethesda Ⅲ類甲狀腺結節良惡性的鑒別診斷價值

薛楠楠 顏艷 汪超峰

(1南通市第二人民醫院超聲科，江蘇 南通 226002；2寧波市鄞州區第二醫院腎內科)

隨著體檢的普及和超聲診斷技術的進步，甲狀腺結節的早期檢出率明顯增加，有0.5%～5.0%最終確診為惡性，病理類型以微小乳頭狀癌為主，手術切除是主要治療方案，5年總生存率高達80%～95%，預后較好，但仍有0.3%～3.0%患者早期或術后出現腫瘤復發或轉移〔1〕。據數據顯示〔2〕，60歲以上是甲狀腺癌的高發階段，老年患者缺乏體檢意識，早期發現結節而不愿意隨訪，延誤治療發展至惡性的可能性更大。細針穿刺細胞學(FNAC)檢查可進一步判斷腫瘤的病理類型，與手術切除病理有較好的吻合率〔3〕，缺點是結節越小，穿刺陽性率和病理陽性率可能越差。根據Bethesda細胞學診斷可分為Ⅰ～Ⅵ類，其中Ⅲ級為意義不明確的細胞非典型病變或濾泡性病變，介于良性與惡性之間，總體檢查率2%～28%，經最終手術切除病理證實為惡性率6.0%～42.1%〔4〕，如果早期不能正確判斷其良惡性，將影響臨床隨訪或早期積極手術的選擇，也可能影響臨床轉歸。超聲造影(CEUS)通過增強組織間對比性，反映結節內細胞的代謝能力，結合自帶定量評估軟件測量結節峰值強度(PI)客觀評估細胞內微血管的血流灌注情況，有效彌補了常規彩色多普勒對微血管的顯示不足〔5〕。Galectin-3屬于半乳糖凝聚素家族成員，主要發揮細胞間黏附、免疫調節、炎癥反應、惡性腫瘤的侵襲和轉移及細胞周期調控和凋亡方向等生物學功能〔6〕，在多種惡性腫瘤，如乳腺癌、結腸癌中表達升高與腫瘤的發生和發展具有密不可分的聯系〔7〕。部分研究指出〔8,9〕，Galectin-3表達陽性在甲狀腺惡性結節中檢查率較高，與腫瘤TNM分期、病理類型和分化級別有較大的聯系。基于此，本研究旨在探討FNAC檢查證實為Bethesda Ⅲ類甲狀腺結節采用CEUS和組織Galectin-3分子表達鑒別結節良惡性質的應用價值。

1 對象與方法

1.1對象資料 選擇2016年12月至2017年12月入南通市第二人民院行FNAC檢查診斷為Bethesda Ⅲ類甲狀腺結節的老年患者共110例(140個結節)，納入標準：①年齡60～80歲；②至少存在1個可測量直徑的結節；③均采用手術切除獲得病理診斷；④完成結節Galectin-3分子檢測和CEUS檢查；⑤取得知情同意，臨床資料完善。排除標準：①頸部手術、外傷史；②超聲圖像顯示不清；③術前采用131I或其他生物治療。110例患者中男52例，女58例，年齡62～78〔平均(66.8±6.2)〕歲，結節個數1～3〔平均(1.5±0.4)〕個，最大直徑3.5～39.5〔平均(20.5±7.8)〕mm。

1.2研究方法 經手術切除病理確診良性結節100個(患者80例)，惡性結節40個(患者30例)；所有結節同時進行組織Galectin-3分子免疫組化染色和CEUS檢查。術前采用TI-RADS進行分級，共分5級，1～3級為良性，4～5級為惡性；CEUS分析增強模式、定量評估軟件測量結節PI值；FNAC檢查診斷結節細胞學分類，進行組織Galectin-3分子免疫組化染色，Bethesda細胞學診斷分為Ⅰ～Ⅵ級，Ⅰ級為標本不滿意，Ⅱ級為良性病變，Ⅲ級為意義不明確的細胞非典型性病變或濾泡性病變，Ⅳ級為濾泡性腫瘤；Ⅴ級為可疑惡性腫瘤，Ⅵ級為惡性腫瘤。

1.3CEUS檢查 釆用日立HITACHI HIVISION VISION Preirus(大二郎神)Eup-L74M彩色超聲診斷儀和高頻線陣探頭，頻率為6～13 MHz，造影機械指數0.06～0.08；聚焦點位于甲狀腺結節的下緣，提高圖像質量，增益調至僅顯示甲狀腺被膜，固定參數不變，釆用雙幅對比模式。進入造影模式，縱切清晰顯示結節及周圍甲狀腺組織，采用Bracco Sono Vue造影劑混勻后經肘靜脈快速團注，醫生同步按下計時鍵及動態存儲鍵，連續動態觀察2 min；第1次注射造影劑后點擊Flash爆破微泡，10 min后開始第二次操作。用QLAB定量分析軟件進行脫機分析，手動勾畫感興趣區甲狀腺結節及周圍組織，獲得峰值強度(PI)擬合曲線參數。

1.4組織Galectin-3免疫組化染色的主要步驟 常規制作組織切片，厚度5 μm，經脫蠟、水化、抗原修復后，滴加大鼠抗人Galectin-3一抗(江蘇碧云天科技有限公司，工作濃度1∶2 000)，置于濕盒內 4℃孵育過夜，以正常大鼠IgG代替一抗作為陰性對照；洗滌后滴加羊抗大鼠二抗(江蘇碧云天科技有限公司，工作濃度1∶500)，置于濕盒中27℃孵育 20 min；洗滌后滴加辣根酶標記鏈霉卵白素工作液(江蘇碧云天科技有限公司)，置于濕盒中27℃孵育 20 min，洗滌、二氨基聯苯胺(DAB)顯色、封片、觀察。結果采用半定量法，依據染色強度和染色細胞所占比率；以胞質或胞核黃染至深棕色為陽性，染色強度中無陽性染色為0分，弱染色為1分，中等強度染色為2分，強染色為3分；陽性細胞數比率≤5%為0分，6%～25%為1分，26%～50%為2分，51%～75%為3分，>75%為4分；兩項乘積0～3分為陰性，4～12分為陽性。

1.5統計學方法 以SPSS20.0統計軟件進行t及χ2檢驗。

2 結 果

2.1結節惡性組與良性組患者基本資料比較 惡性組與良性組患者的性別、年齡、結節TI-RADS分級、結節最大直徑比較差異無統計學意義(P>0.05)。見表1。

2.2兩組結節Galectin-3表達和CEUS檢查的比較 惡性組結節Galectin-3表達陽性率顯著高于良性組(P<0.05)，CEUS增強模式以早期低增強為主，結節PI值顯著低于良性組(P<0.05)。見表2。

2.3結節Galectin-3表達與患者臨床資料的關系 結節Galectin-3陽性表達與患者性別、年齡、結節最大直徑大小無關(P>0.05)。見表3。

表1 結節惡性組與良性組患者的基本資料比較

表2 兩組結節Galectin-3表達和CEUS檢查的比較〔n(%)〕

表3 結節Galectin-3表達與患者臨床資料的關系〔n(%)〕

3 討 論

超聲或CT引導FNAC檢查進行細胞學診斷已成為手術病理的重要輔助方法，具有穿刺成功率高、適應范圍廣、結果可靠準確性高的優點〔10〕。FNAC檢查結果根據Bethesda細胞學診斷Ⅲ級介于良性與惡性之間，惡性率6%～42.1%，變化幅度較大，一旦漏診將影響手術機會和時機，延誤治療導致臨床預后不佳〔11〕。如果不進行下一步確診檢查，多數建議定期隨訪或復查FNAC檢查，導致漏診或誤診率增加，增加醫學過度檢查和患者痛苦〔12〕。因此，針對BethesdaⅢ類甲狀腺結節有必要確定良惡性，但是一味強調手術切除無疑增加良性結節的手術治療，不符合指南推薦，也增加了患者創傷〔13〕。

本研究結果提示，手術病理最終確診惡性結節40個，惡性率28.57%，TI-RADS分級對BethesdaⅢ類甲狀腺結節的良惡性可能無法做出準確判斷。此類結節因缺乏典型的形態學改變而不能被二維超聲診斷〔14〕，但CEUS檢查通過增強組織間對比性，反映結節內細胞的代謝能力，結合自帶定量評估軟件測量結節PI客觀評估細胞內微血管的血流灌注情況，有效彌補了常規彩色多普勒對微血管的顯示不足。實時CEUS檢查檢出甲狀腺微小結節惡性陽性率與手術結果符合率達93.33%，主要征象有結節呈極低回聲，邊界模糊，無包膜，形態多樣化，不規則，砂礫樣鈣化，后方回聲較弱，部分結節內血流差；不均勻增強，正常甲狀腺組織低增強；有助于鑒別惡性結節〔15，16〕。本研究結果也提示，惡性組結節CEUS檢查增強模式以早期低增強為主，結節PI值低于良性組。

此外，本研究中惡性組結節Galectin-3表達陽性率顯著高于良性組，Galectin-3與細胞間黏附、惡性腫瘤的侵襲和轉移、細胞周期調控和凋亡等行為密切相關，在乳腺癌、結腸癌中表達升高與腫瘤的發生和發展有直接聯系。有學者指出，Galectin-3表達陽性在甲狀腺惡性結節中檢查率較高，與腫瘤TNM分期、病理類型和分化級別有較大的聯系〔16〕。研究發現〔17〕，Galectin-3可與β-半乳糖特異性結合，在惡性腫瘤患者體內濃度是健康者30多倍，發生轉移的患者濃度遠高于原位腫瘤。Galectin-3可促進腫瘤細胞的惡性增殖，表達腫瘤干細胞特性，與Wnt/β-catenin信號通路激活密切相關〔18〕。Galectin-3可抑制腫瘤細胞的凋亡，誘導抗凋亡基因Bcl-2表達，可能與抑制了MAPK信號通路活性有關〔19〕。Galectin-3可誘導上皮性和腺體性腫瘤發生上皮間質轉化，如甲狀腺結節〔20〕。Galectin-3還可以刺激表達多種細胞因子如血管內皮生長因子(VEGF)〔21〕和炎癥因子如IL-6〔22〕共同參與腫瘤的發生和發展過程。陸偉輝等〔23〕指出，甲狀腺微小乳頭狀癌組織中Galectin-3高表達與腫瘤轉移密切相關。

綜上所述，CEUS聯合結節Galectin-3分子表達檢測能夠為FNAC檢查診斷老年Bethesda Ⅲ類甲狀腺結節的良惡性質提供更加豐富的生物學信息，其中CEUS檢查增強模式以早期低增強為主，Galectin-3陽性表達有助于結節惡性的判斷。