夏枯草抗菌活性研究

【摘 要】目的：研究夏枯草各提取部位抗菌活性。方法：夏枯草果穗粉碎后先用乙醇提取，再經萃取得到總提取物部分、石油醚提取部分、乙酸乙酯提取部分、正丁醇提取部分、水提取部分。并經過最低抑菌濃度實驗研究各提取部位的抗菌活性。結果：研究發現各提取部位均有不同程度的抗菌活性，其中乙酸乙酯的抗菌活性最強。

【關鍵詞】夏枯草;化學成分;抗菌

夏枯草（Prunella vulgaris L.）又名夕句、乃東、燕面、鐵色草，其味苦、辛，性寒，無毒。歸肝、膽經。主治肝虛目痛（冷淚不止，羞明畏日）;赤白帶下;血崩;產后血暈，心氣欲絕;打傷，刀傷;汗斑白點;瘰疬等癥[1]。

夏枯草為臨床常用中藥材，其化學成分主要包括三萜類、苯丙素類、甾醇類、黃酮類、香豆素類、醌類、酚類化合物、有機酸類、揮發油和糖類等。現代藥理學研究發現，夏枯草具有抗菌、抗炎、調節免疫、抗氧化、清除自由基、抗腫瘤、降血壓、降血糖、調節血脂、神經保護、抑制HIV病毒感染等藥理活性[2]。

1 實驗儀器與材料

1.1 實驗儀器

4IK3ORA-C型旋轉蒸發器（鞏義 予華），GR85DA型高壓滅菌鍋（廈門 致微），超凈工作臺（蘇州 凈化）。

1.2 實驗材料

夏枯草：四川野生夏枯草（Prunella vulgaris L），由安徽醫科大學李寧教授鑒定;大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副傷寒沙門菌購自南京樂診;培養基購自北京三藥。

2 待測樣品處理

夏枯草果穗200g，粉碎在60℃條件下經90%乙醇溶液提取3次，提取液減壓濃縮得總提取物部分。將總提取物部分懸浮于蒸餾水中分別用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取三次。最終得到總提取物部分1.5g，石油醚提取部位6.0g，乙酸乙酯提取部位3.4g，正丁醇提取部位1.88g，水提取部位1.3g。

3 抗菌活性研究

3.1 待測樣品的的稀釋

分別稱取待測樣品25.6mg，置于20 ml的無菌 Ep 管，加入1DMSO溶解，并9 ml的無菌水，最終得 2560μg/mL儲備液。分別取2560μg/mL溶液4mL、2mL、2mL，分別加入4mL、6mL、14mL無菌水，分別得8mL 1280μg/mL、8mL 640μg/mL、16mL 320μg/mL的樣品溶液;取320μg/mL 溶液4mL、2mL、2mL，分別加入4mL、6mL、14mL無菌水，分別得8mL 160μg/mL、8mL 80μg/mL、16mL 40μg/mL的樣品溶液;取40μg/mL溶液4mL、2mL、2mL，分別加入4mL、6mL、14mL無菌水，分別得8mL 20μg/mL、8mL 10μg/mL、16mL 5μg/mL的樣品溶液;取5μg/mL溶液4mL、2mL、2mL，分別加入4mL、6mL、14mL無菌水，分別得8mL 2.5μg/mL、8mL 1.25μg/mL、8mL 0.625μg/mL的樣品溶液。

3.2 菌液制備

將菌株干粉分別加入各自的姨酪大豆胨液體培養基的錐形瓶中，在37℃條件下培養24 h，然后將錐形瓶培養放在搖床上200 r/min，震蕩10 min，將菌株制成懸液。

分別取上述培養基中試驗菌液1ml（剩余試驗菌液置于2-4℃冰箱內保存），加入9ml 0.9%的無菌氯化鈉溶液制成10-1菌懸液;從10-1菌懸液中取出1ml，加入9ml 0.9%的無菌氯化鈉溶液制成10-2菌懸液;依次制備10-3菌懸液，10-4菌懸液，10-5菌懸液，10-6菌懸液，10-7菌懸液，10-8菌懸液。分別從10-6菌懸液，10-7菌懸液，10-8菌懸液中取1ml菌懸液置直徑90mm的無菌平皿中，注人20ml溫度不超過45℃熔化的胰酪大豆胨瓊脂培養基（每個濃度平行三組），混勻，凝固，倒置培養24h后取出并計數。

3.3 最低抑菌濃度實驗

培養基的分裝：每個試管分裝 9mL 融化的胰酪大豆胨瓊脂培養基，試管口多余培養基用紙巾擦掉，加橡膠塞，7支一捆包扎，121℃滅菌30min。

分別取上述待測樣品溶液1mL和含有約106cfu菌種的菌液分別加入9cm無菌平板，加入上述姨酪大豆胨瓊脂培養基9mL，立即混勻，置水平臺待凝后得到濃度依次為 128、64、32、16、8、4、2、1、0.5、0.25、0.125、0.0625μg/mL 的含待測樣品和待測菌種的平板（每個濃度重復三次），置于37℃恒溫培養箱倒置培養16小時，取出觀察結果，記錄生長狀況。能夠抑制受試菌生長的最低藥物濃度即為化合物對該菌株的最低抑菌濃度（MIC），取三次實驗中的最高值作為最終的 MIC。

4 抗菌活性研究結果

夏枯草果穗最低抑菌濃度結果見表1，表2，表3。

5 結果討論

實驗結果顯示，夏枯草乙酸乙酯部分在128 μg/mL、64 μg/mL、32 μg/mL濃度下對大腸埃希菌、金黃色葡萄球菌、乙型副傷寒沙門菌均有抑制作用，而且其抗菌活性隨濃度增加而增加。石油醚部位在所設置的實驗濃度下為表現出抑菌活性，而其他幾個提取部位對不同的細菌也表現出了不同的抑菌活性。結果表明夏枯草各提取部位表現出相應的的抗菌活性，其中乙酸乙酯部分的抗菌活性最強，石油醚的抗菌活性最弱，在最高濃度的實驗組中，幾乎沒有表現出來其抗菌活性。該實驗結果為夏枯草果穗的進一步研究與開發奠定了一定的理論基礎。

參考文獻

[1]本草綱目[M].第二冊，第十五卷，958.

[2]張金華，邱俊娜，王路等.夏枯草化學成分及藥理作用研究進展[J].中草藥，2018，49（14）：3432-3440.

作者信息

馬偉（1987-），男，回族，碩士研究生，亳州學院，中藥學院，實驗室主任，講師。研究方向為中藥化學，天然藥物（產物）化學，中藥藥劑學。