五味消澼洗液對三硝基苯磺酸誘導潰瘍性結腸炎小鼠各臟器的影響

支晨陽 劉屹 于哲 翟世純 李為俊 王亞倩 劉志紅 高海成 周建華

(1長春中醫藥大學附屬醫院肛腸科，吉林 長春 130000；2吉林大學藥學院)

潰瘍性結腸炎(UC)又稱潰瘍性非特異性結腸炎，是一種病因尚未明確的疾病〔1〕。本病主要臨床表現包括腹痛、腹瀉、里急后重和黏液膿血便，少數病人常伴有發熱、體重減輕等全身癥狀，還伴有皮膚、關節、眼、口和肝膽等腸外表現〔2〕。據報道，UC可發病在任何年齡階段，多見于20～40歲青壯年，男女患病率無明顯差異〔3〕。現代醫學治療UC的藥物主要包括氨基水楊酸類、糖皮質激素類、抗生素及免疫抑制等〔4〕。目前中藥保留灌腸治療UC以經方、驗方居多，而被絕大多數醫家共同運用的中醫處方或成藥較少。五味消澼洗液是中藥復方制劑，具有活血化瘀，消炎止痛的功效，本文分析其對UC小鼠各臟器的影響。

1 資料與方法

1.1試劑和儀器 徠卡4215切片機(德國)；PM-10AO 全自動顯微照相裝置(日本)。

1.2實驗動物造模及分組 Balb/c小鼠24只，由沈陽動物室提供。用三硝基苯磺酸(TNBS)分別配成 50%,55% 和70%的濃度。小鼠在造模前禁食不禁水24 h，將小鼠固定在鼠解剖臺上，用10%水合氯醛(3 ml/kg)麻醉，用石蠟油潤滑聚丙烯管(外徑2 mm)，緩慢插入小鼠肛門上段8 cm 結腸內即可，注入5%的TNBS 與50%乙醇以12∶5 比例混合的復合物每只0.8 ml(其中TNBS 120 mg/kg)，提起小鼠尾部，持續倒置1 min，使造模劑充分進入小鼠腸腔內，使小鼠頭部傾斜向下平臥，捏緊肛門口2 min，至自然清醒，正常飼養。造模后第3 天當天測量體重后，各組開始保留灌腸給藥，五味消澼洗液高、中、低劑量治療組(200、100、50 μl/g)及陽性藥組(美沙拉嗪)均按上述劑量給藥。正常對照組和模型組給予等量生理鹽水。連續給藥14 d，1 次/d。

根據成人灌腸用藥40 g/d，按正常成年人標準體重60 kg來算，單位劑量0.667 g/kg，小鼠低、中、高劑量治療組用藥按人的5、10、20 倍來算。美沙拉嗪腸溶片按成人用藥3 g/d，正常成年人標準體重60 g/kg 計算，單位劑量是0.05 g/kg，小鼠灌腸中藥按人的10 倍來算，即0.5 g/kg。

1.3各臟器HE染色 心、肝、腎及結腸等組織在4%多聚甲醛中固定，經石蠟包埋，切成0.5 μm厚度，HE染色，鏡下觀測各臟器組織病理變化。

1.4統計學處理 采用SPSS20.0軟件進行方差分析。

2 結 果

2.1各組心臟、腎臟和脾臟的重量變化 各組心、腎、臟臟重量變化差異不顯著(P>0.05)。見表1。

表1 各組心臟、腎臟和脾臟的重量變化

2.2小鼠解剖 模型組明顯有炎癥出現，而治療組結腸炎癥減輕(圖1)。

圖1 各組結腸解剖

2.3結腸 正常對照組黏膜和表面均無潰瘍或增生， 腸蠕動正常。在模型組可見間質淋巴細胞，結腸黏膜可見慢性炎癥。 腺上皮細胞觀察到嗜中性粒細胞和淋巴細胞，漿細胞(上皮細胞看到嗜中性粒細胞，其特征在于急性炎癥和損傷，血漿細胞和淋巴細胞是慢性炎癥特征)。 此外，可見血管擁塞(圖2)。陽性藥組、各劑量治療組其結腸炎癥減輕，癥狀降低。說明五味消澼洗液調控結腸炎的作用。

2.4心臟 正常對照組心肌細胞整齊排列，肌肉定期排列，亞細胞結構如線粒體豐富，聚集，呈正常形態。 模型組可見心肌細胞變性和局灶性炎癥細胞浸潤及間質性結締組織增生。陽性藥組和各劑量治療組心肌炎癥細胞減少，間質性結締組織增生降低(圖3)，說明五味消澼洗液可能具有保護心肌作用。

2.5腎臟 正常對照組腎臟無明顯病理改變。模型組管狀上皮細胞脫落并伴有水腫。 局灶性炎癥細胞浸潤，腎小球系膜細胞增殖。 大部分腎小球基底膜出現增厚，表明模型組腎臟病變顯著，陽性藥組和各劑量治療組腎小球系膜細胞炎癥減輕(圖4)，說明五味消澼洗液可能具有保護腎臟的作用。

圖2 各組結腸HE染色(×200)

2.6肝臟 正常對照組的肝臟呈現正常的肝小葉結構和肝細胞結構清晰。模型組可見UC導致組織病理學損傷和廣泛的肝細胞損傷，如門靜脈炎癥，脂肪變化和靜脈充血。陽性藥組和各劑量治療組肝臟組織損傷和肝細胞損傷程度減輕(圖5)，說明五味消澼洗液可能具有保護肝臟的作用。

圖3 各組心臟HE染色(×200)

圖4 各組腎臟HE染色(×200)

圖5 各組肝臟HE染色(×200)

3 討 論

慢性UC過程中，可能會誘發多種器官病變〔5〕，因此降低結腸病變，保護各器官免受破壞對慢性UC患者的治療具有較強的臨床意義。五味消澼洗液中藥復方制劑不僅能夠治療TNBS誘發的小鼠UC，調控小鼠的體重變化；還能夠保護慢性UC小鼠的各個臟器，這種保護作用的產生可能與五味消澼洗液組成的中藥復方制劑具有抗炎抗氧化、提高胰腺的功能及調節免疫的作用有關系。其作用機制可能與調節機體免疫功能，抗菌抗感染，調節腸道菌群，改善血液循環，抗微血栓，抗氧化自由基損傷，抗腫瘤等有關〔6〕。但由于中藥成分復雜，其作用的有效成分、有效濃度、具體機制仍待深入研究，通過保留灌腸這種給藥方式可以避免藥物的首過效應，減少對機體的刺激，局部藥液濃度增高，效果也會更為理想。